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基于就业导向的兽医硕士研究生模块化教学策略探讨——以湖南农业大学动物医学院为例

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中国兽医杂志 2021年第3期57卷 112-114页

作者：邬静王乃东袁志航杨成林易金娥陈宇科湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

随着社会经济和科技的迅速发展,在非洲猪瘟疫情的持续影响下,生猪产能恢复正值关键时期,同时由于执业兽医师资格证的推行,以及小动物诊疗行业的发展,对准入门槛和从业规范有了更高的要求,对兽医专业人才的需求持续升温。但即便有如此可... 详细信息

随着社会经济和科技的迅速发展,在非洲猪瘟疫情的持续影响下,生猪产能恢复正值关键时期,同时由于执业兽医师资格证的推行,以及小动物诊疗行业的发展,对准入门槛和从业规范有了更高的要求,对兽医专业人才的需求持续升温。但即便有如此可观的需求,兽医硕士的就业压力依然是高位不下,这不仅与学生自身学习成效有关,也和目前专业型兽医硕士所受的专业教育及培养方案的制订具有密切关系。在全国农林院校中,湖南农业大学动物医学院作为兽医硕士培养和输出的重要阵地之一,更应当紧跟行业发展和需求变化,不断地在人才培养上做出更多的尝试和突破。模块化教学模式具有灵活配置、针对性强的优势,有效的配合就业导向,在课程设置上进行由本位课程为主向本位课程与实践能力协同推进所转变,从而实现学生满意、学校放心、社会认可的共赢效果。

关键词：湖南农业大学动物医学院非洲猪瘟动物诊疗农林院校就业导向社会认可从业规范

湖南农业大学动物医学院“卓越农林人才”教育模式的调查分析

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教育教学论坛 2017年第46期 92-94页

作者：刘兆颖陈敏湖南农业大学动物医学院长沙410128

农林改革的教育模式"卓越农林人才"是充分地将理论和实践相结合,是一种更能适应新时期社会发展的教育模式。本文以湖南农业大学动物医学院15级学生作为调研对象,对设置卓越班进行问卷调查。利用调查结果比较分析卓越班和普通班学生对教... 详细信息

农林改革的教育模式"卓越农林人才"是充分地将理论和实践相结合,是一种更能适应新时期社会发展的教育模式。本文以湖南农业大学动物医学院15级学生作为调研对象,对设置卓越班进行问卷调查。利用调查结果比较分析卓越班和普通班学生对教育改革模式的看法,同时介绍学院为提高人才培养质量做的各种改革。望通过"卓越农林人才"教育模式来提升我校大学生的创新水平,为改革人才培养质量方式提高途径。

关键词：湖南农业大学卓越农林人才人才培养

RUNX1对奶牛乳腺上皮细胞间质转化的调节作用

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 500-512页

作者：王宽杨博文王菊玉邓健明许慧杨阳陈洪剑代飞燕顾小龙曲伟杰张立梅云南农业大学动物医学院昆明650201

[目的]探究Runt相关转录因子1(RUNX1)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)发生上皮细胞间质转化(EMT)的作用及机制。[方法]通过CCK-8法检测不同感染复数的热灭活金黄色葡萄球菌处理后对MAC-... 详细信息

[目的]探究Runt相关转录因子1(RUNX1)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)发生上皮细胞间质转化(EMT)的作用及机制。[方法]通过CCK-8法检测不同感染复数的热灭活金黄色葡萄球菌处理后对MAC-T细胞活力的影响;通过倒置显微镜观察经金黄色葡萄球菌处理后MAC-T细胞的形态变化。通过实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测金黄色葡萄球菌处理MAC-T细胞后,细胞中EMT标志分子(E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin))、TGF/Smad通路信号分子(TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4)和RUNX1的表达量变化情况;并比较了分别使用RUNX1和TGF-β特异性抑制剂前后细胞EMT标志分子、TGF/Smad通路信号分子和RUNX1的表达水平变化。[结果]不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理72 h后,MAC-T细胞活力较24和48 h组均极显著下降(P<0.01),通过显微镜观察发现此时细胞出现漂浮死亡现象。因此后续观察细胞形态变化时设置时间为12、24、36和48 h。当用感染复数(MOI)为100热灭活金黄色葡萄球菌处理MAC-T细胞48 h后,细胞形态由上皮细胞典型的“鹅卵石”样转变为间质细胞的“长梭状”;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果发现,与正常细胞相比,EMT标志分子E-cadherin mRNA表达量极显著下调(P<0.01),Vimentin、α-SMA、N-cadherin、TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4和RUNX1 mRNA表达量显著或极显著上调(P<0.01);且Vimentin、α-SMA、P-Smad2和RUNX1蛋白表达量明显上调。经LY2109761抑制剂处理后,与感染组相比,2个抑制剂组MAC-T细胞中Smad2、Smad3、Smad4、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和RUNX1的mRNA表达量均极显著下调(P<0.01),E-cadherin mRNA表达量极显著上调(P<0.01);经抑制剂Ro5-3335处理后,MAC-T细胞形态未出现显著的间质细胞样变化;与感染组相比,2个抑制剂Ro5-3335组细胞中E-cadherin的mRNA表达量极显著上调(P<0.01),N-cadherin、Vimentin、α-SMA(除10μmol/L Ro5-3335抑制剂组α-SMA外)、TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad4的mRNA表达水平均极显著降低(P<0.01)。[结论]热灭活金黄色葡萄球菌处理MAC-T细胞48 h可激活TGF/Smad通路诱导MAC-T细胞发生EMT变化;RUNX1可通过介导TGF/Smad通路调节金黄色葡萄球菌诱导的MAC-T细胞EMT过程。

关键词：金黄色葡萄球菌上皮细胞间质转化(EMT) Runt相关转录因子1(RUNX1)

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犬造血干细胞分离、鉴定和培养特性研究

中国畜牧兽医 2023年第7期50卷 2678-2687页

作者：严涵田仰清昂艳芬汪娅媛张学峰严玉霖云南农业大学动物医学院昆明650201

【目的】研究骨髓来源的犬造血干细胞(cannie hematopoietic stem cells,cHSCs)的分离、鉴定和培养特性,建立体外培养最优条件,为临床应用奠定理论基础。【方法】取3月龄犬骨髓,采用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞(mononuclear c... 详细信息

【目的】研究骨髓来源的犬造血干细胞(cannie hematopoietic stem cells,cHSCs)的分离、鉴定和培养特性,建立体外培养最优条件,为临床应用奠定理论基础。【方法】取3月龄犬骨髓,采用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞(mononuclear cells,MNCs),通过流式细胞仪分选cHSCs并进行体外悬浮培养。用CCK-8法检测cHSCs在不同培养基、不同浓度胎牛血清(FBS)、不同细胞因子、不同cHSCs与cBMSCs接种比例条件下的细胞活性,筛选最优体外培养方案。使用台盼蓝染色计数法统计体外共培养1、7、14、21 d后cHSCs增殖情况。利用流式细胞术和实时荧光定量PCR分别检测P0、P1、P2和P3代cHSCs表面标志物CD34分子阳性百分比以及干性基因性别决定相关基因簇2(SOX2)和八聚体结合蛋白-4(OCT-4)的mRNA表达水平。【结果】成功分离获得cHSCs,不同培养基中细胞活性无显著差异(P>0.05);不同浓度FBS中,5%FBS组cHSCs活性显著低于10%、15%、20%FBS组(P<0.05),10%FBS组cHSCs活性显著低于20%FBS组(P<0.05);不同细胞因子条件下,TPO+FLT-3+SCF+IL-6组cHSCs活性显著高于TPO组和TPO+FLT-3组(P<0.05);不同cHSCs与cBMSCs接种比例条件下,1∶10组cHSCs活性极显著高于1∶5、5∶1和10∶1组(P<0.01),5∶1接种组cHSCs活性极显著高于1∶5和10∶1组(P<0.01)。通过筛选的最优培养方案进行体外共培养,第7天时cHSCs进入对数生长期且达到高峰,其中cHSCs+cBMSCs+细胞因子组细胞数量显著高于cHSCs+细胞因子组(P<0.05)。随着cHSCs传代培养,细胞分化潜能发生了变化,P1、P2、P3代细胞CD34分子阳性百分比、SOX 2基因mRNA表达水平均极显著低于P0代(P<0.01),P1、P2代OCT-4基因mRNA表达水平极显著高于P0代(P<0.01),P1代OCT-4基因mRNA表达水平极显著高于P2代(P<0.01)。【结论】本研究成功从犬骨髓中分离出cHSCs,筛选的cHSCs体外增殖最优培养条件为含10%FBS的IMDM培养基、cHSCs与cBMSCs接种比例为1∶10,同时联合添加TPO+FLT-3+SCF+IL-6细胞因子,P1代cHSCs处于对数生长期且CD34阳性百分比较高,可为今后临床应用提供参考。

关键词：犬造血干细胞(cHSCs) 分离纯化体外培养

核蛋白H-NS调控多重耐药鸡大肠埃希菌IncFⅡ质粒接合转移的分子机制

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中国农业科学 2022年第18期55卷 3675-3684页

作者：贾雅婷胡慧慧翟亚军赵冰何坤潘玉善胡功政苑丽河南农业大学动物医学院

【目的】以临床分离的多重耐药鸡大肠埃希菌Inc FⅡ质粒为研究对象，探究核蛋白H-NS调控其接合转移的分子机制，为控制Inc FⅡ质粒介导的多重耐药基因水平散播提供理论依据。【方法】测定大肠埃希菌ATCC25922及4株重组菌(p BAD25922、F2... 详细信息

【目的】以临床分离的多重耐药鸡大肠埃希菌Inc FⅡ质粒为研究对象，探究核蛋白H-NS调控其接合转移的分子机制，为控制Inc FⅡ质粒介导的多重耐药基因水平散播提供理论依据。【方法】测定大肠埃希菌ATCC25922及4株重组菌(p BAD25922、F25922、FΔhns和FΔhns/phns)的生长曲线，比较hns对菌株的影响情况；分别以F25922、FΔhns和FΔhns/phns为供体菌，大肠埃希菌J53(耐叠氮钠)为受体菌，进行接合试验，并计算接合频率；采用实时荧光定量PCR检测各重组菌(F25922、FΔhns和FΔhns/phns)中Inc FⅡ质粒接合转移相关基因(tra M、tra J和tra Y)的m RNA表达量；构建Lac Z融合报告菌株F25922/P(P/P)、FΔhns/P(P/P)和FΔhns/phns/P(P/P)，分别测定不同菌株中3种基因(tra M、tra J和tra Y)启动子P、P和P的β-半乳糖苷酶活性；构建H-NS蛋白原核表达载体，采用镍离子亲和层析法分离纯化H-NS核蛋白，PCR扩增并纯化3种基因启动子区的DNA序列，利用电泳迁移率变动分析试验(EMSA)探明核蛋白H-NS调控Inc FⅡ质粒接合作用的调控方式，预测H-NS与不同启动子的结合位点并用EMSA进行进一步验证。【结果】重组菌F25922和p BAD25922与大肠埃希菌ATCC25922的生长状况无明显差异，说明质粒p BAD和Inc FⅡ均不影响宿主菌大肠埃希菌ATCC25922的生长；但是，缺失重组菌FΔhns和缺失回补重组菌FΔhns/phns的生长速度明显低于大肠埃希菌ATCC25922，表明hns的缺失导致菌株的生长适应性变差，但不影响菌株的存活。接合试验结果显示，FΔhns中Inc FⅡ质粒的接合频率较对照菌F25922升高了1 279.33倍(P<0.001)，而FΔhns/phns中Inc FⅡ质粒的接合频率虽未完全恢复到对照菌株的水平，但也明显低于FΔhns。实时荧光定量PCR结果显示，FΔhns中tra基因(tra M、tra J和tra Y)的m RNA表达量均极显著高于对照菌株(P<0.001)，其中tra J的m RNA表达量最高，为F25922的1 510.14倍，其次为tra Y和tra M，表达量分别为F25922的448.14倍和81.54倍，而回补株FΔhns/phns中不同基因的m RNA表达量均极显著低于FΔhns，与对照菌相类似。β-半乳糖苷酶活性测定结果显示，缺失报告菌株FΔhns/P(P/P)中P、P和P的β-半乳糖苷酶活性分别为5.66,10.45和21.91，均极显著高于对照菌F25922/P(P/P)的相应启动子(P<0.001)，而回补报告菌株FΔhns/phns/P(P/P)中P、P和P的β-半乳糖苷酶活性极显著低于FΔhns/P(P/P)，且均与对照菌株无明显差异。这些结果均表明hns对Inc FⅡ质粒接合转移呈明显的负调控作用。EMSA结果显示，H-NS核蛋白均能明显阻滞3个tra基因启动子DNA的迁移，说明H-NS可直接与tra基因的3个启动子区结合；通过对结合位点的预测和EMSA进一步验证，证实H-NS核蛋白可与3个启动子区的AT富集区结合。【结论】H-NS核蛋白通过直接与Inc FⅡ质粒的tra M、tra J和tra Y的启动子区的AT富集区结合，抑制启动子活性，从而导致启动子下游相关转移基因tra M、tra J和tra Y的表达量下降，结果明显抑制Inc FⅡ质粒的接合转移。

关键词： H-NS tra基因 IncFⅡ质粒质粒接合作用负调控鸡大肠埃希菌

茶褐素对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织代谢组学的影响

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食品工业科技 2023年第5期44卷 43-52页

作者：雷舒雯谢桂华张智芳苗玥赵春燕陈德洪侯艳龚加顺云南农业大学食品科学技术学院云南昆明650201 云南农业大学茶学院云南昆明650201 云南农业大学动物医学院云南昆明650201

本研究通过D-半乳糖皮下注射建立小鼠衰老模型,利用免疫组化和UHPLC-QE-MS代谢组学技术检测正常对照小鼠、D-半乳糖模型小鼠、茶褐素(预防和治疗)干预小鼠的脑组织,探究茶褐素对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织免疫组化的影响,筛选茶褐素对衰... 详细信息

本研究通过D-半乳糖皮下注射建立小鼠衰老模型,利用免疫组化和UHPLC-QE-MS代谢组学技术检测正常对照小鼠、D-半乳糖模型小鼠、茶褐素(预防和治疗)干预小鼠的脑组织,探究茶褐素对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织免疫组化的影响,筛选茶褐素对衰老小鼠作用的差异代谢物并分析其涉及的代谢通路。结果表明:茶褐素干预后,衰老小鼠脑组织中的乙酰胆碱转移酶阳性表达面密度显著升高(P<0.05);预防性给予茶褐素可以显著调节衰老小鼠脑组织中的17种代谢物,主要涉及甘油磷脂代谢、组氨酸代谢、TCA循环、乙醛酸和二羧酸代谢、β-丙氨酸代谢5条代谢通路;茶褐素治疗可以显著调节衰老小鼠脑组织中的32种代谢物,主要涉及甘油磷脂代谢,组氨酸代谢,牛磺酸和亚牛磺酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的降解,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成5条通路。其中,肌肽、LysoPC(P-18:1(9Z))、PS(20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)/18:1(9Z))、PC(15:0/15:0)、D-阿拉伯糖-5-磷酸盐、硫酸胆固醇和二磷酸腺苷核糖7个代谢物以及甘油磷脂代谢和组氨酸代谢2条代谢通路为茶褐素预防组和治疗组共有。茶褐素可以通过调节小鼠体内脂类代谢,能量代谢,氨基酸代谢等过程,从而起到抗衰老作用。

关键词：茶褐素免疫组化脑代谢组学抗衰老

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质粒介导重排子的发现、结构和功能

生物工程学报 2023年第1期39卷 34-44页

作者：易甜汪洋沈建忠吴聪明沈应博中国农业大学动物医学院北京100193

细菌耐药性已成为全球关注的重大公共卫生问题。接合转移是耐药质粒快速传播的重要方式,其中Ⅳ型菌毛在此过程中发挥着重要的作用。Ⅳ型菌毛具有黏附作用,能够使细菌黏附在宿主细胞和其他介质表面,帮助细菌形成生物被膜、细菌聚集体和... 详细信息

细菌耐药性已成为全球关注的重大公共卫生问题。接合转移是耐药质粒快速传播的重要方式,其中Ⅳ型菌毛在此过程中发挥着重要的作用。Ⅳ型菌毛具有黏附作用,能够使细菌黏附在宿主细胞和其他介质表面,帮助细菌形成生物被膜、细菌聚集体和微菌落,是细菌在液体中接合转移的重要因素。PilV蛋白是R64质粒Ⅳ型菌毛尖端黏附素,可以识别细菌细胞膜上的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)。重排子(shufflon)结构是多重DNA倒位系统,可使PilV蛋白多样化,进而影响细菌液体接合转移过程中的受体菌识别和接合转移频率。重排子结构最先发现存在于IncI1质粒R64,后陆续在IncI2、IncK、IncZ质粒以及伤寒沙门氏菌致病岛中被发现,其主要由A、B、C、D这4个片段及特异性重组位点sfx组成,受其下游重组酶基因rci的调控,不同质粒的重排子结构存在一定的差异。近期备受关注的可转移多黏菌素耐药基因mcr-1主要位于IncI2型质粒上,重排子可能是其快速传播的原因之一。本文综述了质粒介导重排子的发现、结构、功能和流行,期望基于对重排子更全面深入地了解,能够为耐药质粒的传播机制和控制策略研究提供理论基础。

关键词：重排子 pilV 接合转移 Ⅳ型菌毛耐药质粒

猪静脉血管内皮细胞cDNA文库构建及与猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因互作蛋白的筛选

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动物医学进展 2023年第7期44卷 1-9页

作者：姜光飞何维琪余蕊梁龙舟孙永科杨玉艾云南农业大学动物医学院云南昆明650201

近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其... 详细信息

近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其非典型化机制,利用酵母双杂交技术,构建了猪静脉血管内皮细胞(SVEC)cDNA文库,并进一步采用建立的SVEC cDNA文库与诱饵质粒pGBKT7-Mut共转Y2H Gold酵母菌,筛选与Mut蛋白相互作用的蛋白,对筛选出的蛋白进行测序和生物信息学分析。结果表明,构建的诱饵载体在酵母细胞中成功表达,且无毒无自激活;构建的SVEC cDNA文库容量大于1×106 CFU/mL,文库滴度6.2×106 CFU/mL,PCR显示文库插入片段大小在250~3000 bp,条带大小不一,符合文库大小要求;与SVEC cDNA文库筛选发现14种与Mut蛋白存在潜在互作的宿主蛋白,通过蛋白功能分析发现这些蛋白主要与病毒复制、细胞凋亡、钙离子结合、蛋白代谢和降解有关。研究结果有助于进一步探索14种潜在互作蛋白中到底哪些与Mut发生密切互作,且与病毒感染宿主密切相关,为研究APPV-YN Mut基因功能及其致非典型化作用机制奠定了理论基础。

关键词：猪非典型瘟病毒关键变异基因Mut 酵母双杂交 cDNA文库蛋白互作

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槲皮素对小鼠肝肾慢性镉中毒的保护作用

中国兽医杂志 2023年第4期59卷 137-142页

作者：许慧王菊玉张立梅刘凯邓健明杨博文曲伟杰顾小龙王生奎云南农业大学动物医学院云南昆明650201

为了探究槲皮素对慢性镉中毒小鼠肝、肾是否具有保护作用,本试验选用40只2月龄的雄性健康昆明小鼠随机分为4个组,对照组隔天腹腔注射生理盐水,槲皮素组隔天灌胃槲皮素[50 mg/(kg·bw)],镉中毒组隔天腹腔注射氯化镉[1 mg/(kg·bw)],槲皮... 详细信息

为了探究槲皮素对慢性镉中毒小鼠肝、肾是否具有保护作用,本试验选用40只2月龄的雄性健康昆明小鼠随机分为4个组,对照组隔天腹腔注射生理盐水,槲皮素组隔天灌胃槲皮素[50 mg/(kg·bw)],镉中毒组隔天腹腔注射氯化镉[1 mg/(kg·bw)],槲皮素干预镉中毒组隔天灌胃槲皮素并腹腔注射氯化镉,持续1个月后,将小鼠处死,采集小鼠血液,生物化学法检测肝肾功能生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和尿素氮(BUN)水平,并采集肝、肾组织进行宏观和微观病理学观察。结果显示:与对照组相比,镉中毒组小鼠ALT、AST活力和BUN含量均升高,但差异均不显著(P>0.05);与镉中毒组相比,槲皮素组和槲皮素干预镉中毒组小鼠ALT、AST活力和BUN含量均降低,但差异均不显著(P>0.05)。与对照相比,槲皮素组肝、肾组织的颜色和形态结构无明显变化,镉中毒组肝、肾组织外观肿大,颜色暗红,质地易碎,病理切片可见细胞排列杂乱且不规则,部分细胞核溶解,细胞质空泡化;与镉中毒组相比,槲皮素干预镉中毒组肝、肾组织外观无明显异常变化,病理切片可见肝、肾细胞结构、边界和排列逐渐清晰规则,细胞核、细胞质的病变都明显改善。结果表明,槲皮素对慢性镉中毒小鼠导致的肝肾损伤具有一定的保护作用。

关键词：镉肝肾毒性槲皮素保护作用小鼠