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UPLC-MS/MS同时测定白芷中34种植物生长调节剂残留量

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中国现代应用药学 2023年

作者：褚悟男李翔韩玲玲蒲婧哲翟宏焱王浩张亚中国家药监局中药质量研究与评价重点实验室(合肥) 中药饮片制造新技术安徽省重点实验室安徽中医药大学药学院安徽省食品药品检验研究院

目的基于UPLC-MS/MS建立同时测定白芷中34种植物生长调节剂的残留量的分析方法。方法样品通过乙腈高速匀浆提取,不使用净化方法直接进样,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(2.1 mm×150 mm,1.8μm)色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液含10 mmol... 详细信息

目的基于UPLC-MS/MS建立同时测定白芷中34种植物生长调节剂的残留量的分析方法。方法样品通过乙腈高速匀浆提取,不使用净化方法直接进样,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(2.1 mm×150 mm,1.8μm)色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液含10 mmol·L-1甲酸铵(A)-乙腈(B),用基质匹配标液外标法进行定量。结果 34种植物生长调节剂在基质中的线性关系良好,相关系数均>0.995,检出限为0.01～9.26μg·kg-1,平均回收率为72.4%～100.6%,RSD均<15%。采用该法对35批白芷样品中的植物生长调节剂残留情况进行筛查。结论建立的植物生长调节剂多残留检测方法灵敏度高,准确性好,有针对性,且前处理简单快速,可用于筛查和检测白芷中植物生长调节剂多残留量。

关键词：植物生长调节剂白芷残留量超高效液相色谱-串联质谱法

桃红四物汤对大脑中动脉闭塞大鼠环状RNA表达谱的影响

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 954-963页

作者：费长义张丽娟王倪褚福瑞余超薛苏君潘凌宇彭代银段贤春安徽中医药大学第一附属医院药学部安徽合肥230031 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

目的筛选和研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠环状RNA(circular RNA,circRNA)表达的影响,探讨THSWD的可能作用及分子机制。方法采用下一代RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠circRNA表达谱,并与MCAO模型组和对照组进行比较。生物信息学分析预测潜在的靶向微小RNA(micro RNA,miRNA)和mRNAs。应用GO富集分析和KEGG通路富集分析方法分析差异表达的circRNAs的潜在作用。对表达差异显著的circRNA进行RT-qPCR验证。结果MCAO组与对照组之间存在87个差异表达的circRNA,MCAO组与THSWD组之间存在86个差异表达的circRNA。其中,THSWD可逆转MCAO模型诱导的17个circRNAs。为了证明DECs靶向的mRNAs的作用,使用了GO和KEGG数据库。进一步分析表明,5个表达差异显著circRNAs表达量与测序结果相似。结论首次确定了THSWD治疗后MCAO大鼠circRNAs的全面表达谱,提示THSWD对MCAO的治疗作用可能是通过调节circRNAs的表达实现的。

关键词：桃红四物汤大脑中动脉闭塞环状RNA 生物信息学下一代RNA测序缺血性卒中

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丹皮酚减轻SIRT6/PARP1介导的DNA损伤抑制血管平滑肌细胞衰老的作用

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中国实验方剂学杂志 2023年第10期29卷 83-92页

作者：蒋婷婷刘雅蓉施晓艳杨宇龙戴敏安徽中医药大学药学院安徽省中药研究与开发重点实验室合肥230012

目的:探讨丹皮酚(Pae)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)衰老的作用及对沉默调节信息因子6(SIRT6)/腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)信号通路的影响。方法:建立AngⅡ(100 nmol·L^(-1))诱导的VSMCs应激性衰老模型,实验分... 详细信息

目的:探讨丹皮酚(Pae)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)衰老的作用及对沉默调节信息因子6(SIRT6)/腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)信号通路的影响。方法:建立AngⅡ(100 nmol·L^(-1))诱导的VSMCs应激性衰老模型,实验分为正常组、模型组、Pae低、中、高(30、60、120μmol·L^(-1))浓度组。采用β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法检测细胞衰老阳性率;细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT6、PARP1、衰老相关基因p16、p21、p53、增殖细胞核抗原(PCNA)、脱氧核糖核酸(DNA)损伤蛋白磷酸化的组蛋白H2AX(即p-H2AX或γ-H2AX)的表达并采用Ed U染色法检测VSMCs增殖变化;si RNA-SIRT6转染制备沉默的VSMCs,观察SIRT6沉默的VSMCs中Pae对SIRT6、PARP1及p16、γ-H2AX蛋白的表达。结果:SA-β-Gal染色结果显示,与正常组比较,模型组SA-β-Gal染色衰老阳性率增加(P<0.01);与模型组比较,Pae给药组均有效降低SA-β-Gal染色阳性率(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组PCNA、SIRT6、PARP1表达下调、衰老相关蛋白p16、p21、p53、γ-H2AX的表达上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,Pae给药干预后,各浓度组促进了PCNA、SIRT6、PARP1的蛋白表达,抑制了p16、p21、p53、γ-H2AX的蛋白表达,且呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。Ed U染色结果显示,与正常组比较,模型组Ed U阳性细胞数减少(P<0.01);与模型组比较,Pae给药组Ed U阳性细胞数明显增加(P<0.05,P<0.01)。SIRT6沉默后,Pae促进SIRT6、PARP1及抑制p16的作用被逆转(P<0.05,P<0.01)。此外加入SIRT6抑制剂IN-1可促进AngⅡ诱导细胞衰老的发生(P<0.05,P<0.01)。结论:Pae能够有效抑制VSMCs的衰老,其机制作用可能与调控SIRT6/PARP1信号通路相关。

关键词：丹皮酚沉默调节信息因子6(SIRT6) 腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1) 血管平滑肌细胞(VSMCs) 衰老

基于肝脏代谢组学研究“瓜蒌-薤白”对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响

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中国中药杂志 2021年第20期46卷 5320-5329页

作者：徐鹏博丁立丹仇静文钟华吴欢周安吴鸿飞戴敏安徽中医药大学药学院中药研究与开发安徽省重点实验室安徽合肥230012

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术,研究“瓜蒌-薤白”药对对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)肝脏内源性代谢物代谢紊乱的调控机制。利用高脂饮食建立小鼠AS模型,观察小鼠组织病理学变化,检测... 详细信息

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术,研究“瓜蒌-薤白”药对对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)肝脏内源性代谢物代谢紊乱的调控机制。利用高脂饮食建立小鼠AS模型,观察小鼠组织病理学变化,检测小鼠体质量、肝重以及肝脏中血脂水平和炎性因子等病理生化指标的含量,采用UPLC-Q-TOF-MS技术对小鼠肝脏样品进行代谢轮廓分析,结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)与正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法,筛选差异代谢物并进行鉴别,检测代谢通路上相关代谢酶LCAT、sPLA2、EPT1、ACER1的水平进行验证。结果显示,“瓜蒌-薤白”药对显著减少AS小鼠主动脉斑块及肝脏脂肪空泡面积,减轻肝脏脂滴积累;可降低AS小鼠肝脏系数,调控肝脏血脂水平并改善肝脏的炎性损伤;空白组、模型组以及给药组的代谢物能够显著区分,发现并初步鉴定了15种与AS相关的潜在生物标志物,“瓜蒌-薤白”药对能显著回调其中的7种,代谢通路分析筛选出2条与“瓜蒌-薤白”药对调节AS小鼠肝脏代谢紊乱相关的代谢途径,“瓜蒌-薤白”药对调控代谢途径中关键酶LCAT、sPLA2、EPT1、ACER1水平,推测“瓜蒌-薤白”药对可干预AS小鼠肝脏甘油磷脂及鞘脂代谢紊乱从而抑制AS疾病,其调控机制可能与其干预肝脏代谢途径关键酶LCAT、sPLA2、EPT1、ACER1的表达有关。

关键词： “瓜蒌-薤白”药对 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化肝脏代谢组学

中药引药上行的作用机制及其脑靶向制剂研究进展

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中草药 2023年第10期54卷 3312-3321页

作者：方亮陶文康程红艳李大伟王一帆徐安琪张彩云安徽中医药大学药学院药物制剂技术与应用安徽省重点实验室安徽合肥230012 安徽省教育厅现代药物制剂工程技术研究中心安徽合肥230012 安徽省道地中药材品质提升创新协同中心安徽合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所安徽合肥230012 中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

引经药是在中药归经理论指导下,引导诸药直达病所,起“向导”作用的药物。冰片、石菖蒲、麝香、苏合香和安息香等芳香开窍类中药具有引药上行之功,可以改善血脑屏障的通透性,并通过引药上行作用促进其他药物透过血脑屏障,提高其他药物... 详细信息

引经药是在中药归经理论指导下,引导诸药直达病所,起“向导”作用的药物。冰片、石菖蒲、麝香、苏合香和安息香等芳香开窍类中药具有引药上行之功,可以改善血脑屏障的通透性,并通过引药上行作用促进其他药物透过血脑屏障,提高其他药物的生物利用度和脑组织分布。通过对近年来冰片、石菖蒲等引经药调节血脑屏障通透性及作用机制,芳香开窍类引经药与现代制剂结合构建新型脑靶向递药系统的研究进行综述,以期丰富引经药的科学内涵并为新型脑靶向药物递送系统的设计提供新策略。

关键词：引经药引药上行血脑屏障脑靶向给药系统冰片石菖蒲麝香

基于PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴对NLRP3炎症小体的负调控研究白头翁汤正丁醇提取物治疗外阴阴道念珠菌病的作用机制

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中国中药杂志 2023年第6期48卷 1578-1588页

作者：胡凯帆莫玲张浩夏丹施高翔吴大强汪天明邵菁汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省科技评估与监管中心安徽合肥230088 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

该研究旨在从PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控NLRP3炎症小体的角度探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)治疗外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠的作用机制。实验中,将雌性C57BL/6小鼠分为6组,分别为空白对照组,VVC模型组,BAEB高、中、低剂量组(80、40、20 mg·kg^(-1))和氟康唑组(20 mg·kg^(-1)),除空白对照外,其余各组利用雌激素依赖性的方法构建VVC小鼠模型,模型构建成功后,空白对照组不作处理,BAEB高、中、低剂量组分别给予80、40、20 mg·kg^(-1)BAEB治疗,氟康唑组给予20 mg·kg^(-1)氟康唑治疗,VVC模型组则灌胃等量的生理盐水。每日观察各组小鼠的一般状态和体质量;革兰染色观察小鼠阴道灌洗液中白念珠菌形态的变化;微量稀释法检测小鼠阴道分泌物的真菌载量,处死小鼠后,巴氏染色法检测阴道灌洗液中中性粒细胞的浸润程度,enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)法检测阴道灌洗液中炎症因子interleukin(IL)-1β、IL-18以及lactate dehydrogenase(LDH)的含量;hematoxylin-eosin(HE)染色进行阴道组织病理学分析;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测阴道组织中NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra的表达和分布;免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测阴道组织中pNLRC4、IL-1Ra的表达与分布,免疫印迹(Western blot,WB)检测阴道组织中NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra的蛋白表达;qRT-PCR检测NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra mRNA的表达。结果显示,与空白对照组比较,VVC模型组小鼠阴道出现红肿以及白色分泌物,与VVC模型组比较,BAEB能改善VVC小鼠的一般状态。革兰染色、巴氏染色、微量稀释法以及HE染色结果显示,与空白对照组比较,阴道灌洗液中分布有大量菌丝且有大量中性粒细胞浸润,阴道灌洗液中真菌载荷显著增加,阴道组织黏膜被破坏且有大量炎性细胞浸润,BAEB可减少白念珠菌菌丝形成,BAEB中、高剂量组可显著减少中性粒细胞的浸润以及真菌载荷,BAEB低、中剂量组可减轻阴道组织的损伤,而BAEB高剂量组可将损伤的阴道组织恢复至正常水平。ELISA结果显示,与空白对照组比较,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH的含量显著增加,与VVC模型组比较,BAEB中、高剂量组可显著减少IL-1β、IL-18以及LDH的含量。WB和PCR结果显示,与空白对照组比较,VVC模型组小鼠阴道组织中PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra蛋白和mRNA表达显著降低,而NLRP3的蛋白和mRNA表达显著上升;与VVC模型组比较,BAEB中、高剂量组可上调阴道组织中PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra蛋白和mRNA表达,抑制阴道组织中NLRP3蛋白和mRNA表达。该研究表明,BAEB对于VVC小鼠的治疗作用可能与促进PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控NLRP3炎症小体有关。

关键词：外阴阴道念珠菌病白头翁汤正丁醇提取物 PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控 NLRP3炎症小体

UHPLC-MS/MS同时测定白芷中34种植物生长调节剂残留量

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中国现代应用药学 2023年第6期40卷 783-791页

作者：褚悟男李翔韩玲玲蒲婧哲翟宏焱王浩张亚中安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽省食品药品检验研究院合肥230051 国家药监局中药质量研究与评价重点实验室合肥230051 中药饮片制造新技术安徽省重点实验室合肥230051

目的基于UHPLC-MS/MS建立同时测定白芷中34种植物生长调节剂残留量的分析方法。方法样品通过乙腈高速匀浆提取,浓缩后直接进样,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(2.1 mm×150 mm,1.8μm)色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液含10 mmol·L^(–1)... 详细信息

目的基于UHPLC-MS/MS建立同时测定白芷中34种植物生长调节剂残留量的分析方法。方法样品通过乙腈高速匀浆提取,浓缩后直接进样,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(2.1 mm×150 mm,1.8μm)色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液含10 mmol·L^(–1)甲酸铵(A)-乙腈(B),用基质匹配标液外标法进行定量。结果34种植物生长调节剂在基质中的线性关系良好,相关系数均>0.995,检出限为0.01~9.26μg·kg^(-1),平均回收率为72.4%~100.6%,RSD均<15%。采用该法对35批白芷样品中的植物生长调节剂残留情况进行筛查,其中19批样品中检测出6种植物生长调节剂。结论建立的植物生长调节剂多残留检测方法灵敏度高,准确性好,有针对性,且前处理简单快速,可用于筛查和检测白芷中植物生长调节剂多残留量。

关键词：植物生长调节剂白芷残留量超高效液相色谱-串联质谱法

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第5期26卷 34-41页

作者：李国莺章维志姜璐陈光亮安徽中医药大学中西医结合学院合肥230012 安徽省中药复方研究重点实验室合肥230012

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP^-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP^-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高... 详细信息

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP^-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP^-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L^-1)和秋水仙碱组(0.2 mg·L^-1),除正常组外,其余各组均用400 mg·L^-1MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素^-1β(IL^-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL^-1β前体(Pro-IL^-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0~32 mg·L^-1TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL^-1β的分泌水平显著升高(P<0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL^-1β)的表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,1~30 mg·L^-1TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL^-1β的分泌(P<0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL^-1β)的表达明显降低(P<0.05,P<0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL^-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL^-1β分泌而发挥抗炎作用。

关键词：萆薢总皂苷尿酸钠 Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路炎性因子

桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的保护作用及机制

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安徽中医药大学学报 2023年第4期42卷 81-87页

作者：侯欣宇刘竹青张亚南戴文涛武瑞韩岚彭代银安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012 新安医学教育部重点实验室安徽合肥230012

目的观察桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用,以及其对血脑屏障的保护作用和机制。方法建立左侧大脑中动脉阻塞模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用Longa评分法观察大鼠神经功能损伤程度,行为学... 详细信息

目的观察桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用,以及其对血脑屏障的保护作用和机制。方法建立左侧大脑中动脉阻塞模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用Longa评分法观察大鼠神经功能损伤程度,行为学实验观察大鼠的运动神经功能,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法观察大鼠脑梗死面积,苏木精—伊红染色观察大鼠缺血侧脑部皮质组织病理变化,干湿法测定脑含水率,伊文思蓝(Evans blue,EB)灌注染色法检测血脑屏障通透性,透射电子显微镜观察血脑屏障紧密连接超微结构,免疫组织化学法检测脑组织紧密连接蛋白occludin、胞质附着蛋白-1(zona occludens-1,ZO-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)表达水平。结果大鼠神经功能损伤程度与运动神经功能经桃红四物汤给药后呈现改善的趋势。TTC结果显示,与模型组比较,桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑梗死面积明显减少(P<0.05)。苏木精—伊红染色显示,与模型组比较,桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑皮质组织神经元细胞质浓缩,核固缩、分裂或溶解,细胞排列紊乱,层次不清晰的情况得到改善。与模型组比较,桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑含水率、脑出血性转化程度以及EB渗出量显著降低(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,与模型组比较,桃红四物汤组大鼠脑梗死区occludin、ZO-1蛋白表达水平显著升高,MMP-9表达水平显著降低(P<0.05)。透射电子显微镜观察发现,模型组大鼠血脑屏障紧密连接明显受损,桃红四物汤组和尼莫地平组大鼠血脑屏障紧密连接损伤明显改善。结论桃红四物汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能,缩小梗死面积及减轻脑水肿。其作用机制可能与改善血脑屏障紧密连接超微结构,减少紧密连接相关蛋白表达,进而降低血脑屏障通透性有关。

关键词：桃红四物汤脑缺血再灌注血脑屏障通透性紧密连接蛋白神经功能