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TRAF2和SNED1基因敲低对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

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农业生物技术学报 2024年第9期32卷 2150-2158页

作者：刘芯怡权冉刘昱成陈俊贞倪慧莹付强史慧君新疆农业大学动物医学学院新疆草食动物新药研究与创制重点实验室省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

牛病毒性腹泻/粘膜病(bovine viral diarrhea/mucosal disease, BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)引起的接触性传染病，会导致持续性感染，感染犊牛(Bos taurus)会不断向外界排出病毒。本课题组前期使用... 详细信息

牛病毒性腹泻/粘膜病(bovine viral diarrhea/mucosal disease, BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)引起的接触性传染病，会导致持续性感染，感染犊牛(Bos taurus)会不断向外界排出病毒。本课题组前期使用RNA-蛋白质相互作用检测(RNA-protein interaction detection,RaPID)技术，筛选出了与BVDV互作的肿瘤坏死因子受体相关因子2 (tumor necrosis factor receptor associated factor 2, TRAF2)和Sushi、Nidogen和EGF样结构域1 (Sushi, Nidogen and EGF like domains 1,SNED1)基因。为了确定TRAF2和SNED1基因对BVDV复制的影响，本研究利用小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)技术敲低牛肾细胞(madin-darby bovine kidney cells, MDBK)中TRAF2和SNED1基因，通过qPCR检测TRAF2和SNED1基因的敲低效率和BVDV感染TRAF2和SNED1敲低细胞的BVDV 5'UTR RNA水平变化；使用免疫荧光染色法检测BVDV复制的中间产物双链RNA (double stranded RNA, dsRNA)的积累变化；通过荧光倒置显微镜观察致细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)，使用Karber法计算子代病毒滴度变化。结果表明，TRAF2和SNED1的mRNA水平显著性降低(P研究为揭示BVDV致病机制提供重要依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 小干扰RNA (siRNA)技术肿瘤坏死因子受体相关因子2 (TRAF2) Sushi、Nidogen和EGF样结构域1 (SNED1)

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致犊牛脑炎大肠杆菌对细胞及小鼠的致病性

中国兽医学报 2024年第9期 1948-1956页

作者：党士荣操义恒贾开文姜美奇周霞吴桐忠黄新钟发钢韩猛立张倩王晓兰王子杰石河子大学动物科技学院新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

旨在探讨犊牛脑炎大肠杆菌对小鼠脑微血管内皮细胞(BMEC细胞)和小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)以及健康小鼠肺脏、脑组织的炎性损伤机制。研究采用致病性大肠杆菌菌株侵染BMEC细胞和MH-S细胞，观察细胞形态变化；平板计数法检测菌株对细胞... 详细信息

旨在探讨犊牛脑炎大肠杆菌对小鼠脑微血管内皮细胞(BMEC细胞)和小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)以及健康小鼠肺脏、脑组织的炎性损伤机制。研究采用致病性大肠杆菌菌株侵染BMEC细胞和MH-S细胞，观察细胞形态变化；平板计数法检测菌株对细胞的黏附、侵袭能力以及小鼠肺脏、脑组织载菌量；RT-qPCR检测菌株对细胞及小鼠脏器不同时间段的TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达量的影响；Western blot检测感染后细胞及小鼠脏器与炎症有关信号通路重要蛋白p-NF-κB、p-JAK2、p-STAT3表达量。结果显示，侵染组细胞培养基浑浊，细胞视野变暗、模糊不清，部分细胞皱缩死亡，产生较多细胞碎片。菌株对BMEC细胞的黏附率和侵袭率3 h显著低于6 h(P<0.050),对MH-S细胞的黏附率和侵袭率在3 h显著高于6 h(P<0.010);感染小鼠脑组织大面积水肿、出血，肺脏有不同程度的肿大和出血，脑、肺脏组织载菌量在12 h最高。与对照组相比，感染组在3和6 h的IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达量均显著上升(P<0.050),且BMEC细胞和MH-S细胞的炎性因子mRNA表达量分别在6、3 h最高；感染小鼠脑、肺脏组织的炎性因子mRNA表达量随时间延长呈现先增加后减少的趋势，均在感染12 h有最高的表达量；侵染组的BMEC细胞和MH-S细胞及小鼠肺脏、脑组织的p-NF-κB蛋白表达量显著高于对照组(P<0.001),p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达量显著低于对照组(P<0.050)。上述结果表明，致病性大肠杆菌可黏附侵袭BMEC细胞和MH-S细胞，促进细胞及组织NF-κB蛋白表达、抑制JAK2蛋白和STAT3蛋白表达，进而刺激细胞及组织产生炎性反应。

关键词：致犊牛脑炎大肠杆菌黏附和侵袭能力载菌量炎性损伤

细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因的生物信息学分析及原核表达

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中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 555-561页

作者：赵文卿薄新文普娜张玉霞陈旭珂张艳艳孙艳齐萌王正荣塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子大学动物科技学院

目的了解细粒棘球绦虫的乳酸脱氢酶蛋白基因的生物信息学特性,并进行原核表达。方法利用NCBI网站登录的细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因序列设计特异性引物和qRT-PCR引物,使用PCR扩增细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因,使用荧光定量法检测细粒棘... 详细信息

目的了解细粒棘球绦虫的乳酸脱氢酶蛋白基因的生物信息学特性,并进行原核表达。方法利用NCBI网站登录的细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因序列设计特异性引物和qRT-PCR引物,使用PCR扩增细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因,使用荧光定量法检测细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶在不同发育阶段的相对表达量,使用生物信息学软件对细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶蛋白进行分析;构建重组pET28a-EgLdh质粒,转进大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blot对蛋白进行免疫原性分析;利用原核表达重组pET28a-EgLDH蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光分析其在虫体上的分布。结果生物信息学分析发现EgLDH全长996 bp,编码331个氨基酸,分子式为C_(1575)H_(2561)N_(425)O_(470)S_(17),相对分子质量为35516.25,理论等电点为6.32,不稳定指数为27.96,显示为稳定蛋白,脂肪系数为106.83,亲水性为0.236,为疏水性蛋白,有13个潜在的B细胞抗原表位;通过双酶切鉴定及测序分析证明,pET28a-EgLDH重组质粒构建成功。重组质粒pET28a-EgLDH转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞后使用IPTG成功诱导表达蛋白,分子质量约为40 ku,Western blot结果显示,重组蛋白能被感染棘球蚴的犬阳性血清识别,表明其均具有良好的反应原性。EgLDH在细粒棘球绦虫阶段的相对转录水平显著高于原头蚴阶段。间接免疫荧光分析显示其定位在原头蚴的表皮层。结论rEgLDH具有较好的免疫活性,是一种潜在的疫苗候选抗原。

关键词：细粒棘球绦虫 EgLDH基因生物信息学分析原核表达

1株B基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 44-51页

作者：张倩王旭韩猛立张星星吴桐忠钟发钢黄新张乾义新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆石河子832000 中国兽医药品监察所北京100081

为探究新疆某集约化牛场1~6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况,对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析。结果显示,样品中BPIV3核酸阳性率为11.67%。从核酸阳性样品中分离获... 详细信息

为探究新疆某集约化牛场1~6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况,对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析。结果显示,样品中BPIV3核酸阳性率为11.67%。从核酸阳性样品中分离获得1株BPIV3,并命名为XJ21032-1(45),其基因组全长为15512 bp;遗传进化分析表明,XJ21032-1(45)属于BPIV3 B基因型,该分离株与澳大利亚的BPIV3 B基因型参考株Q5592(EU277658)的同源性最高为93.4%。本研究成功分离得到了1株B基因型BPIV3,证实B型毒株在我国的存在和流行,为BPIV3疫苗研发提供了原材料,也有助于我国BPIV3分子进化规律及溯源的进一步研究。

关键词：牛副流感病毒3型 B基因型分离鉴定全基因组序列分析

新疆杂粕类蛋白饲料资源现状及其在反刍动物生产中的研究进展

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饲料工业 2024年第16期45卷 16-21页

作者：徐新如张鑫陈宁省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

文章对新疆的大宗杂粕蛋白饲料资源,包括棉籽粕、菜籽粕、葵花粕以及辣椒粕的资源现状、资源分布、营养价值,以及其在反刍动物上的应用技术进展进行了综述,以期为新疆畜牧业中合理利用蛋白饲料资源提供理论支持。

关键词：新疆蛋白质资源反刍动物蛋白饲料杂粕

反刍动物瘤胃可溶碳和可溶氮降解平衡研究进展

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饲料工业 2024年第18期45卷 25-33页

作者：刘洋张振斌臧俞张军王梦芝扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆石河子832000

反刍动物氮的利用率低,瘤胃内可溶性碳和可溶性氮平衡这一原理有助于解决这一问题。文章总结了可溶性碳和可溶性氮在瘤胃的代谢过程、评价可溶性碳/可溶性氮平衡的指标、可溶性碳/可溶性氮对反刍动物代谢影响以及调控可溶性碳/可溶性氮... 详细信息

反刍动物氮的利用率低,瘤胃内可溶性碳和可溶性氮平衡这一原理有助于解决这一问题。文章总结了可溶性碳和可溶性氮在瘤胃的代谢过程、评价可溶性碳/可溶性氮平衡的指标、可溶性碳/可溶性氮对反刍动物代谢影响以及调控可溶性碳/可溶性氮平衡措施,以期为提高反刍动物氮利用率提供参考依据。

关键词：反刍动物碳氮可溶性碳/可溶性氮平衡氮利用率

反刍动物瘤胃氮素利用微生物及其生产应用的研究概况

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饲料工业 2024年第16期45卷 9-15,31页

作者：孙一权张振斌刘洋钟新皇朱军王梦芝扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

反刍动物对于蛋白质饲料的利用效率相较于单胃动物偏低,如何提高反刍动物氮素利用效率,保障动物健康生长显得尤为重要,文章综述了主要的瘤胃氮素利用微生物以及氮素利用微生物制剂对反刍动物生长和健康的影响,以期为提高反刍动物氮素利... 详细信息

反刍动物对于蛋白质饲料的利用效率相较于单胃动物偏低,如何提高反刍动物氮素利用效率,保障动物健康生长显得尤为重要,文章综述了主要的瘤胃氮素利用微生物以及氮素利用微生物制剂对反刍动物生长和健康的影响,以期为提高反刍动物氮素利用率提供更多的参考依据。

关键词：反刍动物氮素利用蛋白质降解菌微生物制剂生产应用

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绵羊MYL基因家族的鉴定与组织表达分析

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1551-1564页

作者：杨杨余乾刘昱成杨华赵卓王立民周平杨庆勇代蓉新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 华中农业大学信息学院武汉430070

为了解肌球蛋白轻链(myosin light chain,MYL)基因家族在绵羊中的分子进化关系及表达变化,本研究利用生物信息学方法对绵羊MYL基因家族进行鉴定和系统分析。各选取了3只军垦白肉羊、新疆细毛羊和湖羊成年公羊各组织样品,采用qRT-PCR方... 详细信息

为了解肌球蛋白轻链(myosin light chain,MYL)基因家族在绵羊中的分子进化关系及表达变化,本研究利用生物信息学方法对绵羊MYL基因家族进行鉴定和系统分析。各选取了3只军垦白肉羊、新疆细毛羊和湖羊成年公羊各组织样品,采用qRT-PCR方法验证家族成员MYL1、MYL6B和MYLPF基因的表达情况。结果显示,12个MYL基因分布在9条染色体上,编码由147~211氨基酸组成的亲水性蛋白质,无信号肽和跨膜结构域,二级结构以α-螺旋为主。根据基因结构、保守结构域和基序分布等特征,可以将这些基因家族成员分为3个组。共线性分析结果表明,MYL2和MYL10、MYL2和MYLPF存在片段复制,且这些片段受到较强的选择压力。蛋白互作网络显示MYH10与绵羊MYL家族成员均存在互作关系。MYLs的组织表达模式差异较大,其中MYL1、MYL2、MYL6B和MYLPF在骨骼肌组织中高水平表达。基因克隆测序结果显示,扩增得到目的基因的CDS全长,qRT-PCR结果表明,MYL1、MYL6B和MYLPF在军垦白肉羊肌肉组织中的表达水平显著高于其他组织(P研究绵羊MYL基因家族的功能以及优化绵羊肉用性能提供了线索。

关键词：绵羊 MYL 基因家族生物信息学分析基因表达

细粒棘球绦虫MDH基因的克隆表达结构功能预测及蛋白定位

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 393-402页

作者：普娜赵文卿张玉霞陈旭珂张艳艳孙艳薄新文王正荣石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦... 详细信息

为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴的cDNA为模板,用PCR扩增MDH基因全长序列;采用生物信息学软件对MDH蛋白的理化性质、结构特点等进行分析;构建重组质粒pET28a-MDH并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,随后纯化、复性蛋白,并通过Western-blot对蛋白进行抗原性分析;利用间接免疫荧光试验检测原头蚴中目的蛋白的定位;应用实时荧光定量PCR分析Eg MDH基因m RNA在原头蚴及成虫中的相对转录水平。生物信息学分析结果显示,Eg MDH基因长999 bp,编码332个氨基酸,蛋白分子式为C1639H2599N445O475S16,相对分子质量为36 651.32,理论等电点为8.11,且编码蛋白没有信号肽和跨膜区,含有40个磷酸化位点,3个N连接型糖基化位点,9个优势B细胞抗原表位。二级结构由α-螺旋(46.69%)、无规则卷曲(31.93%)、延伸链结构(16.87%)和β-转角(4.52%)构成。克隆的基因长975 bp,预测分子质量为35.7 ku;Western-blotting显示,重组蛋白可以被抗His标签的家兔多克隆抗体和原头蚴可溶性全蛋白小鼠多克隆抗体识别;间接免疫荧光试验显示,Eg MDH蛋白定位在原头蚴的囊壁;实时荧光定量PCR显示,Eg MDH基因在成虫及原头蚴中均有表达,且原头蚴阶段的转录水平显著高于成虫(P研究结果初步表明Eg MDH具有作为疫苗候选抗原的潜力,以期为后续细粒棘球绦虫疫苗研发提供候选抗原;同时也为后续细粒棘球绦虫MDH基因的深入研究奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫苹果酸脱氢酶生物信息学原核表达间接免疫荧光