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小分子化合物与铝佐剂联用对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833保护效果的影响及机制初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 189-197页

作者：孙恬峻张晓丽夏真萍赵卓章金勇王乂中国海洋大学医药学院海洋药物教育部重点实验室青岛266003 陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038 陆军军医大学药学与检验医学系临床血液学教研室重庆400038

目的评价二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamate,DTC)、左旋咪唑(levamisole,LMS)、咪喹莫特(imiquimod,Imi)3个小分子化合物对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833免疫原性和保护效果的影响,并进一步对其机制进行初步研究... 详细信息

目的评价二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamate,DTC)、左旋咪唑(levamisole,LMS)、咪喹莫特(imiquimod,Imi)3个小分子化合物对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833免疫原性和保护效果的影响,并进一步对其机制进行初步研究。方法抗原PA0833分别与上述3种小分子以及铝佐剂配伍制备疫苗,通过肌肉注射的方式于0、14、21 d分别免疫BALB/c小鼠。收集3次免疫后血清,ELISA测定PA0833特异性IgG抗体水平。采用铜绿假单胞菌PAO1感染免疫后的小鼠,通过生存率、体重变化、临床评分、炎症因子检测和肺组织病理学改变等评价疫苗的保护效果。在此基础上,对小鼠连续7 d肌肉注射DTC,取肺脏组织进行转录组测序分析,并通过流式细胞术检测其对抗原提呈细胞活化的影响。结果联用小分子免疫组能够有效提高PA0833特异性IgG抗体效价,降低细菌感染后肺组织中细菌负荷和TNF-α、IL-6、IL-1β炎症因子水平,显著提高细菌感染后的生存率,其中DTC效果最好。转录组测序结果表明,相比于PBS对照组,DTC处理组样本有121个基因表达上调、18个基因下调;差异表达基因主要富集在免疫信号通路,IL-17信号通路活化明显。流式细胞术结果表明DTC能促进脾细胞中Th17细胞分化,且能促进抗原提呈细胞活化。结论本研究中的3种小分子都能够有效地增强抗原的免疫原性,其中DTC效果最优,可用于新型疫苗佐剂的研发。

关键词：佐剂二乙基二硫代氨基甲酸钠(DTC) 铜绿假单胞菌疫苗

基于蒲公英-桑叶治疗急性髓系白血病潜在机制的网络药理学分析

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吉林大学学报（医学版） 2024年第4期50卷 1087-1097页

作者：周鑫辰董姝含张卓沈明妹汪香君李迎刘丽梅北华大学医学技术学院微生物学检验教研室吉林吉林132000

目的:应用网络药理学分析蒲公英-桑叶在急性髓系白血病(AML)发生发展过程的作用,阐明其治疗AML的活性成分和作用机制。方法:通过中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)筛选蒲公英-桑叶的活性成分,采用SwissTargetPrediction数据库预测其... 详细信息

目的:应用网络药理学分析蒲公英-桑叶在急性髓系白血病(AML)发生发展过程的作用,阐明其治疗AML的活性成分和作用机制。方法:通过中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)筛选蒲公英-桑叶的活性成分,采用SwissTargetPrediction数据库预测其作用靶点,在症状映射(SymMap)数据库、人类基因数据库(GeneCards)、DisGeNET数据库和在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库中检索AML相关基因和蛋白靶点。对AML相关基因和蒲公英-桑叶靶基因进行比较,确定富集基因,并进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。采用Cytoscape 3.8.0软件根据靶点信息构建药物-有效成分-靶点网络和蛋白-蛋白互作(PPI)网络,采用CytoNCA插件筛选出核心基因,通过AutoDock软件进行分子对接验证。结果:对数据库检索结果进行筛选后得到39种有效成分,收集蒲公英-桑叶与AML的共同靶点148个。GO功能富集分析主要涉及细胞因子介导的信号传导途径、激酶活性正向调节和氧化应激反应等。KEGG信号通路富集分析主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路和Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号通路等。拓扑分析得到信号转导和转录激活因子3(STAT3)、表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B1(AKT1)、重组人表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、原癌基因MYC、肿瘤蛋白P53(TP53)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(CASP3)、肉瘤基因SRC、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、连环蛋白B1(CTNNB1)、磷酸肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、白细胞介素6(IL-6)、TNF、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和磷酸肌醇3-激酶调节亚基1(PIK3R1)等核心靶点。分子对接,结合亲和力最高的配对结果为蒲公英萜醇(taraxerol)与MYC(-8.74 kcal·mol^(-1)),槲皮素(quercetin)、kaemfprol、木犀草素(luteolin)和artemetin与各个靶点均有很好的结合亲和力。结论:蒲公英-桑叶主要活性成分quercetin、taraxerol、kaemfprol、luteolin和artemetin可能通过调控AKT1、STAT3、HSP90AA1、IL-6和MAPK1发挥抗AML的作用,对PI3K-AKT信号通路的调节是蒲公英-桑叶发挥抗AML作用的重要机制。

关键词：急性髓系白血病蒲公英桑叶网络药理学分子对接

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没食子酸与氯硝柳胺联合灭螺作用研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 251-258页

作者：郑涛刘佳豪李彬李佳珊聂娟熊涛湖南中医药大学医学院病原生物学教研室长沙410006

目的本研究旨在探讨具有交替氧化酶(AOX)抑制活性的中药单体分子没食子酸和氯硝柳胺的联合灭螺效果及其灭螺机制。方法阴性钉螺采自湖北省公安县,随机分为7组,空白对照组(H_(2)O),实验组分别为氯硝柳胺(N1组:0.06 mg/L,N2组:0.1 mg/L)... 详细信息

目的本研究旨在探讨具有交替氧化酶(AOX)抑制活性的中药单体分子没食子酸和氯硝柳胺的联合灭螺效果及其灭螺机制。方法阴性钉螺采自湖北省公安县,随机分为7组,空白对照组(H_(2)O),实验组分别为氯硝柳胺(N1组:0.06 mg/L,N2组:0.1 mg/L)和没食子酸(G1组:0.8 g/L,G2组:1.6 g/L)单独使用,及联合使用(M1组:0.06 mg/L氯硝柳胺+0.8 g/L没食子酸,M2组:0.06 mg/L氯硝柳胺+1.6 g/L没食子酸)。检测各组钉螺经药物浸杀12、24和48 h后的存活率,液氮包埋后切片并染色,光学显微镜下观察并定量分析,检测钉螺软体切片中细胞色素C氧化酶(CCO)和乳酸脱氢酶(LDH)的相对酶活力值,以平均光密度值表示。钉螺匀浆后离心、取上清,DCFH-DA探针共孵育,用BCA蛋白定量试剂盒测定总蛋白含量,多功能酶标仪检测荧光强度,ROS值以样品测得的荧光强度(FI)除以蛋白质浓度(μg)的值表示,用总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒测定SOD水平。钉螺死亡率的差异分析采用卡方检验;CCO活性和氧化应激水平的数据用Levene’s Test确定方差齐性后,用Tukey HSD的多重比较方法进行不同组间的两两比较。结果G1和G2组浸杀后未表现出显著的灭螺效应。M1组和M2组在浸杀48 h后的钉螺死亡率分别达到70.0%(56/80)和84.2%(101/120),均高于N1组(44.4%,32/72)(χ2=9.13、32.52,均P学意义(χ2=0.11、2.58,均P>0.05)。N1和N2组钉螺的LDH活性呈下降趋势;M1组和M2组钉螺体内CCO和LDH活性均降低(均P学意义(均P<0.05)。M1组在处理后24 h的SOD活性为(5.56±0.91)UI/g,高于空白对照组的(5.26±0.08)UI/g(P<0.05);M2组的SOD活性在处理后12、24和48 h呈现先升高后降低的趋势[(2.40±0.45)、(8.14±0.15)、(1.60±0.21)UI/g],与空白对照组在相应时间点的(3.54±0.94)、(5.26±0.08)、(5.10±0.87)UI/g相比,变化趋势显著(均P<0.05)。M1组在处理后24 h和48 h的ROS水平分别为(1619.00±168.25)FI/μg和(1866.65±211.79)FI/μg,M2组在48 h后的ROS水平达到(2451.29±195.91)FI/μg,均高于空白对照组在相应时间点的(802.37±114.69)、(1393.81±86.12)FI/μg(均P<0.05)。结论没食子酸显著增强了低浓度氯硝柳胺的灭螺效果,其灭螺机制为通过阻断AOX的代偿上调,进一步加重了钉螺能量代谢失衡和氧化应激压力。

关键词：湖北钉螺没食子酸氯硝柳胺灭螺效果葡萄糖代谢酶活性氧化应激水平

Siglec-E影响小白菊内酯靶向MAPK/NF-κB通路抑制小胶质细胞M1极化

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陆军军医大学学报 2024年第7期46卷 651-660页

作者：付文莹王鹏博唐翔宇冯力元黄钰婷李鹏陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系生药学与中药学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系药剂学教研室重庆400038

目的探讨唾液酸结合样凝集素E(sialic acid binding lectin E,Siglec-E)对小白菊内酯(parthenolide,PTL)抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(BV2)M1极化作用的影响。方法①从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)获取Siglece相关小鼠脑组织单细胞测序数据,分为野生型组(WT,n=3)和敲除型组(Siglece^(-/-),n=4)。从中筛选出小胶质细胞并分析相关差异基因及通路富集。通过shRNA干扰技术构建BV2细胞株模型,得到NC-shRNA BV2和Siglece-shRNA BV2细胞并检测Siglec-E(Siglece)表达水平。②将NC-shRNA和Siglece-shRNA细胞分别分为Control组、LPS组、PTL组和PTL+LPS组(n=3),采用RT-qPCR检测小胶质细胞M1极化标志物iNOS、IL-1β和IL-6的mRNA水平。将Siglece^(fl/fl)和Cx3cr1^(cre)小鼠交配,获得小胶质细胞特异性Siglec-E缺失(Siglece^(fl/fl)×Cx3cr1^(cre))小鼠,并建立LPS诱导的神经炎症模型。③将出生4 d的各9只WT和Siglece^(fl/fl)×Cx3cr1^(cre)雄鼠分成Control组、LPS组和PTL+LPS组(n=3)。采用RT-qPCR、免疫荧光技术和Western blot验证敲除效果以及极化相关通路,研究Siglec-E影响PTL抑制小胶质细胞M1极化的机制。结果与NC-shRNA组比较,Siglece-shRNA组中Siglec-E表达显著降低(P<0.01),说明SiglecE敲除细胞模型建立成功。在LPS刺激的条件下,与Control组比较,NC-shRNA细胞和Siglece-shRNA细胞的iNOS、IL-1β和IL-6的mRNA水平均显著上调(P<0.01)。PTL与LPS共同作用下,NC-shRNA细胞中上述M1极化的标志物均明显下降(P<0.05)。而对于Siglece-shRNA细胞,上述M1极化的标志物无显著下调。PTL对BV2细胞JNK、IκB蛋白的磷酸化具有抑制作用(P<0.01),也可抑制NF-κB核转位,而下调Siglec-E则会减弱该作用。与WT组小鼠比较,Siglece^(fl/fl)×Cx3cr1^(cre)小鼠小胶质细胞Siglec-E表达显著降低(P<0.01),PTL对Siglece^(fl/fl)×Cx3cr1^(cre)小鼠小胶质细胞NF-κB磷酸化水平的抑制作用也降低。结论小胶质细胞Siglec-E缺失会减弱PTL靶向MAPK/NF-κB通路对其M1极化的抑制作用。

关键词：唾液酸结合样凝集素E 小胶质细胞小白菊内酯 M1极化

MiR-4465修饰的间质干细胞来源的小细胞外囊泡通过靶向LOXL2表达抑制肝纤维化的进展（英文）

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2024年第7期 594-610页

作者：王岩金陈逸菲杨馥吉虞晓龙楚鹰周静严永敏奚剑波江苏大学附属武进医院检验科江苏大学医学院检验医学系常州市分子诊断与肿瘤精准医学重点实验室徐州医科大学武进临床学院

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的关键病理过程，其特征是胶原蛋白的过量沉积。然而，目前对于肝纤维化仍缺乏有效的治疗方法。肝星状细胞（HSC）分泌的赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)是胶原交联和HSC活化的关键分子，也是治疗肝纤维化的... 详细信息

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的关键病理过程，其特征是胶原蛋白的过量沉积。然而，目前对于肝纤维化仍缺乏有效的治疗方法。肝星状细胞（HSC）分泌的赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)是胶原交联和HSC活化的关键分子，也是治疗肝纤维化的重要靶点。研究表明，间质干细胞来源的小细胞外囊泡（MSC-sEV）是治疗慢性肝病的有效方法。MSC-sEV可将miRNA递送到靶细胞或组织中。但目前尚不明确miR-4465是否能够靶向LOXL2抑制HSC活化，同时MSC-sEV是否可以作为基因治疗载体通过携带miR-4465从而抑制肝纤维化进展也不清楚。本研究探讨了miR-4465对于LOXL2的调控作用及miR-4465修饰的MSC-sEV(MSC-sEVmiR-4465)对LOXL2表达和肝纤维化进展的影响。结果表明，miR-4465可以靶向HSC中LOXL2基因的启动子。此外，MSC-sEVmiR-4465在体外通过下调LOXL2的表达来抑制HSC的活化和胶原的表达。而MSC-sEVmiR-4465注射可减少CCl4诱导的小鼠模型中HSC的活化和胶原沉积。MSC-sEVmiR-4465也能通过调控LOXL2抑制肝癌细胞Hep G2的迁移和侵袭。总之，我们发现MSC-sEV可以通过递送miR-4465到HSC中靶向LOXL2延缓肝纤维化的进展，有望成为未来肝病治疗的一种新策略。

关键词：间质干细胞(MSC) 小细胞外囊泡 MiR-4465 肝星状细胞(HSC) 肝纤维化

肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育影响的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 169-176页

作者：谭涅焦世铭丁艳朱成宇徐文岳陆军军医大学基础医学院病原生物学教研室重庆400038 重庆大学医学院重庆400044

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法分别提取Hepa1-6和HepG2-CD81细胞RNA,逆转PCR扩增C3、C3aR1、C5、C5aR1基因。Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞悬液分别加入蛋白酶和磷酸酶裂解,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法测... 详细信息

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法分别提取Hepa1-6和HepG2-CD81细胞RNA,逆转PCR扩增C3、C3aR1、C5、C5aR1基因。Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞悬液分别加入蛋白酶和磷酸酶裂解,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法测定蛋白浓度,用蛋白质免疫印迹(Western blotting)测定肝细胞内补体和受体表达情况。将表达红色荧光蛋白(RFP)的约氏疟原虫BY265-RFP株、伯氏疟原虫ANKA株的昆明小鼠供斯氏按蚊吸血,17~19 d后解剖分离斯氏按蚊唾液腺,收集子孢子,在24孔板中按50000个子孢子/孔加入HepG2-CD81细胞(105个/孔)孵育6、12、24 h;另设置共孵育3 h后加入C5aR拮抗剂(40 nnmol/L,每孔500μl)的组别。经4%多聚甲醛固定、封闭,非透膜组加入一抗C3a兔抗人IgG抗体(1∶500)或rC5a兔抗人IgG抗体(1∶500)4℃孵育过夜,加入绿色Dylight 488荧光标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入DAPI染色液孵育5 min;透膜组加入一抗UIS4山羊多克隆抗体(1∶500)4℃孵育过夜,加入绿色IFKineTM荧光标记的驴抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入CD88兔多克隆抗体(1∶400)4℃孵育过夜,加入红色Dylight 649荧光标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入DAPI染色液孵育5 min,激光共聚焦显微镜观察补体在纳虫空泡周围的富集情况。取眼镜蛇毒因子(CVF)腹腔注射至C57BL/6小鼠,为CVF组;并设置C3-/-组(C3全基因敲除C3-/-小鼠)和对照组(C57BL/6小鼠)。取10000个约氏疟原虫子孢子感染各组小鼠,取肝脏提取总RNA后逆转录合成cDNA,荧光定量PCR测定疟原虫18S rRNA含量,肝脏虫荷用18S rRNA的相对含量表示。以尾静脉注射方式,用200个约氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BL/6小鼠)10只、C3aR^(-/-)小鼠10只;1000个约氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BL/6小鼠)5只、C5aR全基因敲除C5aR^(-/-)小鼠6只和肝脏C5aR条件性敲除Alb-cre+/+C5aRflox/flox杂交小鼠5只;1000个伯氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BL/6小鼠)6只和C5aR^(-/-)小鼠6只,感染后3 d开始取尾静脉血,制成薄血膜涂片,吉氏染色后观察,至所有小鼠均出现红内期疟原虫为止。采用Graphpad prism 9.0软件进行统计学分析。正态分布的数据采用t检验比较连续变量,两两差异比较采用单因素方差分析(ANOVA)进行多重比较;非正态分布数据比较采用Mann-Whitney U检验。结果PCR结果可见,Hepa1-6细胞株内扩增出C3(358 bp)、C5(267 bp)及其受体C3aR(222 bp)、C5aR(388 bp)基因;HepG2-CD81细胞株内扩增出C3(202 bp)、C5(220 bp)、C3aR(299 bp)和C5aR(374 bp)基因。Western blotting检测结果发现,两种细胞均有C3、C5、C3aR和C5aR蛋白表达。激光共聚焦显微镜成像可见,细胞核经DAPI染色呈蓝色荧光,约氏疟原虫红外期呈红色自发荧光,非透膜组HepG2-CD81细胞内高表达的C3a和C5a呈绿色荧光,与纳虫空泡分布区域重叠;透膜组C5aR(粉色)与纳虫空泡膜(绿色)重叠;加入C5aR拮抗剂组别的纳虫空泡膜上仍有C5aR表达。约氏疟原虫子孢子感染后,对照组、CVF组、C3-/-组的肝脏虫荷(18S rRNA相对含量)分别为0.954±0.523、0.958±0.231、0.638±0.437,3组间差异均无统计学意义(P>0.05)。约氏疟原虫子孢子感染后,对照组和C3aR^(-/-)小鼠分别在(5.30±0.78)d和(5.30±0.78)d后出现红内期;伯氏疟原虫子孢子感染后,对照组和C5aR^(-/-)小鼠分别在(3.67±0.47)d和(3.83±0.69)d后出现红内期;2组基因敲除小鼠红内期出现时间与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。约氏疟原虫子孢子感染后,对照组、Alb-cre^(+/+)C5aR^(flox/flox)小鼠和C5aR^(-/-)小鼠红内期的出现时间分别为(4.00±0.00)、(4.00±0.00)、(4.17±0.37)d,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育无显著影响。

关键词：疟原虫红外期肝细胞局部补体

数字聚合酶链式反应技术及其在疾病检测中的研究进展

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分析化学 2024年第1期52卷 13-21页

作者：包旭东胡孝林万其武张洪罗阳重庆大学医学院智慧检验与分子医学中心重庆大学生物工程学院国家卫健委出生缺陷与生殖健康重点实验室山东大学第二医院检验医学中心

数字聚合酶链式反应（Digital polymerase chain reaction, d PCR）技术是通过将反应体系均分到数万个独立的PCR反应单元进行单分子级扩增，并结合泊松分布实现单拷贝核酸分子精确定量分析的PCR技术。dPCR技术具有灵敏度高、无需标准曲... 详细信息

数字聚合酶链式反应（Digital polymerase chain reaction, d PCR）技术是通过将反应体系均分到数万个独立的PCR反应单元进行单分子级扩增，并结合泊松分布实现单拷贝核酸分子精确定量分析的PCR技术。dPCR技术具有灵敏度高、无需标准曲线等优势，被广泛应用于疾病检测领域。随着阶梯乳化和三维成像等技术的引入，dPCR技术在检测精度、多重检测和检测速度等方面得到极大改进，显著提升了其临床疾病诊断性能。本文追溯了dPCR技术的发展历程，对其在肿瘤和感染等疾病检测中的应用进行了综述，分析了dPCR技术发展存在的挑战与机遇，以期为dPCR技术未来的开发利用提供参考，推动临床检验分子技术高质量发展。

关键词：数字聚合酶链式反应微流控芯片疾病诊断单分子检测评述

来源：博看期刊

G-四链体结构与DNA甲基化修饰的交互影响:当前研究与未来展望

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化学通报 2024年第9期87卷 1098-1106页

作者：周鑫辰张卓董姝含靳茁战星彤王鹤霖杨舒惠刘丽梅北华大学医学技术学院微生物学检验教研室吉林市132013

基因表达调控是生物学中复杂而关键的过程,涉及细胞内外多因素及DNA结构构成。DNA双螺旋是基本形式,但非规范DNA结构如G-四链体(G4)在基因组关键区域中广泛存在,参与调节基因表达、维持染色体稳定性和影响端粒伸长。G4同时存在于DNA和RN... 详细信息

基因表达调控是生物学中复杂而关键的过程,涉及细胞内外多因素及DNA结构构成。DNA双螺旋是基本形式,但非规范DNA结构如G-四链体(G4)在基因组关键区域中广泛存在,参与调节基因表达、维持染色体稳定性和影响端粒伸长。G4同时存在于DNA和RNA中,与基因表达调控密切相关。DNA甲基化是表观遗传标记,近年研究发现其与多种疾病关联,影响细胞功能。本文综述G4与DNA甲基化的关系,特别在CpG(Cytosine-phosphate-Guanine)岛区域的相互影响,为相关疾病的预防和治疗提供新策略。

关键词： G-四链体 DNA甲基化 CpG岛 DNA复制染色质结构状态

新型肠炎沙门菌菌影候选疫苗在小鼠免疫应答和保护功效的评估

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第4期44卷 295-303页

作者：杨慧韩雪杜小春焦红梅郑国军常州市第三人民医院检验科常州213000 扬州大学医学院/转化医学研究院病原生物学教研室扬州225001

目的比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法用SE-ghost接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平;流式细... 详细信息

目的比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法用SE-ghost接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平;流式细胞仪检测小鼠脾脏CD3^(+)CD4^(+)T、CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比变化和脾脏内细胞因子IL-4、IFN-γ分泌;三次免疫后所有小鼠口服半数致死量肠炎沙门菌进行强毒攻击。用SE-ghost刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs),流式细胞仪检测表面分子抗体APC-CD11c、FITC-MHC ClassⅡ、PE-CD40、FITC-CD86、PE-CD80表达量;双抗体夹心ELISA测定BMDCs上清液IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12p70的产量。结果与PBS组相比,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组小鼠体内肠炎沙门菌特异性抗体IgG和IgA水平明显增高;脾脏CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比上调、高分泌细胞因子IL-4、IFN-γ。肌肉注射SE-ghost比口服可诱导更强的体液和细胞免疫应答。致病菌肠炎沙门菌强毒攻击后,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组生存率高达80%。与对照组相比,BMDCs经SE-ghost刺激后高表达表面成熟分子抗体CD86、CD80、CD40、MHCⅡ,高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70。结论通过肌肉注射SE-ghost进行免疫,可在小鼠中引发更强大的抗原特异性免疫应答,以防止沙门菌感染。SE-ghost是一种有用的沙门菌候选疫苗。

关键词：肠炎沙门菌细菌菌影灭活疫苗免疫应答保护功效