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枣77个品种果肉愈伤组织诱导培养研究

园艺学报 2024年第4期51卷 903-914页

作者：赵若雨郭晓雪朱文慧李瑞梅赵佳雪杜丹代丽刘志国王立新刘孟军河北农业大学园艺学院河北保定071001

果肉愈伤组织的大量培养可为悬浮细胞体系的建立、原生质体的分离与培养、遗传转化体系的建立及次生代谢产物的研究提供物质基础。以5个发育阶段的枣果肉为试材,共计77个枣品种,选用10种培养基进行枣果肉愈伤组织诱导研究。结果表明,基... 详细信息

果肉愈伤组织的大量培养可为悬浮细胞体系的建立、原生质体的分离与培养、遗传转化体系的建立及次生代谢产物的研究提供物质基础。以5个发育阶段的枣果肉为试材,共计77个枣品种,选用10种培养基进行枣果肉愈伤组织诱导研究。结果表明,基因型、果实发育阶段、培养基种类及其植物生长调节剂配比对枣果肉愈伤组织诱导效果均具有显著影响。在启动培养阶段,有42个品种分别筛选出1~6种可诱导出愈伤组织的培养基;有8种培养基可以成功诱导出愈伤组织,其中G1(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+0.5 mg·L^(-1)6-BA+2.5 mg·L^(-1)2,4-D)和G7(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+0.8 mg·L^(-1)6-BA+1.5 mg·L^(-1)2,4-D)培养基的适用性最高,达60%,其次为G5(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+1.0 mg·L^(-1)6-BA+2.0 mg·L^(-1)2,4-D),达45%;幼果最适于果肉愈伤组织培养,88%的品种可成功诱导出愈伤组织,随着果实成熟,果肉愈伤组织越不易诱导,在完全成熟的全红期只有‘圆铃小枣’成功诱导出愈伤组织。在继代培养阶段,有22个品种的愈伤组织实现了持续继代培养,适宜的培养基有G1(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+0.5 mg·L^(-1)6-BA+2.5 mg·L^(-1)2,4-D)、G3(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+1.0 mg·L^(-1)6-BA+1.0 mg·L^(-1)2,4-D)、G5(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+1.0 mg·L^(-1)6-BA+2.0 mg·L^(-1)2,4-D)、G6(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+3.0 mg·L^(-1) TDZ+0.5 mg·L^(-1) NAA)、G7(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+0.8 mg·L^(-1)6-BA+1.5 mg·L^(-1)2,4-D)、G9(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+20 g·L^(-1)蔗糖+0.5 mg·L^(-1) NAA+1.0 mg·L^(-1)6-BA)和G10(4.41 g·L^(-1) MS+6 g·L^(-1)琼脂+25 g·L^(-1)蔗糖+0.4 mg·L^(-1)6-BA+1.5 mg·L^(-1)2,4-D);改变植物生长调节剂配比可以显著提高愈伤继代效果。此外,在启动培养阶段,有极少量的品种,如‘无核72’和‘临猗梨枣’可以直接诱导出芽。

关键词：枣愈伤组织果肉培养植物生长调节剂

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平邑甜茶发根农杆菌介导转化体系构建与优化

果树学报 2024年第5期41卷 999-1008页

作者：周雪婷武凯凯崔蓝芳张坤玺白团辉史江莉焦健王苗苗刘昱赵玉洁万然郝鹏博郑先波河南农业大学园艺学院郑州450046 河南省园艺植物生物学国际联合实验室郑州450046

【目的】建立并优化平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系。【方法】以不同苗龄的平邑甜茶幼苗为材料,使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599,通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法侵染... 详细信息

【目的】建立并优化平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系。【方法】以不同苗龄的平邑甜茶幼苗为材料,使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599,通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法侵染平邑甜茶根颈部诱导毛状根,利用GFP荧光检测、GFP蛋白印迹检测、DNA检测和GUS染色方法进行转基因株系验证,同时对成功转化株系根、茎、叶组织的表达量进行分析,检测发根农杆菌在转化平邑甜茶株系中的迁移性。【结果】不同苗龄平邑甜茶幼苗诱导毛状根能力具有较大差异,其中三叶龄幼苗诱导毛状根率最高,为96%,五叶龄幼苗最高的毛状根诱导率为65%,以使用菌株涂抹方式转化植株的毛状根分布为最佳、毛状根诱导率为最高。发根农杆菌在成功转化株系中存在随机向地上部迁移的现象,并能够整合目的基因至叶片叶柄及部分主叶脉基因组中,但在培养30 d时无法通过蛋白印迹方式在蛋白水平上检测到蛋白信号。【结论】建立并优化了简单、高效的发根农杆菌介导的平邑甜茶转化体系,鉴定了发根农杆菌在转化株系中随机向地上部迁移规律,为发根农杆菌技术的进一步利用提供理论依据。

关键词：平邑甜茶发根农杆菌转化效率迁移性

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茶树根腐病拮抗真菌的筛选、鉴定及防病促生特性研究

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中国生物防治学报 2024年第4期40卷 914-926页

作者：邓玉莲谭琳吉进军李桂花黄虹史子涵胡秋龙湖南农业大学茶学教育部重点实验室湖南农业大学园艺学院湖南农业大学植物保护学院湖南省茶业集团股份有限公司

为获得对茶树根腐病原菌Fusarium cugenangense具有良好拮抗效果的拮抗真菌，采用稀释涂布平板法从茶树根腐病根际土壤分离出真菌菌株，利用平板对峙法筛选出拮抗活性较高的菌株，基于形态学观察和ITS测序分析对其进行鉴定，测定其防病... 详细信息

为获得对茶树根腐病原菌Fusarium cugenangense具有良好拮抗效果的拮抗真菌，采用稀释涂布平板法从茶树根腐病根际土壤分离出真菌菌株，利用平板对峙法筛选出拮抗活性较高的菌株，基于形态学观察和ITS测序分析对其进行鉴定，测定其防病促生指标、抑菌谱、挥发性代谢物及难挥发性代谢物的抑菌活性，并评估拮抗菌株发酵液对茶树根腐病的抑菌能力。结果表明，筛选获得一株对茶树根腐病原菌***具有良好抑制效果的菌株CA5，平板对峙抑菌率为77.39%，鉴定为嗜松篮状菌Talaromyces pinophilus；菌株CA5具有产生纤维素酶、β-1,3葡聚糖酶和几丁质酶的能力，还具有解无机磷、解有机磷、解钾、固氮、产铁载体、产IAA以及产氨能力；菌株CA5对其他8种植物病原菌的抑制率均大于60%，抗菌作用具有广谱性；其挥发性代谢物和难挥发性代谢物对茶树根腐病原菌菌丝生长的抑制率分别为14.90%和44.33%，发酵液、菌悬液、无菌发酵滤液对茶树根腐病原菌菌丝生长的抑制率分别为73.42%、67.32%、25.75%；盆栽试验结果表明，菌株CA5对茶树根腐病防效达56.11%，且对茶树幼苗生长具有促进作用。综上，菌株CA5在防控茶树根腐病方面具有巨大应用潜力。

关键词：茶树根腐病嗜松篮状菌促生能力生物防治

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LED红蓝光配比对番茄生长和光合的影响

中国农业气象 2024年第5期45卷 517-524页

作者：孙斌吕璐平李灵芝李海平唐婷婷王元牛华琳山西农业大学园艺学院太谷030801

以番茄品种‘普罗旺斯’为材料,在双拱钢架日光温室内进行人工补光试验,设置T1(2R3B,即红光/蓝光珠数配比R:B=2:3)、T2(4R1B)、T3(6R1B)、T4(7R1B)四组红蓝光处理,以不进行人工补光为对照(CK),探究温室番茄生长和光合响应最优的红蓝光... 详细信息

以番茄品种‘普罗旺斯’为材料,在双拱钢架日光温室内进行人工补光试验,设置T1(2R3B,即红光/蓝光珠数配比R:B=2:3)、T2(4R1B)、T3(6R1B)、T4(7R1B)四组红蓝光处理,以不进行人工补光为对照(CK),探究温室番茄生长和光合响应最优的红蓝光配比。结果表明,在T1处理下35d后,番茄的株高、SPAD、蒸腾速率(Tr)和光化学淬灭系数(qP)较对照组分别显著提高26.7%、19.6%、107.6%和34.3%。在T3处理下35d后,番茄的茎粗、花朵数、净光合速率(Pn)、胞间CO_(2)浓度(Ci)、气孔导度(Gs)、实际光化学效率(ΦPSⅡ)和电子传输速率(ETR)较对照组分别显著提高26.9%、38.6%、133.7%、5.9%、183.3%、31.3%和30.9%。在T4处理下35d后,最大光化学效率(Fv/Fm)较对照组分别显著提高4.0%。在对设施番茄进行不同配比红蓝光补光处理下,较对照组可显著促进番茄的生长及光合作用,在本试验设置的2R3B、4R1B、6R1B、7R1B四组红蓝组合光处理中,6R1B(红/蓝光珠数配比R:B=6:1)处理下各项指标表现的综合效果最佳,可为温室番茄栽培LED补光提供一定的理论指导。

关键词： LED 番茄光合红蓝光生长

乳腺癌患者内分泌治疗相关骨关节疼痛发展轨迹及护理启示

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中华护理杂志 2024年第14期59卷 1732-1738页

作者：王莉杰彭思意陈婕君魏涛刘佳惠胡美红李旭英湖南省肿瘤医院护理部长沙市410013 湖南省肿瘤医院早期临床研究中心长沙市410013 湖南省肿瘤医院乳腺内科长沙市410013 湖南省肿瘤医院麻醉复苏室长沙市410013

目的探讨乳腺癌患者内分泌治疗相关骨关节疼痛发展轨迹的潜在类别及影响因素,为实施针对性的健康教育提供依据。方法采用便利抽样法,选取2022年1月—7月在湖南省某三级甲等肿瘤专科医院乳腺内科住院或门诊就诊的乳腺癌患者481例作为调... 详细信息

目的探讨乳腺癌患者内分泌治疗相关骨关节疼痛发展轨迹的潜在类别及影响因素,为实施针对性的健康教育提供依据。方法采用便利抽样法,选取2022年1月—7月在湖南省某三级甲等肿瘤专科医院乳腺内科住院或门诊就诊的乳腺癌患者481例作为调查对象。采用一般资料调查表、乳腺癌内分泌治疗患者症状评估量表、焦虑自评量表在患者治疗前1周内进行基线调查,采用乳腺癌内分泌治疗患者症状评估量表在患者治疗后3、6、9个月调查患者骨关节疼痛水平,采用增长混合模型、单因素分析和多元Logistic回归分析数据。结果共418例(86.90%)乳腺癌患者完成随访,发生骨关节疼痛235例(56.22%)。识别出骨关节疼痛发展轨迹的3个潜在类别,分别为高水平-缓慢上升组(11.48%)、低水平-缓慢上升组(44.74%)、无症状组(43.78%)。多元Logistic回归分析结果显示,焦虑、关节疾病史、每天睡眠时长、居住地、家庭月收入、每周运动次数是乳腺癌患者内分泌治疗相关骨关节疼痛水平发展轨迹潜在类别的影响因素(P<0.05)。结论乳腺癌患者内分泌治疗相关骨关节疼痛水平呈现不同的变化轨迹,临床医护人员应重视存在焦虑、关节疾病史、睡眠时间短、家庭经济状况差、居住在市区及每周运动次数少的患者疼痛水平的评估和干预。

关键词：乳腺肿瘤内分泌治疗芳香化酶抑制剂骨关节疼痛发展轨迹增长混合模型护理

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森林草莓SAUR基因家族的鉴定与表达分析

农业生物技术学报 2024年第1期32卷 91-106页

作者：刘芳梁国平王晗任家玄陈佰鸿毛娟甘肃农业大学园艺学院

早期应答生长素基因SAUR(small auxin up RNA)是一个能够在早期迅速响应生长素(indole-3-acetic acid, IAA)处理的基因家族，然而在草莓(Fragaria×ananassa)中该基因家族如何应答生长素处理还未见报道。因此，本研究利用生物信息学工... 详细信息

早期应答生长素基因SAUR(small auxin up RNA)是一个能够在早期迅速响应生长素(indole-3-acetic acid, IAA)处理的基因家族，然而在草莓(Fragaria×ananassa)中该基因家族如何应答生长素处理还未见报道。因此，本研究利用生物信息学工具，分析了森林草莓(F. vesca) SAUR基因家族成员的进化关系、蛋白质理化性质、基因结构和启动子元件以及响应IAA的表达模式变化。结果表明，在森林草莓基因组中共鉴定到了67个SAUR家族成员，这些成员的氨基酸数量变化范围为83～286 aa，除FvSAUR9、FvSAUR15、FvSAUR22、FvSAUR44、FvSAUR45具有疏水性外，其余成员都具有亲水性。亚细胞定位预测分析表明，该基因家族成员的表达主要位于细胞核、线粒体、叶绿体和细胞质中。系统进化树结果显示，拟南芥(Arabidopsis thaliana)、森林草莓和草莓的SAUR基因成员被分为10个亚组，其中第5亚组中森林草莓的成员最多，为20个，第4和第8亚组均为0个。森林草莓SAUR基因成员的启动子序列共鉴定出了11类不同的元件，其中与环境胁迫相关的有5类，与激素相关的有6类，光响应元件的数量最多。通过qRT-PCR分析了森林草莓SAUR家族成员响应IAA的表达模式，结果表明，大部分成员在IAA处理2 h后表达水平显著下调(P<0.05)，而12 h后有12个成员表达上调，而24 h处理后，所有的SAUR基因家族成员表达均上调。此外，共线性分析结果显示森林草莓SAUR基因家族成员中有6个基因对存在共线性。以上这些结果为草莓SAUR基因家族成员在生长发育和激素应答，特别是响应IAA处理方面的研究提供参考。

关键词：草莓 SAUR基因家族 qRT-PCR 吲哚乙酸(IAA) 生物信息学

不同鲜食品质橄榄果实转录组测序及酚类代谢途径相关调控基因挖掘

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生物技术通报 2024年第3期40卷 215-228页

作者：谢倩江来贺进刘玲玲丁明月陈清西福建农林大学园艺学院福州350002

【目的】果实酚类物质类别、含量是与橄榄营养及风味密切相关的重要品质性状,探究橄榄酚类物质生物合成的分子调控机制。【方法】以总酚含量差异显著的橄榄(低酚/高酚)为试材,分别取花后80-160 d的果实进行转录组分析,对莽草酸-水解单宁... 详细信息

【目的】果实酚类物质类别、含量是与橄榄营养及风味密切相关的重要品质性状,探究橄榄酚类物质生物合成的分子调控机制。【方法】以总酚含量差异显著的橄榄(低酚/高酚)为试材,分别取花后80-160 d的果实进行转录组分析,对莽草酸-水解单宁/苯丙烷-类黄酮生物合成通路差异基因进行表征,并对差异表达基因进行WGCNA分析,从中挖掘与酚类代谢途径相关的转录因子。【结果】转录组测序共获得296314条Unigene,其中73%的Unigene被注释到数据库;4个品种(系)橄榄成熟果共鉴定到1628个差异表达基因(DEGs),KEGG分析显示,DEGs在酚类代谢途径的“类黄酮生物合成”通路上显著富集;进一步对果实成熟过程莽草酸-水解单宁/苯丙烷-类黄酮生物合成途径的DEGs进行表征,结合WGCNA分析中每个模块与性状的R2和P值,筛选到4个关键模块,根据模块内基因的调控关系利用MCC拓扑分析法以度值≥1挖掘模块内关键转录因子,挖掘到137个转录因子Unigene与30个酚类合成结构基因Unigene共表达,转录因子Unigene功能注释来自35个基因家族,最多的为锌指蛋白(C2C2、C3H、C2H2、PHD),其次为B3、HB、MYB、NAC基因家族。【结论】从转录组角度初步解析了橄榄鲜食品质在酚类代谢途径的差异,同时挖掘了调控酚类代谢的差异基因,对进一步探究橄榄鲜食品质差异的分子机制提供了重要依据。

关键词：橄榄转录组酚类代谢途径转录因子

山葡萄VaSR基因家族的鉴定及Va SR1抗寒功能验证与互作蛋白筛选

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园艺学报 2024年

作者：梁国平曾宝珍刘铭边志远陈佰鸿毛娟甘肃农业大学园艺学院

为探究葡萄中丝氨酸/精氨酸富集剪接因子（SR）的抗寒功能，对山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）低温休眠期不同温度时段处理下的枝条韧皮部转录组中筛选出的Va SR1进行克隆、抗寒功能鉴定与互作蛋白筛选。从山葡萄基因组数据库中鉴定到... 详细信息

为探究葡萄中丝氨酸/精氨酸富集剪接因子（SR）的抗寒功能，对山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）低温休眠期不同温度时段处理下的枝条韧皮部转录组中筛选出的Va SR1进行克隆、抗寒功能鉴定与互作蛋白筛选。从山葡萄基因组数据库中鉴定到了13个Va SR家族成员，其保守功能结构域为RRM＿SF superfamily。对其进行系统进化和共线性分析，结果显示Va SR的多数成员被聚类到SC亚族，且与苹果SR蛋白亲缘关系较近。对Va SR1进行抗寒功能验证，转基因拟南芥植株的冰冻存活率显著低于野生型；4℃低温胁迫后转基因植株叶片中可溶性糖含量和抗氧化酶及淀粉酶活性显著低于野生型，而淀粉含量显著增加；酵母双杂交显示Va U1SNRNP和Va CYP63是Va SR1的互作蛋白，具有促进前体mRNA的剪接和参与调节细胞中相关基因的聚腺苷酸化作用。综上所述，Va SR1过表达降低了转基因植株中的淀粉酶活性，导致叶片中可溶性糖含量下降，减弱了植株的低温耐受性。此外，山葡萄中存在Va U1SNRNP和Va CYP63能够与Va SR1发生互作。

关键词：山葡萄转录因子 Va SR1 低温胁迫酵母双杂交

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草莓FaGH3.17基因的克隆及功能分析

园艺学报 2024年

作者：杨娟博郭丽丽卢世雄苟惠敏王帅珽曾宝珍毛娟甘肃农业大学园艺学院

为了研究GH3.17在草莓中对盐胁迫的响应，克隆了FaGH3.17，分析其进化关系、编码蛋白的理化性质等，进行烟草亚细胞定位以及拟南芥异源过表达，验证其在盐胁迫中的功能。结果表明，FaGH3.17为酸性且不稳定的疏水性非分泌性蛋白，主要定... 详细信息

为了研究GH3.17在草莓中对盐胁迫的响应，克隆了FaGH3.17，分析其进化关系、编码蛋白的理化性质等，进行烟草亚细胞定位以及拟南芥异源过表达，验证其在盐胁迫中的功能。结果表明，FaGH3.17为酸性且不稳定的疏水性非分泌性蛋白，主要定位在细胞核和细胞膜。FaGH3.17与蕨麻的亲缘关系最近。盐胁迫下，异源过表达FaGH3.17拟南芥株系的电导率、MDA含量、H2O2含量均高于野生型,分别升高了15.43%、42.97%、18.86%，而Pro含量、POD、SOD及CAT活性均显著低于野生型，分别降低了13.28%、15.42%、14.22%、19.87%，并且盐响应相关基因的相对表达量均显著降低，表明异源过表达FaGH3.17显著降低了拟南芥的抗氧化酶活性和渗透调节物质含量，预示着GH3.17可能会减弱植株的耐盐性。

关键词：草莓基因克隆盐胁迫功能验证