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大麻二酚对小鼠肝纤维化抗氧化作用

中国公共卫生 2022年第2期38卷 181-185页

作者：马润舒远辉谢娜周艳项一宁王豫萍贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫检验科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院病理科

目的探讨大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCL_(4))构建小鼠肝纤维化模型的抗氧化作用。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,每组8只,依次为对照组,模型组,低、高剂量CBD组(4、8 mg/kg),秋水仙素组(0.2 mg/kg)。对照组小鼠腹腔注射花生油,剩余小... 详细信息

目的探讨大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCL_(4))构建小鼠肝纤维化模型的抗氧化作用。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,每组8只,依次为对照组,模型组,低、高剂量CBD组(4、8 mg/kg),秋水仙素组(0.2 mg/kg)。对照组小鼠腹腔注射花生油,剩余小鼠按照5 mL/kg注射30%CCL_(4),每周2次,连续10周。CBD组和秋水仙素组在造模的同时每次注射相应剂量药物,对照组和模型组注射生理盐水。自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);天狼星红染色检查肝组织胶原沉积情况;试剂盒检测肝组织氧化应激相关成分超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA);蛋白印迹(WB)检测肝组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91phox、核转录相关因子(Nrf2)表达情况。结果与模型组比较,低、高剂量CBD组和秋水仙素组肝指数[分别为(4.71±0.34)%、(4.68±0.20)%、(4.24±0.40)%]、血清ALT含量[分别为(79.38±14.79)、(87.13±9.40)、(77.88±3.76)U/L]明显降低(P<0.05),胶原沉积显著减少(P<0.05),肝组织SOD活力[分别为(259.90±36.05)、(223.13±37.49)、(246.39±53.49)U/mgprot]、GSH含量[分别为(63.07±16.71)、(100.38±22.44)、(96.39±19.40)nmol/mgprot]明显增高(P<0.05),而MDA含量[分别为(2.48±0.43)、(2.74±0.88)、(2.84±0.87)nmol/mgprot]显著降低(P<0.05),gp91蛋白表达降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达增加(P<0.05)。结论CBD对CCL_(4)诱导的小鼠肝纤维化有一定的保护作用,其作用机制可能与调节gp91、Nrf2蛋白表达,减少自由基、抑制脂质过氧化相关。

关键词：大麻二酚四氯化碳肝纤维化氧化应激

重症肌无力患者治疗间期外周血记忆T细胞和滤泡T细胞及相关细胞因子水平变化的监测

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第3期38卷 257-262页

作者：马岚吴通前何菁菁沈雪余芳贵州医科大学医学检验学院临床微生物及免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细... 详细信息

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中枢记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+))细胞、效应记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-)细胞、滤泡辅助T(CD4^(+)CXCR5^(+))细胞、滤泡调节T(CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+))细胞所占百分比情况;利用流式液相蛋白定量技术(CBA)检测外周血白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-12、IL-17及γ干扰素(IFN-γ)的水平;ELISA检测IL-7及AChR抗体的含量。结果与健康对照相比,MG患者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞及CD4/CD8比值未见明显变化,CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+)T细胞明显降低,CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)T细胞明显增加;MG患者IL-2、IL-4、IL-12、IL-17及IFN-γ水平均高于健康对照,而IL-7低于健康对照,AChR抗体水平无明显变化。各细胞因子水平与各T细胞亚群间未发现有明显相关性。结论治疗间期MG患者存在较为独特的记忆T细胞和滤泡T细胞表型及相关细胞因子水平变化。

关键词：重症肌无力记忆T细胞滤泡T细胞细胞因子细胞免疫

S100A4在肥大细胞的表达及血清S100A4含量的检测对过敏性哮喘的诊断价值

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：莫诗卉陶甜王晨予晏世荣李静吴通前余芳贵州医科大学附属医院临床研究中心贵州医科大学医学检验学院微生物及免疫教研室

目的初步研究S100钙结合蛋白A4（S100A4）是否参与肥大细胞脂质代谢以及对过敏性哮喘的临床意义。方法从基因表达数据集（GEO）数据库中下载过敏性哮喘相关的单细胞RNA（scRNA）表达矩阵GSE213085，使用R包进行数据可视化处理。通过体... 详细信息

目的初步研究S100钙结合蛋白A4（S100A4）是否参与肥大细胞脂质代谢以及对过敏性哮喘的临床意义。方法从基因表达数据集（GEO）数据库中下载过敏性哮喘相关的单细胞RNA（scRNA）表达矩阵GSE213085，使用R包进行数据可视化处理。通过体外培养C57肥大细胞，慢病毒感染肥大细胞建立S100A4低表达的细胞系，实时荧光定量PCR和Westernblot法分别检测S100A4的mRNA和蛋白水平，实时荧光定量PCR检测脂质代谢相关基因ATP柠檬酸合成酶（ACLY）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）、CD36、溶质载体家族27A成员6（SCL276）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的mRNA水平。采集过敏性哮喘的患者和健康对照人群外周血，ELISA检测血清S100A4水平，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，析S100A4对疾病的诊断效能，并计算曲线下面积（AUC）。结果用scRNA数据集GSE213085鉴定出26225个细胞，提取出肥大细胞进行后续分析，功能富集分析结果表明，肥大细胞特征基因集中于脂质代谢相关的途径。肥大细胞低表达S100A4时，其脂质代谢相关基因ACLY、ACC1、CD36、SCL26α6、PPARα表达下调。ELISA检测显示过敏性哮喘患者血清S100A4较健康对照人群升高，ROC曲线发现，血清S100A4含量对过敏性哮喘具有一定诊断效能（AUC=0.746）。结论 S100A4可能参与肥大细胞脂质代谢调节，血清S100A4检测对过敏性哮喘诊断可能有一定价值。

关键词：过敏性哮喘肥大细胞 S100钙结合蛋白A4(S100A4) 生物信息学分析受试者特征曲线

防气溶胶污染的UDG-LAMP-LFD核酸检测体系的建立

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 147-152页

作者：陈星湘费樱黄月明汪浪王榕吴青青贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州省人民医院湖南医药学院

目的建立一种基于热敏UDG酶防污染的、环介导等温扩增(LAMP)技术及横向流动试纸条(LFD)联合使用的核酸检测方法,实现对HPV18的快速、可视化检测。方法使用LAMP在线引物设计软件设计HPV18特异性引物,同时引入热敏UDG酶,建立UDG-LAMP检... 详细信息

目的建立一种基于热敏UDG酶防污染的、环介导等温扩增(LAMP)技术及横向流动试纸条(LFD)联合使用的核酸检测方法,实现对HPV18的快速、可视化检测。方法使用LAMP在线引物设计软件设计HPV18特异性引物,同时引入热敏UDG酶,建立UDG-LAMP检测体系,优化T/U碱基比例,设置对照试验验证热敏UDG酶防污染能力;根据LFD要求,设计特异性同化探针及淬灭探针,建立UDG-LAMP-LFD核酸检测体系并对LAMP反应时间进行优化;对该体系进行灵敏度、特异性及临床样品的验证,并与QPCR结果进行比较。结果优化的LAMP反应时间为40 min, T/U比例为1∶1;热敏UDG酶孵育时间为10 min,防污染效果显著;LFD结果判读耗时5 min,整个检测时间为55 min。该UDG-LAMP-LFD核酸检测体系在以HPV18作为检测对象时,灵敏度10^(3)拷贝/μl;29例临床样品的验证结果与QPCR检测结果完全一致。结论建立的UDG-LAMP-LFD检测体系可快速、特异、灵敏、可视化的检测HPV18,同时可避免气溶胶污染导致的假阳性。该方法对实验设备及工作人员要求较低,适合在偏远地区及基层医院使用。

关键词：热敏UDG酶环介导等温扩增技术横向流动试纸条人乳头瘤病毒18型气溶胶污染

人β防御素3和γ干扰素在MAPK信号通路中的相互诱导及联合抗甲型流感病毒的机制

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贵州医科大学学报 2023年第4期48卷 373-382页

作者：唐源祝洁杨小余张乙进罗红江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州贵阳550004

目的探讨人β防御素3(HBD3)和γ干扰素(IFN-γ)在丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中相互诱导作用及体外联合抗甲型流感病毒(IAV)H1N1的作用。方法不同剂量IFN-γ(12.5、25.0、50.0、100.0μg/L)或HBD3(0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L... 详细信息

目的探讨人β防御素3(HBD3)和γ干扰素(IFN-γ)在丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中相互诱导作用及体外联合抗甲型流感病毒(IAV)H1N1的作用。方法不同剂量IFN-γ(12.5、25.0、50.0、100.0μg/L)或HBD3(0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L)分别作用人支气管上皮细胞BEAS-2B 4、12、24、48 h,另设立p38 MAPK、ERK和JNK通路抑制剂预处理后、用IFN-γ(25.0μg/L)或HBD3(1.00 mg/L)处理BEAS-2B细胞4 h, qRT-PCR和ELISA检测HBD3及IFN-γ基因和蛋白表达,Western blot检测p-p38 MAPK、p-ERK、p-JNK蛋白表达;25.0μg/L IFN-γ、1.00 mg/L HBD3、HBD3 siRNA转染及IFN-γ中和抗体(0.50 mg/L)单独或联合作用BEAS-2B细胞、用5×TCID50H1N1感染,qRT-PCR和Western blot检测IAV核蛋白(NP)基因和蛋白的表达情况。结果在BEAS-2B细胞中,不同剂量的IFN-γ与HBD3可互相诱导表达(P0.05)。结论在BEAS-2B细胞中,HBD3和IFN-γ可通过MAPK通路相互诱导表达,且2者联合使用可增强抗IAV H1N1的作用。

关键词：甲型流感病毒人β防御素3 γ干扰素丝裂原活化蛋白激酶

利妥昔单抗对多发性硬化症复发期患者外周血NK细胞功能

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贵州医科大学学报 2024年第5期49卷 691-696页

作者：何菁菁晏世荣吴通前杨秀兰沈雪余芳贵州医科大学医学检验学院临床微生物及免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床研究中心贵州贵阳550004

目的观察利妥昔单抗对多发性硬化症(MS)复发期患者外周血NK细胞活化及ADCC功能的影响及机制。方法选取MS复发期病例(n=28),并将无自身免疫疾病及重大感染疾病的受试者作为健康对照组(n=25),提取两组被检者外周血单个核细胞(PBMCs),检测... 详细信息

目的观察利妥昔单抗对多发性硬化症(MS)复发期患者外周血NK细胞活化及ADCC功能的影响及机制。方法选取MS复发期病例(n=28),并将无自身免疫疾病及重大感染疾病的受试者作为健康对照组(n=25),提取两组被检者外周血单个核细胞(PBMCs),检测利妥昔单抗处理前后B细胞、自然杀伤细胞(NK)细胞比例及NK细胞活化水平;建立PBMCs与人慢性髓源白血病细胞系K562细胞直接接触共培养体系,检测利妥昔单抗处理后NK细胞抗体依赖细胞介导细胞毒性作用(ADCC)的效应因子释放。结果利妥昔单抗能诱导MS复发期组和健康对照组外周血中B细胞和NK细胞比例显著下调,且能诱导健康对照组的NK细胞活化及ADCC功能的显著上调,但对MS复发期患者NK细胞的活化及ADCC功无明显影响。结论利妥昔单抗可诱导MS复发期患者B细胞及NK细胞比例下调,但对NK细胞的活化及其ADCC功能无明显影响。

关键词：多发性硬化症利妥昔单抗自然杀伤细胞细胞活化效应因子抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用

耐受性树突状细胞可抑制胶原诱导性关节炎大鼠脾脏细胞的焦亡

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中国组织工程研究 2023年第33期27卷 5363-5369页

作者：龙调玉包伦敏万秀方李红红张云东蒋红梅贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州省贵阳市550025 安顺市人民医院医学检验科贵州省安顺市561000

背景:课题组前期利用核因子κB寡核苷酸诱骗剂成功构建了抗原特异性耐受性树突状细胞,并用其对胶原诱导性关节炎大鼠模型进行了有效干预,但治疗机制仍有待进一步研究。目的:探讨耐受性树突状细胞对胶原诱导性关节炎大鼠脾脏细胞焦亡的... 详细信息

背景:课题组前期利用核因子κB寡核苷酸诱骗剂成功构建了抗原特异性耐受性树突状细胞,并用其对胶原诱导性关节炎大鼠模型进行了有效干预,但治疗机制仍有待进一步研究。目的:探讨耐受性树突状细胞对胶原诱导性关节炎大鼠脾脏细胞焦亡的影响。方法:提取骨髓源树突状细胞,利用核因子κB寡核苷酸诱骗剂构建耐受性树突状细胞。取9只SD大鼠,采用随机数字表法随机分为正常组、模型组、治疗组,每组3只,模型组、治疗组建立胶原诱导性关节炎模型(初次免疫:左足跖部皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂;加强免疫:初次免疫后第14天,尾根部多点注射牛Ⅱ型胶原乳剂),初次免疫后第20天分别尾静脉注射生理盐水、耐受性树突状细胞,初次免疫后第35天,进行相关检测。结果与结论:(1)关节炎指数评分:治疗组大鼠关节炎指数评分低于模型组(P<0.05);(2)足踝关节大体与病理观察:模型组大鼠踝关节严重肿胀,治疗组大鼠踝关节轻度肿胀;苏木精-伊红染色显示,与正常组相比,模型组大鼠足踝关节滑膜明显增生,伴有炎性细胞浸润和骨侵蚀;与模型组相比,治疗组大鼠足踝关节滑膜增生减低、骨侵蚀和炎性细胞浸润减少;(3)血清白细胞介素1β水平:模型组大鼠血清白细胞介素1β水平高于正常组(P<0.05),治疗组大鼠血清白细胞介素1β水平低于模型组(P<0.05);(4)脾脏相关蛋白表达:Western blot检测显示,与正常组相比,模型组大鼠脾脏NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD-NT、白细胞介素1β前体、白细胞介素1β的蛋白表达均增高(P<0.05);与模型组大鼠相比,治疗组大鼠脾脏NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD-NT、白细胞介素1β前体、白细胞介素1β的蛋白表达均下降(P<0.05);(5)结果表明,耐受性树突状细胞可能通过抑制脾脏细胞焦亡和促炎细胞因子白细胞介素1β的释放,缓解胶原诱导性关节炎模型大鼠的炎症反应。

关键词：耐受性树突状细胞胶原诱导性关节炎 NLRP3 白细胞介素1β 细胞焦亡类风湿关节炎

耐受性树突状细胞在胶原蛋白诱导性关节炎大鼠体内形成微嵌合体

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第11期38卷 967-971页

作者：包伦敏马贵兰龙调玉蒋红梅贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州贵阳550025 安顺市人民医院检验科贵州安顺561099

目的寻找耐受性树突状细胞(tDC)输注到胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠后形成微嵌合体的证据。方法骨髓来源的DC前体细胞经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)及核因子κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导... 详细信息

目的寻找耐受性树突状细胞(tDC)输注到胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠后形成微嵌合体的证据。方法骨髓来源的DC前体细胞经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)及核因子κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导成tDC,再用1,1′-十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基三碳氰基碘化物(DiR)标记后输注到CIA大鼠体内。在细胞输注的第4 h、 24 h、 5 d、 10 d、 15 d,用小动物活体成像系统观察荧光强度和分布,第15天处死大鼠,检测主要脏器荧光信号。结果 tDC高表达OX62,低表达CD80和CD86。荧光信号主要集中在胸腹部和左后关节,胸腹部荧光信号在24 h最强,左后关节荧光信号在5 d最强。在细胞输注的15 d仍能检测到荧光,并且病足左后关节始终保持较强荧光信号。离体器官肺、肝、脾、肠系膜淋巴结中荧光信号较强,肾荧光信号较弱,心脏几乎没有荧光。结论 tDC在病足关节、肺、肝、脾、肠系膜淋巴结形成微嵌合体。

关键词：耐受性树突状细胞(tDC) 胶原蛋白诱导性关节炎(CIA) 微嵌合类风湿性关节炎(RA)

不同类型肝硬化患者肝功能和免疫功能的对比分析

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中国现代普通外科进展 2021年第5期24卷 352-356页

作者：张智琪汪浪张宇黄月明沈雪吴青青贵州医科大学医学检验学院微生物学与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心流式细胞室贵州贵阳550004

目的:对比乙型肝炎肝硬化、酒精性肝硬化和混合型(乙型肝炎+酒精性肝炎)肝硬化患者的肝功能和免疫功能指标,并分析其与Child-Pugh分级的相关性,为临床评估患者免疫状态及采取相关治疗提供参考。方法:选取2019年3月—2020年7月贵州医科... 详细信息

目的:对比乙型肝炎肝硬化、酒精性肝硬化和混合型(乙型肝炎+酒精性肝炎)肝硬化患者的肝功能和免疫功能指标,并分析其与Child-Pugh分级的相关性,为临床评估患者免疫状态及采取相关治疗提供参考。方法:选取2019年3月—2020年7月贵州医科大学附属医院收治的肝硬化患者128例,其中乙型肝炎肝硬化44例,酒精性肝硬化48例,混合型肝硬化36例。采用全自动生化分析仪检测肝功能指标,免疫比浊法检测免疫球蛋白,流式细胞术(FCM)检测外周血淋巴细胞亚群百分比。结果:乙型肝炎肝硬化患者谷草转氨酶/谷丙转氨酶(AST/ALT)、免疫球蛋白A(IgA)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、CD3+CD4+细胞百分比显著低于酒精性肝硬化患者和混合型肝硬化患者(P均学意义(P>0.05)。乙型肝炎肝硬化患者及混合型肝硬化患者Child-Pugh分级与AST、AST/ALT、总胆红素(TBIL)、免疫球蛋白G(IgG)、IgA均呈正相关(r=0.464、0.469、0.705、0.540、0.540和0.555、0.563、0.782、0.424、0.515,P免疫功能受损更为严重,且不同类型肝硬化患者的Child-Pugh分级与肝功能生化指标和免疫球蛋白存在显著相关性。

关键词：肝硬化酒精性乙型肝炎 Child-Pugh分级免疫球蛋白淋巴细胞