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小鼠脑组织腺苷A2A受体缺失模型的建立与评价

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生物工程学报 2008年第4期24卷 700-706页

作者：戴双双王昊安建宏杨楠周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心国家创伤、烧伤与复合伤重点实验室重庆400042

制备了脑组织腺苷A2A受体基因缺失的小鼠模型并对该模型进行评价。在采用2次6.2 Gy X线间隔照射对敲除A2A受体基因的雌性C57BL/6小鼠进行清髓处理后,将野生型雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞移植到其体内,使其脑组织的A2A受体仍保持缺失型。然... 详细信息

制备了脑组织腺苷A2A受体基因缺失的小鼠模型并对该模型进行评价。在采用2次6.2 Gy X线间隔照射对敲除A2A受体基因的雌性C57BL/6小鼠进行清髓处理后,将野生型雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞移植到其体内,使其脑组织的A2A受体仍保持缺失型。然后对移植效果进行鉴定,并对模型的生理指标进行观察和评价。结果发现:骨髓移植6周后,受体小鼠的白细胞性染色体基因由雌性变为雄性;骨髓中A2A受体阳性细胞率为94.85%,而脑内A2A受体mRNA与A2A受体基因敲除小鼠比较,无显著差异。模型小鼠除心率略低于野生型小鼠外,在呼吸频率、脑含水量以及脑内谷氨酸含量等生理指标上均与野生型小鼠和A2A基因敲除小鼠无显著差异。

关键词：外周血白细胞脑组织 A2A受体骨髓移植

Smad3基因siRNA对TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖的影响

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南方医科大学学报 2010年第4期30卷 690-694,699页

作者：李平刘苹陈星云赵艳宁亚蕾杨楠周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的构建大鼠Smad3基因特异性siRNA沉默质粒,并探讨其在TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖中的作用。方法构建大鼠Smad3基因沉默质粒,荧光纤维镜观察转染效率,定量PCR、免疫组化法检测Smad3基因和蛋白的变化,BrdU ELISA法和EMSA法分别检测... 详细信息

目的构建大鼠Smad3基因特异性siRNA沉默质粒,并探讨其在TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖中的作用。方法构建大鼠Smad3基因沉默质粒,荧光纤维镜观察转染效率,定量PCR、免疫组化法检测Smad3基因和蛋白的变化,BrdU ELISA法和EMSA法分别检测转染siRNA及联合大小剂量TGF-β1刺激后细胞增殖和Smad3结合活性变化。结果沉默质粒转染效率为41.2%,瞬时转染后具有促增殖作用且与转染剂量成正比,并使其mRNA表达下调50%、蛋白表达明显降低,还可降低大小剂量TGF-β1双向调节细胞增殖和Smad3结合活性的变化程度。结论pSUPERSmad3沉默质粒构建成功,TGF-β1可通过调节Smad3来达到双向调节成纤维细胞增殖作用。

关键词： Smad3基因 RNA干扰 TGF-β1 成纤维细胞细胞增殖

腺苷A2A受体在小鼠颅脑创伤与外周组织损伤模型中的作用差异

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生理学报 2008年第2期60卷 254-258页

作者：戴双双熊仁平杨楠李玮朱佩芳周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心国家创伤、烧伤与复合伤重点实验室重庆400042

本文旨在探索腺苷A2A受体在颅脑创伤、皮肤创伤及放射损伤复合创伤中的作用差异。分别观察和检测野生型小鼠、A2A受体基因敲除小鼠以及给予A2A受体激动剂CGS21680治疗的小鼠在皮肤创伤、放射损伤复合创伤后的伤口愈合时间以及颅脑创伤... 详细信息

本文旨在探索腺苷A2A受体在颅脑创伤、皮肤创伤及放射损伤复合创伤中的作用差异。分别观察和检测野生型小鼠、A2A受体基因敲除小鼠以及给予A2A受体激动剂CGS21680治疗的小鼠在皮肤创伤、放射损伤复合创伤后的伤口愈合时间以及颅脑创伤后的神经功能缺损情况、伤侧皮层脑含水量、脑脊液中谷氨酸浓度。结果表明,CGS21680促进外周组织伤口愈合,却加重颅脑创伤模型的神经功能损害,这与其促进谷氨酸释放有关。相反,A2A受体基因敲除显著延迟小鼠皮肤创伤及放射损伤复合创伤模型的伤口愈合,而在颅脑创伤模型中通过抑制谷氨酸释放产生保护效应。本研究初步证实,A2A受体激活促进谷氨酸大量释放可能是其在中枢损伤与外周损伤产生作用差异的机理之一,这为将来临床应用A2A受体激动剂减轻外周损伤,而用A2A受体拮抗剂减轻颅脑损伤提供了一定的实验依据。

关键词： A2A受体颅脑创伤创伤愈合放射损伤复合创伤

Rho相关的卷曲蛋白激酶在多重细胞行为中的作用

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中国医学科学院学报 2012年第3期34卷 276-280页

作者：刘冬陈星云周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤、烧伤及复合伤国家重点实验室重庆400042

Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)是一种属于AGC家族的蛋白激酶,主要通过诱导应力纤维形成、重构细胞骨架等方式参与细胞收缩、迁徙、分裂、形态变化等生物学行为,对调节细胞的多种功能发挥重要的作用。

关键词： Rho相关的卷曲蛋白激酶细胞骨架细胞收缩细胞迁徙

小鼠急性肺损伤后糖皮质激素受体的活性改变与热休克蛋白的关系

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南方医科大学学报 2008年第5期28卷 725-728页

作者：张民熊仁平陈星云李平赵艳刘苹周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室分子生物学中心重庆400042

目的研究急性肺损伤(ALI)后机体内糖皮质激素受体(GR)的配体结合活性显著下降与其分子伴侣热休克蛋白(Hsps)改变的关系。方法以小鼠油酸急性肺损伤为模型,用Western blotting和受体的放射配体结合试验动态观察伤后GR、Hsp90、Hsp70和GR... 详细信息

目的研究急性肺损伤(ALI)后机体内糖皮质激素受体(GR)的配体结合活性显著下降与其分子伴侣热休克蛋白(Hsps)改变的关系。方法以小鼠油酸急性肺损伤为模型,用Western blotting和受体的放射配体结合试验动态观察伤后GR、Hsp90、Hsp70和GR的结合容量和亲和力变化。结果伤后小鼠肺组织水肿、肺体指数和肺含水量显著升高;GR在伤后1h升高,然后显著下降,在12h达最低点;Hsp90和Hsp70在伤后的表达逐渐升高,在12h达最高点。配体结合试验显示在伤后GRBmax逐渐下降,Kd值升高,与Hsp90/GR的变化趋势一致。结论急性肺损伤后的GR配体结合活性的改变可能与Hsp90的变化有关。

关键词：急性肺损伤糖皮质激素激素受体热休克蛋白

(S)-4C3HPG对小鼠中度颅脑创伤后急性期伤情的影响及机制

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生理学报 2010年第6期62卷 555-559页

作者：杨楠戴双双宁亚蕾陈星云赵艳李平周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心国家创伤、烧伤与复合伤重点实验室重庆400042 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

本文旨在探讨代谢型谷氨酸受体调节剂(S)-4C3HPG在颅脑创伤急性期中的作用。将C57BL/6小鼠分为治疗组和对照组,分别复制颅脑创伤模型,治疗组在致伤前30min使用低、中、高3种剂量(1、5、10mg/kg)的(S)-4C3HPG行腹腔注射,对照组使用生理... 详细信息

本文旨在探讨代谢型谷氨酸受体调节剂(S)-4C3HPG在颅脑创伤急性期中的作用。将C57BL/6小鼠分为治疗组和对照组,分别复制颅脑创伤模型,治疗组在致伤前30min使用低、中、高3种剂量(1、5、10mg/kg)的(S)-4C3HPG行腹腔注射,对照组使用生理盐水。致伤24h后进行神经功能缺损评定,干湿重法测定伤侧皮层脑含水量,高效液相色谱测定脑脊液中谷氨酸浓度,实时荧光定量PCR法测定伤侧皮层炎症因子TNF-α和IL-1βmRNA的表达水平。结果显示注射(S)-4C3HPG可减轻神经功能缺损(P伤侧皮层TNF-α(P研究初步证实(S)-4C3HPG可通过抑制谷氨酸释放及炎症介质产生,从而减轻颅脑创伤急性期的损伤。

关键词：谷氨酸代谢型受体颅脑创伤炎症谷氨酸

pUC118-ski/DH5α工程菌发酵工艺的优化

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 495-498页

作者：彭艳李平刘苹周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺。方法筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定最佳发酵参数;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批,验证优化的发酵工艺的重复性。结果... 详细信息

目的优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺。方法筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定最佳发酵参数;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批,验证优化的发酵工艺的重复性。结果最佳发酵参数为:以甘油为碳源的培养基,发酵温度25℃,以50%Glycerol梯度恒速流加方式补料,培养时间为12 h;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批工程菌,菌体湿重和质粒含量分别达52.7～60.3 g/L和1.79～1.95 mg/g湿菌,质粒拷贝数为1012copies/μl,超螺旋质粒的比例达90%以上。结论优化了pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺,为重组质粒的规模化生产及下游纯化奠定了基础。

关键词：质粒DNA ski基因工程菌发酵工艺优化

创伤性脑损伤后tau蛋白磷酸化水平动态变化及意义

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中华创伤杂志 2014年第4期30卷 344-348页

作者：赵子艾宁亚蕾杨楠彭艳熊仁平陈惺白伟周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究小鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后急性期、亚急性期及慢性期tau蛋白磷酸化水平动态变化规律。方法采用可控皮质打击方法建立小鼠中度TBI模型，无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级C57BL／6雄性小... 详细信息

目的研究小鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后急性期、亚急性期及慢性期tau蛋白磷酸化水平动态变化规律。方法采用可控皮质打击方法建立小鼠中度TBI模型，无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级C57BL／6雄性小鼠40只按随机数字表法分为创伤组、假手术组，创伤组又分为3个亚组：24h、7d及1个月组，每组10只。采用免疫组化方法检测伤后24h、7d、1个月脑组织tau蛋白磷酸化水平变化、胶质细胞增生程度、神经元丢失及淀粉样肽前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）标记的轴突损伤。结果创伤24h、7d、1个月组对侧海马齿状回区tau蛋白Set404位点磷酸化水平分别为4451．021±471．731，5339．826±794．071，1906．0364-369．808，均较假手术组368．6304-231．038明显升高（f=23．316，18．033，9．979，P〈0．01）。而其余Thr205、Ser262位点磷酸化水平未见明显改变。胶质纤维酸性蛋白（glial fibrous acid protein，GFAP）免疫组化染色结果显示，创伤24h、7d组吸光度（4）值分别为30495．233±6174．094，86427．920±11896．771，均显著高于假手术组6825．653±3451．641（t=9．573，9．573，P〈0．01），而创伤1个月组9511．471±5431．077与假手术组比较差异无统计学意义（t=1．181，P〉0．05）。APP免疫组化结果显示，假手术组、创伤24h、7d及1个月组A值分别为459．0614±368．608，1802．6954±491．938，2762．852±636．524，2333．118±511．731，创伤组均高于假手术组（t=5．684，7．960，7．697，P〈0．01）。各时相点NeuN标记神经元计数结果显示，对侧齿状回区神经元在创伤24h组与假手术组[（290．056±39．162）：（314．019±42．397）]差异无统计学意义（t=-1．017，P〉0．05），创伤7d、1个月组分别为250．509±17．592，242．717±17．045，均少于假手术组（t=-3．112，-3．506，P〈0．01）。结论TBI后tau蛋白Ser404位点磷酸化水平长期升高可能与TBI后慢性期认知功能障碍有关。

关键词：脑损伤 tau蛋白质类认知功能障碍

TGF-β1的Smad信号系统和非Smad信号系统与创伤愈会

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中华创伤杂志 2010年第5期26卷 476-480页

作者：李平周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

转化生长因子β1（tramforming growth factor β1,TGF-β1）是TGF-β超家族中的重要一员,参与了细胞的增殖、凋亡、分化、迁移及炎症反应和胶原合成的调节,在创伤愈合不同阶段中都具有重要作用而成为创伤愈合的重要调节因子[1].

关键词： TGF-β1 创伤愈合信号系统 Smad TGF-β超家族转化生长因子β 调节因子胶原合成