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猪博卡病毒NP1基因的克隆与原核表达

华北农学报 2011年第3期26卷 28-31页

作者：李彬毛立何孔旺温立斌茅爱华张雪寒倪艳秀郭容利马俊杰周俊明吕立新俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴... 详细信息

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为46 kDa的融合蛋白,蛋白表达量较高,而且蛋白以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western Blot结果显示,表达的NP1蛋白能与His抗体发生特异性的免疫反应,表明原核表达的NP1蛋白具有良好的反应原性。

关键词：猪博卡病毒 NP1基因克隆原核表达

两个大豆开花期QTL定位及对农艺性状的影响分析

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华北农学报 2013年第2期28卷 63-69页

作者：王涛杨春燕赵青松闫龙肖付明智海剑张孟臣国家大豆改良中心南京农业大学大豆研究所作物遗传与种质创新国家重点实验室江苏南京210095 河北省农林科学院粮油作物研究所国家大豆改良中心石家庄分中心农业部黄淮海大豆生物学与遗传育种重点实验室河北省作物遗传育种重点实验室河北石家庄050031 邯郸市农业科学院河北邯郸056001

以冀豆12为母本,冀nf 58为父本通过杂交构建包含175个家系的F9:11重组自交系群体为试验材料。采用134个SSR标记,利用Kosambi函数绘制了一张包含117个标记,长度为1 373.6 cM的遗传图谱。运用QTL Cartogra-pher v2.5软件的复合区间作图法(... 详细信息

以冀豆12为母本,冀nf 58为父本通过杂交构建包含175个家系的F9:11重组自交系群体为试验材料。采用134个SSR标记,利用Kosambi函数绘制了一张包含117个标记,长度为1 373.6 cM的遗传图谱。运用QTL Cartogra-pher v2.5软件的复合区间作图法(CIM)和QTL Network 2.0软件的基于混合线性模型的区间作图法(NWIM)同时检测到2个控制开花期性状的QTL。其中,qFTO-1定位在O连锁群标记区间Satt581～Sat_190内,加性效应值分别为2.49和2.02,增效基因来自nf 58,贡献率最高为27.2%;qFTC2-1定位在C2连锁群标记区间Satt557～Sat_251内,加性效应值分别为-3.50和-3.84,增效基因来自冀豆12,贡献率最高为55.6%。2个连锁群上QTL间存在加性×加性上位互作效应。效应值为-0.672 8,重组型大于亲本型。2个QTL对产量相关性状有显著影响,与表型相关分析结果的趋势一致。其中,qFTO-1平均提高单株产量2.62 g,qFTC2-1平均提高单株产量2.26 g。这些研究为分子标记辅助育种及分子克隆提供理论依据。

关键词：大豆开花期相关分析 QTL 上位互作效应

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海南地方豇豆种质资源表型多样性分析

种子 2023年第11期42卷 9-15页

作者：伍壮生吴月燕李雪峤王小娟高芳华海南省农业科学院蔬菜研究所/海南省瓜菜育种工程技术研究中心/海南省蔬菜生物学重点实验室海口571100

以收集的64份海南地方豇豆种质资源为研究对象,采用相关性分析、主成分分析和聚类分析,对22个主要表型性状进行多样性分析。结果表明,海南地方豇豆种质资源具有丰富的遗传多样性,各性状的变异系数为10.26%~66.71%,遗传多样性指数为0.31~... 详细信息

以收集的64份海南地方豇豆种质资源为研究对象,采用相关性分析、主成分分析和聚类分析,对22个主要表型性状进行多样性分析。结果表明,海南地方豇豆种质资源具有丰富的遗传多样性,各性状的变异系数为10.26%~66.71%,遗传多样性指数为0.31~3.28。22个表型性状间存在复杂的相关关系,其中,嫩荚重与嫩荚长、嫩荚宽的相关系数最高,分别为0.934和0.832。8个主成分的累积贡献率为78.6141%。聚类结果表明,在欧氏距离为6.49时,可将64份海南地方豇豆种质资源划分为七个类群,其中第Ⅰ类群综合性状最好,主要表现为嫩荚较长、较宽、嫩荚较重、豆粒较长,可用于高产品种的选育。

关键词：豇豆种质资源表型性状聚类分析遗传多样性

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河南省16个主栽小麦品种抗叶锈基因分析

植物遗传资源学报 2017年第3期18卷 546-554页

作者：张林王静张梦雅许换平闫红飞刘大群河北农业大学植物保护学院/国家北方山区农业工程技术研究中心/河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心保定071000

为了明确河南省小麦品种的抗叶锈性及抗叶锈基因的分布,为小麦品种推广与合理布局、叶锈病防治及抗病育种提供依据,本研究利用2015年采自河南省的5个小麦叶锈菌流行小种混合菌株,对近几年河南省16个主栽小麦品种进行了苗期抗性鉴定,然... 详细信息

为了明确河南省小麦品种的抗叶锈性及抗叶锈基因的分布,为小麦品种推广与合理布局、叶锈病防治及抗病育种提供依据,本研究利用2015年采自河南省的5个小麦叶锈菌流行小种混合菌株,对近几年河南省16个主栽小麦品种进行了苗期抗性鉴定,然后选用12个小麦叶锈菌生理小种对这些品种进行苗期基因推导,同时利用与24个小麦抗叶锈基因紧密连锁(或共分离)的30个分子标记对该16个品种进行了抗叶锈基因分子检测。结果显示,供试品种苗期对小麦叶锈菌混合流行小种均表现高度感病;基因推导与分子检测结果表明,供试品种可能含有Lr1、Lr16、Lr26和Lr30这4个抗叶锈基因,其中先麦8号含有Lr1和Lr26;郑麦366和郑麦9023含有Lr1;西农979和怀川916含有Lr16;中麦895、偃展4110、郑麦7698、平安8号、众麦1号、周麦16、衡观35和矮抗58含有Lr26;周麦22中含有Lr26,还可能含有Lr1和Lr30;豫麦49-198和洛麦23可能含有本研究中检测以外的其他抗叶锈基因。因此,河南省主栽小麦品种的抗叶锈基因丰富度较低,今后育种工作应注重引入其他抗叶锈性基因,提高抗叶锈性,有效控制小麦叶锈病。

关键词：小麦叶锈病抗叶锈基因基因推导分子检测

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碾轧对马铃薯淀粉的机械力化学效应

食品科学 2017年第19期38卷 18-23页

作者：牛凯代养勇董海洲侯汉学张慧刘传富纪庆柱张勇山东农业大学食品科学与工程学院山东省粮食加工技术工程技术研究中心山东泰安271018

以马铃薯淀粉为原料,研究碾轧处理对淀粉结构和性质的影响。通过扫描电子显微镜、X射线衍射、差示扫描量热仪、傅里叶变换红外光谱仪、快速黏度分析仪、偏光显微镜等手段揭示碾轧对马铃薯淀粉的机械力化学效应。结果表明,碾轧处理对淀... 详细信息

以马铃薯淀粉为原料,研究碾轧处理对淀粉结构和性质的影响。通过扫描电子显微镜、X射线衍射、差示扫描量热仪、傅里叶变换红外光谱仪、快速黏度分析仪、偏光显微镜等手段揭示碾轧对马铃薯淀粉的机械力化学效应。结果表明,碾轧处理对淀粉颗粒的无定形区、结晶区产生不同程度的机械力化学作用,导致马铃薯淀粉性质发生显著变化。由此推断淀粉颗粒内部依次发生了受力、聚集和团聚效应。

关键词：碾轧马铃薯淀粉机械力化学效应理化性质结构

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甜瓜镰孢根腐病菌生物学特性研究

中国农学通报 2010年第7期26卷 229-232页

作者：耿丽华白庆荣王建设魏秋颖张洪安张万清国家蔬菜工程技术研究中心北京100097 吉林农业大学农学院长春130118

近年来甜瓜镰孢根腐病在甜瓜设施栽培和露地栽培中都普遍发生,严重影响了甜瓜的产量和品质。对该病病原菌腐皮镰孢菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.]的生物学特性进行了研究,旨在为筛选甜瓜镰孢根腐病抗性种质资源和选育抗病品种奠定基... 详细信息

近年来甜瓜镰孢根腐病在甜瓜设施栽培和露地栽培中都普遍发生,严重影响了甜瓜的产量和品质。对该病病原菌腐皮镰孢菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.]的生物学特性进行了研究,旨在为筛选甜瓜镰孢根腐病抗性种质资源和选育抗病品种奠定基础。研究结果是:该病原菌生长温度范围是10～4为0℃硝,态最氮适,铵生态长氮温不度适为于30该℃病;在原p菌H5的～1生0长范。围该内病都原能菌良分好生生长孢;子能萌够发很的好最地适利相用对多湿种度碳是源1;0较0%适,在宜相的对氮源湿度关键小词于:9甜0%瓜的;条根件腐下病不;腐能皮萌镰发孢;分菌生;生孢物子学适特宜性萌发温度为30℃;分生孢子的致死温度为57℃,10min。

关键词：甜瓜根腐病腐皮镰孢菌生物学特性

切割小鼠X染色体的CRISPR/Cas9系统表达载体的构建及验证

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生物技术通报 2021年第5期37卷 67-75页

作者：谢绍怡蒋璐蔓杨晓峰张仙玉吴珍芳李紫聪华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广州510642

性别控制技术在畜牧业生产、濒危动物保护、伴性疾病预防等方面都有着重要的意义,但是目前较为有效的精子分离技术却因成本高昂、技术难度大的问题无法广泛应用于畜禽生产上。受在蚊子上成功实现性别控制的研究启发,本实验设计了两个靶... 详细信息

性别控制技术在畜牧业生产、濒危动物保护、伴性疾病预防等方面都有着重要的意义,但是目前较为有效的精子分离技术却因成本高昂、技术难度大的问题无法广泛应用于畜禽生产上。受在蚊子上成功实现性别控制的研究启发,本实验设计了两个靶向小鼠X染色体重复序列的sgRNA,构建了含有靶向切割小鼠X染色体的CRISPR/Cas9系统的CMV载体,并对其进行体外、细胞及胚胎水平上的切割效率验证。结果显示:sgRNA X1和sgRNA X3体外介导的Cas9蛋白切割靶序列的效率分别为60.0%和75.0%;CMV载体成功转染MLTC-1细胞后,死亡率与对照组(转染空载体)相比显著提高;CMV载体对X1靶位点的突变效率为11.1%;与对照组相比,小鼠孤雌胚胎注射CMV载体后囊胚率有一定的下降,但未达到显著水平,而囊胚细胞数则显著下降(P<0.01)。实验证明了CMV载体在体外、细胞及胚胎水平上均具有较高的切割效率,能够成功删除X染色体,可用于减少某一性别的精子或胚胎,从而实现哺乳动物的性别控制。

关键词：性别控制 CRISPR/Cas9 X染色体小鼠

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不同结构对囊素样肽的免疫活性影响

中国兽医学报 2012年第11期32卷 1689-1693页

作者：宗玉霞卢宇郑其升侯继波陈溥言江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210014

化学合成单拷贝(BS)、30拷贝串联(KG30)和30拷贝分支结构(MAP)3种不同结构的囊素样肽,通过体外外周血淋巴细胞刺激增殖试验、杂交瘤细胞抗体分泌刺激试验、E-玫瑰花环试验和体内小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、新城疫疫苗免疫应答的测定,比... 详细信息

化学合成单拷贝(BS)、30拷贝串联(KG30)和30拷贝分支结构(MAP)3种不同结构的囊素样肽,通过体外外周血淋巴细胞刺激增殖试验、杂交瘤细胞抗体分泌刺激试验、E-玫瑰花环试验和体内小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、新城疫疫苗免疫应答的测定,比较了其免疫增强活性。结果表明,BS和MAP的活性显著高于KG30,BS体外试验活性优于MAP,而MAP体内试验活性优于BS。结构对囊素的活性有显著影响,以分支结构的囊素增强免疫效果最好。

关键词：囊素样肽结构免疫活性

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低温诱导下苹果花药差异表达基因分析

植物生理学报 2016年第3期52卷 259-268页

作者：罗慧珍邓舒张春芬肖蓉王卉孟玉平曹秋芬山西大学生物工程学院太原030006 山西省农业科学院生物技术研究中心太原030031 山西省农业科学院果树研究所山西太谷030815 山西省农业科学院科研处太原030031

低温处理是苹果花药培养诱导胚状体形成的关键步骤,花药中的小孢子在经过一定时间的低温诱导后才能获得胚性潜能。本文通过转录组测序的方法对低温处理前和低温处理30 d的苹果花药进行研究,分析低温诱导条件下花药中的差异表达基因。结... 详细信息

低温处理是苹果花药培养诱导胚状体形成的关键步骤,花药中的小孢子在经过一定时间的低温诱导后才能获得胚性潜能。本文通过转录组测序的方法对低温处理前和低温处理30 d的苹果花药进行研究,分析低温诱导条件下花药中的差异表达基因。结果表明:转录组测序共得到10.90 Gb的Clean Data。基因表达分析结果显示,共有4 105个基因发生差异表达,包括表达上调基因1 849个,表达下调基因2 256个。注释到GO、COG、KEGG、Swiss-Prot和nr数据库的差异表达基因分别有3 325个、1 504个、733个、2 993个和3 758个。差异表达基因主要富集在与糖类代谢和激素信号转导有关的过程中,其中在淀粉和蔗糖代谢、植物激素信号转导这两个代谢通路中富集的差异表达基因最多。筛选出的差异表达基因中控制蔗糖合成、细胞分裂素、脱落酸和油菜素内酯信号转导的相关基因表达量上调,控制淀粉合成、生长素信号转导的相关基因表达量下调。差异表达基因的荧光定量PCR结果显示测序结果和实际结果变化趋势完全一致。由此可见,苹果花药经低温诱导后,影响蔗糖、淀粉生物合成和生长素、细胞分裂素、脱落酸、赤霉素和油菜素内酯信号转导相关基因的表达变化是影响小孢子获得胚性潜能的关键。

关键词：苹果花药胚状体转录组测序差异表达基因荧光定量PCR