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RANKL介导的诱导破骨细胞分化的相关经典信号通路研究进展

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中国药理学通报 2020年第7期36卷 898-902页

作者：王梦蝶吴虹王荣慧王言邓然卜妍红孙明慧张衡安徽中医药大学药学院新安医学教育部重点实验室中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

破骨细胞(osteoclasts,OCs)源于髓系造血前体细胞,作为多核细胞参与骨吸收过程。OCs的过度分化影响骨组织吸收,常见于骨质疏松症、类风湿关节炎、强直性脊柱炎、骨硬化症等骨相关性疾病。调控破骨细胞分化是治疗此类疾病的主要手段。OC... 详细信息

破骨细胞(osteoclasts,OCs)源于髓系造血前体细胞,作为多核细胞参与骨吸收过程。OCs的过度分化影响骨组织吸收,常见于骨质疏松症、类风湿关节炎、强直性脊柱炎、骨硬化症等骨相关性疾病。调控破骨细胞分化是治疗此类疾病的主要手段。OCs分化的途径可以分为核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)介导的主要经典途径如:OPG/RANK/RANKL、TRAF6/RANKL/NF-κB、TRAF6/RANKL/MAPKs、JAK2/STAT3/RANKL、Wnt/RANKL和一些炎性细胞因子(如:IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α)参与的非经典途径。该文主要综述以上RANKL介导的相关经典途径对OCs分化的影响和机制。

关键词：破骨细胞分化骨吸收 RANKL RANK 信号通路

枳椇子多糖的酸提取工艺优化及其理化性质与抗氧化活性研究

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食品与发酵工业 2024年第9期50卷 148-156页

作者：刘春阳白金波杨尚青史进阳秦亚敏吴德玲解松子安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 中药研究与开发安徽省重点实验室安徽合肥230012 中药饮片制造新技术安徽重点实验室安徽合肥230012

为优化枳椇子多糖的提取工艺,并对其理化性质和抗氧化活性进行研究。该研究采用酸溶剂提取枳椇子粗多糖,经单因素考察和正交试验优化提取工艺参数,通过Sevag法除蛋白、DEAE-52阴离子交换柱对多糖进行分离纯化,得到枳椇子精制多糖。采用... 详细信息

为优化枳椇子多糖的提取工艺,并对其理化性质和抗氧化活性进行研究。该研究采用酸溶剂提取枳椇子粗多糖,经单因素考察和正交试验优化提取工艺参数,通过Sevag法除蛋白、DEAE-52阴离子交换柱对多糖进行分离纯化,得到枳椇子精制多糖。采用高效液相色谱、紫外光谱、傅里叶变换红外光谱、刚果红实验、碘-碘化钾和扫描电镜等方法对枳椇子多糖进行理化性质分析;对枳椇子多糖的体外抗氧化活性进行评价。结果表明,枳椇子多糖的最佳提取工艺为温度90℃,料液比为1∶100(g∶mL),时间2.5 h,盐酸浓度0.2 mol/L,在此条件下多糖得率为(4.07±0.07)%。经分离纯化后获得分子质量为3.03×10^(5)Da的均一性枳椇子精制多糖(Hovenia dulcis polysaccharide,HDP),HDP由甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖组成,摩尔百分比为10.46%、1.44%、8.19%、9.79%、4.54%、4.61%,、38.02%、9.95%、13.01%。结构鉴定HDP为吡喃环型酸性多糖,具有无规则螺旋的空间构象且含有较多分支,并表现出片层状的微观形态。HDP清除ABTS阳离子自由基、DPPH自由基和羟自由基的IC_(50)值分别是0.867、1.178、2.112 mg/mL。该研究通过优化酸提枳椇子多糖工艺,获得一种精制的酸性多糖HDP,并揭示HDP具有潜在的抗氧化活性,该研究结果将为枳椇子多糖的功能食品开发提供理论依据。

关键词：枳椇子多糖酸提取法理化性质抗氧化活性

联合机器学习和网络药理学探究小柴胡汤治疗类风湿关节炎的作用机制

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中医学报 2024年第2期39卷 383-392页

作者：陈丝梦孟祥文王金程芷洛宣自华贾晓益安徽中医药大学安徽合肥230012 安徽省中药复方重点实验室安徽合肥230012 安徽省中药研究与开发重点实验室安徽合肥230012

目的:本研究旨在利用机器学习和网络药理学探讨小柴胡汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的分子机制。方法:基于中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)获取小柴胡汤的化学成分,利用Swiss Target Prediction和HERB数据库预测活性成分靶点。利用R软件包GEOquery获取RA相关数据集GSE93272的表达谱和临床信息,并筛选差异靶点。通过机器学习算法支持向量机(support vector machine,SVM)进一步筛选疾病靶点基因。疾病靶点与活性成分靶点的交集靶点为小柴胡汤治疗RA的潜在作用靶点。利用clusterProfiler包对潜在靶点进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析和WikiPathway通路富集分析。将活性成分和潜在作用靶点导入Cytoscape 3.8.2软件构建“药物-活性成分-潜在靶点-疾病”网络,拓扑分析获取小柴胡汤治疗RA的核心成分。利用LASSO回归筛选小柴胡汤治疗RA的核心靶点。利用ssGSEA算法对核心靶点进行免疫浸润分析。结果:共筛选出有效活性成分193个,相关靶点2719个。通过limma包差异分析共筛选出1361个差异基因。基于SVM进一步筛选得到357个差异基因,潜在靶点62个。GO富集分析得到489个GO条目,信号通路富集分析得到70条Wiki信号通路。“药物-活性成分-潜在靶点-疾病”网络分析发现香豆雌酚可能是小柴胡汤治疗RA的核心成分。LASSO回归筛选到趋化素样因子(chemokine like factor,CKLF)和胱抑素A(cystatin A,CSTA)可能是小柴胡汤治疗RA的核心作用靶点。数据分析显示,与正常样本比较,RA患者中CKLF和CSTA均呈现高表达趋势(P<0.0001),且具有良好的诊断效能。免疫浸润分析表明,RA的发生发展与多种免疫细胞失调相关,核心靶点CKLF和CSTA可通过调控多种免疫细胞浸润缓解RA的进程。结论:小柴胡汤可能通过抗炎、调节免疫细胞功能等多方面发挥对RA的治疗作用。

关键词：小柴胡汤类风湿关节炎免疫浸润机器学习网络药理学

代谢组学结合网络药理学技术探究“瓜蒌-薤白”药对抗动脉粥样硬化的配伍机制

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中国中药杂志 2022年第22期47卷 6207-6216页

作者：李加会徐鹏博钟华周安吴鸿飞戴敏安徽中医药大学药学院中药研究与开发安徽省重点实验室安徽合肥230012

从代谢组学的角度,研究“瓜蒌-薤白”药对治疗载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的配伍机制。利用高脂饮食建立AS小鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色评价小鼠主动脉病理学形态;采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间... 详细信息

从代谢组学的角度,研究“瓜蒌-薤白”药对治疗载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的配伍机制。利用高脂饮食建立AS小鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色评价小鼠主动脉病理学形态;采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术对小鼠血清样品进行代谢轮廓分析,结合偏最小二乘判别分析与正交偏最小二乘判别分析等多元数据统计方法,筛选小鼠体内潜在生物标志物;运用网络药理学技术进一步筛选AS相关的代谢物及其代谢通路的干预靶点,Gene Ontology(GO)生物功能富集分析得到与代谢通路干预靶点相关的生物学途径。结果显示,瓜蒌及“瓜蒌-薤白”可不同程度地减少AS小鼠主动脉窦斑块(P<0.05)及胶原面积(P<0.05);与瓜蒌、薤白相比,“瓜蒌-薤白”减少主动脉窦斑块(P<0.05)及胶原面积(P<0.05)更为显著;代谢组学检测出16种小鼠体内潜在生物标志物,瓜蒌可回调甘油磷脂代谢途径中4种代谢物,薤白可回调花生四烯酸代谢途径中2种代谢物,“瓜蒌-薤白”药对可回调甘油磷脂、亚油酸、花生四烯酸及嘧啶代谢途径中8种代谢物;网络药理学筛选与AS相关的代谢物,表明瓜蒌回调2种AS相关代谢物,与24个代谢靶点关联,涉及甘油磷脂代谢相关生物途径;薤白回调2种AS相关代谢物,与40个代谢靶点关联,涉及花生四烯酸代谢相关生物途径;“瓜蒌-薤白”药对回调6种AS相关代谢物,与57个代谢靶点关联,涉及亚油酸、甘油磷脂、花生四烯酸代谢相关的生物途径。表明“瓜蒌-薤白”配伍后影响AS小鼠体内更多的代谢途径,增强对亚油酸代谢、甘油磷脂及花生四烯酸代谢的影响,相互协同改善AS小鼠体内脂质紊乱及炎症反应,发挥抗AS的作用。

关键词： “瓜蒌-薤白”药对动脉粥样硬化配伍机制代谢组学

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基于数据挖掘探讨含钙中药药性规律

中成药 2021年第7期43卷 1873-1877页

作者：李伟蒋沙莎欧美凤陈冉王运来许钒安徽中医药大学药学院中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

目的基于数据挖掘探讨含钙中药药性规律。方法查阅《中国药典》《中华本草》《中药大辞典》《安徽省中药饮片炮制规范》中29味主要含钙的中药,确定Ca^(2+)、阴离子含量,制成含钙中药原始数据库。采用Clementine 12.0软件进行关联分析,SP... 详细信息

目的基于数据挖掘探讨含钙中药药性规律。方法查阅《中国药典》《中华本草》《中药大辞典》《安徽省中药饮片炮制规范》中29味主要含钙的中药,确定Ca^(2+)、阴离子含量,制成含钙中药原始数据库。采用Clementine 12.0软件进行关联分析,SPSS 23.0软件进行聚类分析、主成分分析,探讨含钙中药的一般药性规律和主要成分。结果含钙中药大多性寒,味咸,归肝经,主要功效平肝潜阳、安神镇惊,主要分为碳酸钙组、磷酸钙组、硫酸钙组,三者占含钙中药96.5%,主要成分为Ca^(2+)、CO_(3)^(2-)、PO_(4)^(3-)离子。结论含钙中药对小儿高热惊厥、高血压有潜在的治疗效果。

关键词：含钙中药药性规律关联分析聚类分析主成分分析

连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导小鼠肝纤维化及其机制的研究

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中国中药杂志 2022年第22期47卷 6137-6145页

作者：郭茜张奕黄镇林陆宾季莉莉上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

该研究旨在探讨连翘酯苷A(forsythiaside A, FTA)改善四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)诱导小鼠肝纤维化的药效及其机制。通过血清谷丙/谷草转氨酶(alanine/aspartate aminotransferase, ALT/AST)活力检测,肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline, HYP)含量测定和Ⅰ型胶原α1 (collagenⅠalpha 1, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1 (collagenⅢalpha 1, Col3a1)基因表达的检测,并进行肝组织苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、马松三色(Masson′s trichrome, Masson)染色和天狼星红(Sirius red)染色评价FTA对CCl4诱导小鼠肝纤维化的改善作用;采用qPCR检测肝组织和肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)中α-平滑肌肌动蛋白(actin alpha 2/α-smooth muscle actin, Acta2/α-SMA)、转化生长因子β(transforming growth factor β, Tgfβ)等基因的表达,并采用Western blot检测肝组织和HSC中α-SMA蛋白的表达,评价FTA对HSC活化的抑制作用;采用Western blot检测肝组织血管富集部位中α-SMA、波形蛋白(vimentin, Vim)、血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin, Ve-cadherin)与血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1, PECAM-1/CD31)蛋白的表达,评价FTA对血管内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition, EMT)的逆转作用。结果显示,与模型组相比,FTA能明显地降低CCl4造成的肝细胞坏死、肝脏中的炎性细胞浸润和胶原沉积,表明FTA具有改善肝纤维化的药效。FTA可以降低肝脏组织中Acta2、Tgfβ、Col1a1、Col3a1基因的表达,减少HSC中升高的α-SMA蛋白表达;FTA还可以逆转肝组织血管富集部位中升高的Vim、α-SMA和降低的Ve-cadherin、CD31蛋白表达。上述结果表明,FTA可能通过抑制HSC活化和逆转EMT发挥抗肝纤维化的药效。

关键词： CCl4 连翘酯苷A 肝纤维化肝星状细胞内皮-间充质转化

藁本内酯介导的线粒体自噬减轻HT22细胞的缺糖缺氧/复氧损伤

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中国中药杂志 2022年第7期47卷 1897-1903页

作者：吴倩刘娇田丽宇汪宁安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中药药效与安全评价研究所安徽合肥230012

线粒体作为细胞能量供应的主要场所,是决定缺血后神经细胞生存和死亡的关键靶区。缺血性脑卒中发生时,及时清除受损线粒体对于改善线粒体功能修复神经损伤至关重要。该文旨在研究中药活性成分藁本内酯(ligustilide, LIG)对缺糖缺氧/复氧... 详细信息

线粒体作为细胞能量供应的主要场所,是决定缺血后神经细胞生存和死亡的关键靶区。缺血性脑卒中发生时,及时清除受损线粒体对于改善线粒体功能修复神经损伤至关重要。该文旨在研究中药活性成分藁本内酯(ligustilide, LIG)对缺糖缺氧/复氧(oxygen and glucose deprivation/reperfusion, OGD/R)致HT22细胞损伤时线粒体功能及线粒体自噬的影响。通过体外建立OGD/R模型,经藁本内酯预处理HT22细胞3 h后,采用CCK-8法检测细胞活力;免疫荧光法及流式细胞术检测线粒体功能相关指标如线粒体膜电位、钙离子超载情况、活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量变化;Western blot法检测线粒体分裂蛋白Drp1及凋亡执行蛋白cleaved caspase-3表达;免疫荧光观察线粒体标志蛋白TOMM20和自噬发生标志物——溶酶体关联膜蛋白2的共定位情况。结果显示,与模型组相比,藁本内酯可以增加HT22细胞的存活率。进一步实验表明,藁本内酯可以抑制OGD/R损伤后HT22细胞内ROS的释放、钙离子超载及线粒体膜电位的下降,同时促进线粒体分裂蛋白Drp1的表达,增加线粒体与溶酶体关联膜蛋白2的共定位。以上结果表明藁本内酯可以改善OGD/R损伤后的线粒体功能,促进线粒体自噬的发生。当给予线粒体自噬抑制剂mdivi-1后,凋亡蛋白表达升高,表明藁本内酯发挥的神经保护作用可能与促进线粒体自噬有关。

关键词：藁本内酯线粒体自噬缺糖缺氧/复氧 HT22细胞

地奥心血康上调Nrf2/HO-1信号通路改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

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中国中药杂志 2022年第9期47卷 2491-2499页

作者：李国莺陈文静贾步云何祥汪丹丹陈光亮安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230601 中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

研究地奥心血康(Di′ao Xinxuekang,DXXK)对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的治疗作用及作用机制。将65只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂饲料造模16周,确认模型成功后,随机分为模型组、阿... 详细信息

研究地奥心血康(Di′ao Xinxuekang,DXXK)对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的治疗作用及作用机制。将65只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂饲料造模16周,确认模型成功后,随机分为模型组、阿托伐他汀组(4 mg·kg^(-1)·d^(-1))以及DXXK高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,灌胃给药,连续8周。测定血脂、肝脏脂质以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平;酶联免疫吸附测定法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;计算肝脏指数;HE染色和油红O染色分别观察肝脏病理和脂质蓄积情况;透射电镜观察肝脏超微结构;实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法分别检测核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因和蛋白的表达水平。结果显示,与正常组比较,模型组小鼠血脂和肝脏脂质代谢紊乱,血转氨酶升高,肝脏脂质沉积并出现明显的脂肪变性和炎症,提示成功复制小鼠NASH模型。与模型组比较,DXXK组血脂、肝脂质、ALT、AST、MDA和IL-1β、TNF-α水平降低,SOD、GSH-Px水平升高,肝细胞脂肪变性、气球样变和炎症有不同程度的减轻,Nrf2和HO-1基因和蛋白的表达水平显著上调。综上DXXK可显著改善小鼠NASH,与上调Nrf2/HO-1信号通路减轻氧化应激和炎症损伤有关。

关键词：地奥心血康非酒精性脂肪性肝炎 Nrf2/HO-1信号通路氧化应激炎症

不同产地白芍标准煎液的指纹图谱及4种单萜苷类成分含量测定

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中国现代应用药学 2020年第11期37卷 1290-1295页

作者：于现花高海燕金传山刘军玲林杰王林安徽中医药大学药学院合肥230012 中药饮片制造新技术安徽省重点实验室合肥230012 中药复方安徽省重点实验室合肥230012 安徽省食品药品检验所合肥230051

目的建立不同产地白芍饮片标准煎液的质量评价方法,以其分析不同产地白芍饮片的差异性。方法根据标准煎液的制备要求,制备15批不同产地的白芍饮片标准煎液,采用HPLC建立指纹图谱,同时测定氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷... 详细信息

目的建立不同产地白芍饮片标准煎液的质量评价方法,以其分析不同产地白芍饮片的差异性。方法根据标准煎液的制备要求,制备15批不同产地的白芍饮片标准煎液,采用HPLC建立指纹图谱,同时测定氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷成分含量以及转移率、标准煎液出膏率,并以标准煎液的含量测定结果对所有样品进行方差分析。结果15批不同产地白芍标准煎液的出膏率范围为15.39%~27.81%,平均出膏率为23.15%,标准偏差为4.44%;氧化芍药苷含量范围为0.015%~0.046%,转移率为70.04%~129.26%;芍药内酯苷含量范围为0.315%~1.150%,转移率为70.77%~119.80%;芍药苷含量范围为1.857%~2.522%,转移率为67.84%~99.16%;苯甲酰芍药苷含量范围为0.051%~0.172%,转移率为56.11%~88.00%;指纹图谱包含共有峰14个,标定4个,相似度>0.97。结论不同产地白芍饮片和标准煎液的成分基本一致,白芍标准煎液中芍药苷、苯甲酰芍药苷无差异,氧化芍药苷、芍药内酯苷有差异。

关键词：白芍氧化芍药苷芍药内酯苷芍药苷苯甲酰芍药苷标准煎液指纹图谱含量