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重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、纯化及鉴定

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四川大学学报：医学版 2005年第3期36卷 301-304页

作者：牛挺刘霆贾永前杨莉田聆刘继彦胡兵吴扬魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗国家重点实验室

目的　构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法　首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET- x V... 详细信息

目的　构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法　首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET- x VEGF和p ET- m VEGF。筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确性后,再转染感受态大肠杆菌BL 2 1(DE3) ,经IPTG诱导蛋白质表达。表达产物经Ni- NTA亲合层析及肠激酶特异性酶切进行分离纯化,最后用SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法进行鉴定。结果　限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定等显示目的基因片段和阅读框架正确无误,表明非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET-x VEGF和p ET- m VEGF构建成功。重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,分离纯化的表达产物x VEGF和m VEGF 的纯度达到95 %以上,其相对分子质量与预期值一致。抗小鼠VEGF抗体可特异性识别x VEGF和m VEGF。结论　重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、分离纯化及鉴定成功,为进一步研究异种VEGF蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。

关键词：血管内皮细胞生长因子重组蛋白质原核表达

无机焦磷酸盐及其相关调控因子对牙周支持组织的矿化调控作用

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口腔生物医学 2024年第1期15卷 49-52页

作者：蔡雨镝谢旭东吴亚菲口腔疾病防治全国重点实验室国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院牙周病科四川成都610041

牙周治疗的最终目标是重建功能性的牙骨质-牙周膜-牙槽骨复合体(即牙周复合体)。如何精准调控不同牙周组织的矿化是实现牙周组织再生的关键和难点。无机焦磷酸盐(PPi)及其相关调控因子对牙槽骨、牙骨质和牙周膜的矿化发挥重要调节作用... 详细信息

牙周治疗的最终目标是重建功能性的牙骨质-牙周膜-牙槽骨复合体(即牙周复合体)。如何精准调控不同牙周组织的矿化是实现牙周组织再生的关键和难点。无机焦磷酸盐(PPi)及其相关调控因子对牙槽骨、牙骨质和牙周膜的矿化发挥重要调节作用。本文就PPi及其相关调控因子对牙周支持组织的矿化调控作用的研究进展进行分析和总结,以期为牙周组织再生提供理论依据。

关键词：焦磷酸盐矿化牙槽骨牙骨质牙周膜

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儿童肾脏实体肿瘤治疗方式的研究进展

临床医学进展 2024年第6期14卷 245-254页

作者：林洁石秦林田小毛刘丰重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室结构性出生缺陷与器官修复重建重庆市重点实验室重庆四川大学华西第二医院小儿泌尿外科出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川成都

近年来,大多数儿童肾肿瘤的治疗通过传统治疗手段(手术及放化疗)可得到有效治疗,但某些临床分期高,组织分化差的肿瘤复发率仍较高,总体生存率依旧较低。随着新技术、新理念不断出现,靶向、介入、消融、免疫、生物治疗成为目前肿瘤治疗... 详细信息

近年来,大多数儿童肾肿瘤的治疗通过传统治疗手段(手术及放化疗)可得到有效治疗,但某些临床分期高,组织分化差的肿瘤复发率仍较高,总体生存率依旧较低。随着新技术、新理念不断出现,靶向、介入、消融、免疫、生物治疗成为目前肿瘤治疗研究关注度较高的治疗方式,在儿童肿瘤中亦取得丰富的研究成果。现对儿童肾脏肿瘤的治疗方式研究进展做一回顾性总结,以期为临床治疗个体化、多元化,改善患儿复发率及生存率起到一定的参考价值。

关键词：肾脏肿瘤手术综述化疗放疗

异种同源表皮生长因子受体EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的表达

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四川大学学报（医学版） 2005年第2期36卷 153-156页

作者：方芳李炯文艳君田聆魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室肿瘤中心成都610041

目的　实现异种同源表皮生长因子受体 EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达。方法　将鼠和人的 EGFR胞外段目的基因 (mer,her)与分泌型毕赤酵母表达载体 p PICZa A重组 ,构建了相应的重组表达质粒 p PICZa A- mer和 p PICZa A- h... 详细信息

目的　实现异种同源表皮生长因子受体 EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达。方法　将鼠和人的 EGFR胞外段目的基因 (mer,her)与分泌型毕赤酵母表达载体 p PICZa A重组 ,构建了相应的重组表达质粒 p PICZa A- mer和 p PICZa A- her,用 Sac 将重组质粒线性化后 ,电穿孔转化酵母菌株 GS115 ,利用 Zeocin筛选阳性克隆 ,挑出阳性克隆用甲醇小规模诱导表达后 ,进行 SDS- PAGE分析及 Western- blot检测 ,筛选高表达量的克隆作大规模诱导表达。结果　获得了鼠和人的 EGFR胞外段目的蛋白在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达 ,SDS-PAGE分析及 Western- blot检测得到预期条带 ,相对分子质量约为 95× 10 3。免疫印迹分析表明 ,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论　 p PICZa A- mer和 p PICZa A- her重组质粒在甲醇营养型酵母中可经甲醇诱导表达鼠和人的 EGFR胞外段目的蛋白。

关键词：表皮生长因子受体胞外段毕赤巴斯德分泌表达

异种基质金属蛋白酶-2肿瘤细胞疫苗的制备与功能研究

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四川大学学报（医学版） 2004年第3期35卷 301-304页

作者：易韬田聆宿静梅刘健魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室肿瘤中心成都610041

目的　构建异种基质金属蛋白酶 - 2 (matrix m etalloproteinase- 2 ,MMP- 2 )肿瘤细胞疫苗 ,初步探讨疫苗的功能。方法　将鸡 MMP- 2转染到 CT2 6细胞内制成肿瘤细胞疫苗 ,用 MTT〔四甲基偶氮唑盐 ,3- (4 ,5 -dimetylthiazol- 2 - yl) ... 详细信息

目的　构建异种基质金属蛋白酶 - 2 (matrix m etalloproteinase- 2 ,MMP- 2 )肿瘤细胞疫苗 ,初步探讨疫苗的功能。方法　将鸡 MMP- 2转染到 CT2 6细胞内制成肿瘤细胞疫苗 ,用 MTT〔四甲基偶氮唑盐 ,3- (4 ,5 -dimetylthiazol- 2 - yl) - 2 ,5 - diphenyltetrazolium brom ide〕比色法检测转染后的细胞活性 ,在小鼠体内做疫苗的致瘤性实验和保护性实验。结果　用 RT- PCR挑选出 MMP- 2表达量最高的细胞株作为研究对象。通过 MTT比色法发现转染虽然增加了肿瘤细胞内 MMP- 2的表达 ,但是并没有改变肿瘤细胞的生长趋势。经过致瘤性实验和保护性实验 ,还初步发现疫苗可以起到抑制肿瘤生长和延长动物生存时间的作用。结论　异种基质金属蛋白酶 - 2肿瘤细胞疫苗构建成功 ,并且具有抗肿瘤的作用。

关键词：基质金属蛋白酶-2(MMP-2) 疫苗抗肿瘤

Vasostatin重组腺病毒的构建和体外表达的研究

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四川大学学报（医学版） 2004年第4期35卷 460-462,469页

作者：丁振宇杨莉田聆刘芬肖飞魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室肿瘤中心成都610041

目的　构建 vasostatin重组腺病毒表达载体 ,并进行体外表达研究。方法　根据 Gen Bank中提供的钙网蛋白序列 ,设计并合成引物 ,以人骨骼肌 c DNA文库为模板用 PCR扩增出人 vasostatin基因 ,将其克隆入 T载体。经酶切及测序鉴定后亚克... 详细信息

目的　构建 vasostatin重组腺病毒表达载体 ,并进行体外表达研究。方法　根据 Gen Bank中提供的钙网蛋白序列 ,设计并合成引物 ,以人骨骼肌 c DNA文库为模板用 PCR扩增出人 vasostatin基因 ,将其克隆入 T载体。经酶切及测序鉴定后亚克隆至穿梭载体 ,与经过限制酶处理的骨架腺病毒载体 DNA- TPC复合物共转染 2 93细胞。用 Western blot检测体外表达。结果　 PCR扩增出约 5 90 bp产物 ,测序结果与文献报道一致。用 PCR及Western blot证实重组腺病毒构建成功 ,能有效的表达出 vasostatin蛋白。结论　 vasostatin重组腺病毒载体能有效的在体外表达出

关键词： vasostatin 腺病毒基因治疗

鹌鹑血管内皮生长因子受体Quek1胞外段第2～4区cDNA在毕赤酵母中的表达和鉴定

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生物医学工程学杂志 2008年第1期25卷 157-160,167页

作者：刁鹏文艳君王永生杜小波周行魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗国家重点实验室肿瘤中心成都610041

以PCR法从携带有鹌鹑血管内皮生长因子受体quekl（qVEGFR）的质粒中扩增获得qVEFR胞外段第2～4区cDNA片段，并将其定向克隆到毕赤酵母表达载体pPiCZα中，获得重组表达质粒pPICZaA-qVEGFR2。然后将用SacⅠ酶线性化的pPICZαA-qVEGFR2质... 详细信息

以PCR法从携带有鹌鹑血管内皮生长因子受体quekl（qVEGFR）的质粒中扩增获得qVEFR胞外段第2～4区cDNA片段，并将其定向克隆到毕赤酵母表达载体pPiCZα中，获得重组表达质粒pPICZaA-qVEGFR2。然后将用SacⅠ酶线性化的pPICZαA-qVEGFR2质粒电转化到毕赤酵母菌GS115中，经Zeocin抗性和PCR筛选得到阳性重组菌株。重组菌株用甲醇进行诱导表达后，通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定蛋白表达产物，结果证实qVEGFR2胞外段第2～4区cDNA在毕赤酵母中获得了分泌性表达，为进一步研究和制备肿瘤蛋白疫苗打下了基础。

关键词：血管内皮生长因子受体2 毕赤酵母蛋白表达肿瘤疫苗

二维MXenes在口腔医学中应用的研究进展

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口腔疾病防治 2024年

作者：黄思钟永进莫安春口腔疾病防治全国重点实验室国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院口腔种植科

MXenese是材料科学中的一类二维无机化合物，这些材料由几个原子层厚度的过渡金属碳化物、氮化物或碳氮化物构成，由于MXene材料表面有羟基或末端氧，它们有着过渡金属碳化物的金属导电性。由于MXenese独特的光学、机械、电热和生物相... 详细信息

MXenese是材料科学中的一类二维无机化合物，这些材料由几个原子层厚度的过渡金属碳化物、氮化物或碳氮化物构成，由于MXene材料表面有羟基或末端氧，它们有着过渡金属碳化物的金属导电性。由于MXenese独特的光学、机械、电热和生物相容性，在生物医学领域如组织工程、抗菌剂、光热治疗、药物/基因传递、传感和再生医学等方面被广泛应用。本文就MXene基复合材料的合成改性方法、在口腔医学领域的研究应用及其在组织工程临床应用中的发展前景和面临的挑战做一综述。MXene纳米材料的生物相容性和成骨特性使其具有促进细胞增殖、骨再生整合的潜能。其抗细菌黏附和生物膜形成作用可应用于龋病的预防及种植体表面涂层。优异的光热、导电及机械敏感性使其可用于载药、生物光热治疗、免疫信号传感和基因检测。在此背景下，MXene在骨组织工程、抗菌、药物输送、牙科生物材料的物理力学性能增强、口腔癌和牙周病监测治疗等方面的应用取得了一些突出的成果。然而对口腔疾病的防治相关研究较少，目前MXenes基纳米材料的特性及表面改性研究已较为全面，未来可重点关注对MXene剂量依赖的生物安全性、细胞分子机制及信号通路的研究，以期充分发挥其在口腔临床及组织工程领域的独特优势。

关键词： MXene 纳米材料生物相容性口腔医学骨组织工程骨再生龋病抗菌性能载药功能口腔肿瘤牙周炎治疗监测

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抗肿瘤血管生成免疫治疗的研究进展

中国科学（C辑） 2004年第3期34卷 203-209页

作者：侯建梅田聆魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗重点实验室肿瘤中心成都610041

肿瘤的生长和转移依赖血管生成,近年来抗血管生成治疗肿瘤已取得了较大的进展,在被动免疫治疗方面,重组的人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体Avastin已正式被美国食品及药物管理局批准为抗肿瘤血管生成药物,这是迄今第一个抗肿瘤血管... 详细信息

肿瘤的生长和转移依赖血管生成,近年来抗血管生成治疗肿瘤已取得了较大的进展,在被动免疫治疗方面,重组的人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体Avastin已正式被美国食品及药物管理局批准为抗肿瘤血管生成药物,这是迄今第一个抗肿瘤血管生成的生物制剂;在主动免疫治疗方面,通过多种途径如异种同源分子的交叉免疫反应或树突状细胞的抗原递呈功能等成功突破了机体对自身抗原的免疫耐受,产生了较好的抗肿瘤血管生成作用.本文就近年来抗肿瘤血管生成免疫治疗方面的研究和进展做一综合论述.

关键词：抗肿瘤血管血管生成免疫治疗血管内皮生长因子分子免疫交叉反应