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NOX4调控神经细胞增殖在神经管缺损发生中的作用

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中华小儿外科杂志 2023年第3期44卷 252-258页

作者：付佳琳黄琬淇黄天楚顾卉袁正伟中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的探究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)通过调控细胞增殖对小鼠神经管缺损(neural tube defects,NTDs)形成的作用。方法选用体重18~20 g的健康C57BL/6J小鼠,雌鼠30只,雄鼠15只,雌雄小鼠按2∶1比例于晚上合笼、过夜,次日清晨观察小鼠阴道栓,有明显阴道栓确认已交配,当日记为孕0.5 d(E0.5)。选取明确受孕的18只小鼠,按随机数字表法随机分为小鼠NTDs组(9只)和对照组(9只)。孕8.5 d(E8.5)时,将小鼠NTDs组利用全反式维甲酸(all trans retinoid acid,ATRA)按70 mg/kg的浓度灌胃处理,对照组采用橄榄油灌胃处理。在孕9.5 d(E9.5)收集胎鼠。体式显微镜下观察胚胎神经管发育情况并拍照记录形态。通过免疫荧光染色法观察神经管形态,蛋白质印迹法(Western blot)检测NOX4和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在神经管的表达情况。构建NOX4过表达质粒(oe-NOX4)和对照(NC)以及NOX4沉默质粒(sh-NOX42^(#)、sh-NOX43^(#))和对照(sh-NC),分别转染至C17.2细胞系中,通过Western blot检测NOX4及增殖相关蛋白PCNA的表达情况;通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测转染质粒24 h、48 h、72 h、96 h后细胞生长情况,进一步明确NOX4对细胞增殖的调控作用。结果体式显微镜下观察E9.5胎鼠神经管发育情况,NTDs组存在明显神经管畸形。免疫荧光染色结果也显示NTDs组存在明显的神经管闭合不全,对照组神经管发育正常,且NTDs组神经管中NOX4表达略高于对照组,而PCNA的表达低于对照组。Western blot结果显示,NTDs组胚胎中NOX4表达(6.24±2.70)高于对照组(1.00±0.51),PCNA的表达(0.75±0.09)低于对照组(1.00±0.12),两组间的差异有统计学意义(P实验探究NOX4对细胞增殖能力的影响,结果提示,过表达NOX4,24 h后与NC组相比,吸光度为(0.48±0.01)比(0.48±0.02),48 h为(0.82±0.04)比(1.12±0.03),72 h为(1.07±0.10)比(2.10±0.10),96 h为(2.53±0.20)比(3.01±0.43),细胞增殖能力呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05);而与sh-NC相比,当转染sh-NOX42^(#)、sh-NOX43^(#),24 h吸光度分别为(0.32±0.02)、(0.31±0.02)、(0.30±0.01),48 h为(0.77±0.02)、(0.64±0.04)、(0.37±0.04),72 h为(1.94±0.05)、(1.69±0.03)、(1.24±0.08),96 h为(2.33±0.11)、(2.11±0.05)、(2.01±0.01),细胞增殖能力有显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NTDs中异常高表达的NOX4能够通过降低增殖相关蛋白PCNA的表达,抑制细胞增殖,导致小鼠神经管闭合异常。

关键词：神经管缺损烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 细胞增殖

体外膜氧合技术治疗儿童严重急性呼吸窘迫综合征的预后因素分析

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中华儿科杂志 2024年第7期62卷 661-668页

作者：何小钰程晔高恒妙陈应富许巍成怡冰杨子浩王义程东良陈伟明闫钢风张羿洪小杨陆国平国家儿童医学中心复旦大学附属儿科医院重症医学科上海201102 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院重症医学科北京100045 重庆医科大学附属儿童医院重症医学科重庆400014 中国医科大学附属盛京医院小儿重症监护病房沈阳110004 河南省儿童医院重症医学科郑州450012 浙江大学医学院附属儿童医院重症医学科杭州310003 西安交通大学附属儿童医院重症医学科西安710003 河南省人民医院儿童重症监护室郑州450000 国家儿童医学中心复旦大学附属儿科医院流行病学教研室上海201102 解放军总医院第七医学中心儿科北京100007

目的探索影响体外膜氧合(ECMO)技术治疗严重儿童急性呼吸窘迫综合征(ARDS)预后的因素。方法多中心前瞻性观察性研究。以中国9家主要儿童ECMO中心2018年1月至2022年12月收治的95例ECMO挽救性治疗的严重ARDS患儿为研究对象,记录其一般资... 详细信息

目的探索影响体外膜氧合(ECMO)技术治疗严重儿童急性呼吸窘迫综合征(ARDS)预后的因素。方法多中心前瞻性观察性研究。以中国9家主要儿童ECMO中心2018年1月至2022年12月收治的95例ECMO挽救性治疗的严重ARDS患儿为研究对象,记录其一般资料、疾病危重度和脏器功能、综合治疗情况以及预后,根据出院时的转归分为存活组和死亡组,应用t检验、χ^(2)检验、多因素Logistic回归和混合线性模型分析ECMO启动前基线情况和ECMO过程中连续监测的指标(小儿危重评分、血小板计数、白蛋白、纤维蛋白原等)与预后的关系。结果95例接受了ECMO治疗的严重ARDS患儿中男55例(58%)、女40例(42%),年龄36.9(0.5,72.0)月龄。12例患儿(13%)存在免疫缺陷。68例(72%)患儿采用静脉动脉模式,27例(28%)采用静脉静脉模式。95例患儿出院存活率为51%(48例),静脉动脉和静脉静脉模式分别为47%(32/68)和59%(16/27)。死亡组患儿比存活组免疫缺陷的例数更多,小儿危重评分、血小板计数、白蛋白、纤维蛋白原和氧合指数均更低,呼吸机驱动压(ΔP)和氧指数均更高,ECMO前ARDS持续时间更长(均P0.05)。高ΔP、高氧指数、低氧合指数和低白蛋白均是影响预后的高危因素(均P<0.05)。ΔP≥25 cmH_(2)O(1 cmH_(2)O=0.098 kPa)、氧合指数≤67 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和氧指数≥35均是预测不良预后的阈值(均P<0.05)。死亡组和存活组的ΔP、氧合指数、氧指数在ECMO后24 h起差异均有统计学意义(均P<0.05),并且随着ECMO进程差异逐步扩大;血小板水平从ECMO后7 d开始差异有统计学意义(P<0.05),并逐渐扩大;血乳酸水平在ECMO应用前、后差异有统计学意义(P<0.05),并从ECMO后24 h逐步扩大。结论ECMO前高ΔP、高氧指数、低氧合指数、低白蛋白是影响ECMO治疗严重儿童ARDS预后的高危因素。ECMO过程中第24小时起ΔP、氧指数逐渐降低和氧合指数逐渐升高预示预后良好,而ECMO应用后乳酸逐步升高预示预后不良。

关键词：儿童急性呼吸窘迫综合征体外膜氧合作用预后

先天性肛门直肠畸形胎鼠支配肛提肌感觉神经元定量研究

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中华医学杂志 2007年第2期87卷 131-133页

作者：管考平袁正伟王维林高飞苏鹏俊中国医科大学附属盛京医院小儿外科卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的定量观察支配肛提肌的感觉神经元,探讨先天性肛门直肠畸形术后发生排便功能障碍的病因。方法采用胎仔外科、显微注射和神经示踪相结合技术对孕20 d Wistar 胎鼠支配肛提肌的感觉神经元进行荧光金标记,脊髓连续横切片,计数标记神经... 详细信息

目的定量观察支配肛提肌的感觉神经元,探讨先天性肛门直肠畸形术后发生排便功能障碍的病因。方法采用胎仔外科、显微注射和神经示踪相结合技术对孕20 d Wistar 胎鼠支配肛提肌的感觉神经元进行荧光金标记,脊髓连续横切片,计数标记神经元数量并观察神经元形态。乙烯硫脲致畸制作先天性肛门直肠畸形动物模型。结果支配肛提肌的感觉神经元主要分布在 L_4-S_1脊髓节段的脊髓背根神经节。正常对照组(24只胎鼠)标记神经元数量为(11804±2362)个,先天性肛门直肠畸形组标记神经元数量明显减少,低位畸形组(18只胎鼠)为(2886±705)个,高位畸形组(41只胎鼠)为(1026±425)个,两个畸形组分别与正常对照组相比差异有统计学意义(均 P先天性肛门直肠畸形胎鼠支配肛提肌腰骶髓感觉神经元存在明显发育异常。

关键词：消化系统畸形传入感觉神经元肛提肌

腰骶部隐性脊柱裂在小儿非潴留性便失禁发生中的意义

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中华医学杂志 2008年第10期88卷 694-696页

作者：高飞袁正伟王维林王伟张树成刘丹中国医科大学附属盛京医院小儿外科卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的探讨腰骶部隐性脊柱裂（SBO）在小儿非潴留性便失禁（NRFI）发生中的临床意义及其病理特点。方法对27例NRFI患儿（合并SBO组21例，未合并SOB组6例）及226例无胃肠道、泌尿系统和神经系统症状的患儿（对照组）进行腰骶椎X线片、盆底... 详细信息

目的探讨腰骶部隐性脊柱裂（SBO）在小儿非潴留性便失禁（NRFI）发生中的临床意义及其病理特点。方法对27例NRFI患儿（合并SBO组21例，未合并SOB组6例）及226例无胃肠道、泌尿系统和神经系统症状的患儿（对照组）进行腰骶椎X线片、盆底神经电生理、结肠传输试验、直肠肛管向量测压和盆底肌电图等检查，分析SBO和NRFI临床症状与肛门直肠功能改变的关系。结果NRFI患儿中SBO发生率为78％（21／27），明显高于对照组[24％（54／226）]。反映支配肛门外括约肌神经功能的会阴-肛门反射潜伏期分别为（52±20）、（29±9）和（23±7）ms，NRFI合并SBO组明显长于NRFI未合并SBO组和对照组（均P〈0．05）；反映结肠传输功能的全结肠传输时间分别为（41±17）、（24±5）和（29±8）h，NRFI合并SBO组明显长于NRFI未合并SBO组和对照组（均P〈0．05）；反映肛门内括约肌功能的静息向量容积在NRFI合并SBO组、NRFI未合并SBO组和对照组分别为（376±283）、（278±133）和（662±311）cm×cm Hg^2，反映肛门外括约肌功能的收缩向量容积分别为（564±287）、（400±169）和（934±426）cm×cm Hg^2，两个病例组之间差异无统计学意义，但均明显低于对照组（均P〈0．05）。结论SBO是NRFI的主要原因，治疗上应采取神经功能恢复为主的治疗措施。

关键词：脊柱裂,隐眭大便失禁肛门直肠功能

Smad 2/3/4和TGF-β1在先天性巨结肠症组织中的表达

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中华小儿外科杂志 2012年第5期33卷 393-395页

作者：高红弭杰伍美苗佳宁黄天楚王维林中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室

转化生长因子叩(TGFβ)是许多具有共同生物学特性的信号分子组成的大家族,称为TGF-β超家族(transfornmggrowth factor-beta superfamily),TGF-β1是其中一员。TGF-β1是一类具有多种功能的多肽类生长因子,主要功能是抑制细胞生长,促进... 详细信息

转化生长因子叩(TGFβ)是许多具有共同生物学特性的信号分子组成的大家族,称为TGF-β超家族(transfornmggrowth factor-beta superfamily),TGF-β1是其中一员。TGF-β1是一类具有多种功能的多肽类生长因子,主要功能是抑制细胞生长,促进基质形成,与多种疾病的发生发展密切相关。TGF-β1主要作用包括调节细胞增殖和分化,参与胚胎发育调节,促进细胞外基质形成和抑制免疫反应等。此外,参与细胞周期、细胞生长、骨骼发育和蛋白氨基

关键词： Smad2/3/4 TGF-β1 巨结肠症

蓬乱蛋白的生物学功能及其在疾病中的研究进展

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中华实验外科杂志 2013年第7期30卷 1541-1542页

作者：陈东高红中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

蓬乱蛋白（DVL）是由蓬乱基因编码，翻译并表达的1种信号转导蛋白，它主要通过经典Wnt信号途径和非经典Wnt信号途径调节许多生物发育过程。它在细胞增殖、肿瘤形成、胚胎发育和神经分化等方面起重要作用。现介绍DVL的生物学功能及其在... 详细信息

蓬乱蛋白（DVL）是由蓬乱基因编码，翻译并表达的1种信号转导蛋白，它主要通过经典Wnt信号途径和非经典Wnt信号途径调节许多生物发育过程。它在细胞增殖、肿瘤形成、胚胎发育和神经分化等方面起重要作用。现介绍DVL的生物学功能及其在疾病中的研究现状。

关键词：信号转导蛋白生物学功能疾病 Wnt信号途径基因编码发育过程细胞增殖肿瘤形成

先天性巨结肠神经生长因子及神经生长因子受体基因表达

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中华小儿外科杂志 2005年第3期26卷 125-127页

作者：高红张志波王维林黄英中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的　探讨神经生长因子 (nervegrowthfactor, NGF)及其神经生长因子受体 (nervegrowthfactorreceptor,NGFR)对先天性巨结肠(Hirschsprung'sdisease, HD)的调控作用。方法　采用RT PCR技术检测新鲜标本正常对照肠管、痉挛段、移行段和... 详细信息

目的　探讨神经生长因子 (nervegrowthfactor, NGF)及其神经生长因子受体 (nervegrowthfactorreceptor,NGFR)对先天性巨结肠(Hirschsprung'sdisease, HD)的调控作用。方法　采用RT PCR技术检测新鲜标本正常对照肠管、痉挛段、移行段和扩张段各 22例NGF和NGFRmRNA的表达,分析并统计其与临床病理特点之间的关系。结果　22例正常对照肠管 21例NGFmRNA表达阳性(95.5% ),20例NGFRmRNA表达阳性(90.9% );痉挛段 5例NGFmRNA表达阳性(22.7% ),6例NG FRmRNA表达阳性(27.3% );移行段 9例NGFmRNA表达阳性(49.9% ),7例NGFRmRNA表达阳性(31.8% );扩张段 18例NGFmRNA表达阳性 (81.8% ),19例NGFRmRNA表达阳性 (86.4% )。NGF和NGFRmRNA正常肠管与扩张段肠管中表达高度一致;痉挛段和移行段均为NGFmRNA和NGFRmRNA低表达。结论　NGF和NGFR与HD病理形态有相关性;HD的痉挛段和移行段肠管NGF及NGFR表达异常,提示NGF和NGFR基因可能与HD的发生有关。

关键词： NGF mRNA表达阳性痉挛肠管正常神经生长因子受体 RT 提示

用实时定量PCR和DGGE技术检测先天性巨结肠SIP1基因的表达与异质性

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中华小儿外科杂志 2009年第12期30卷 840-844页

作者：高红吕良英张娟王维林黄英王大佳中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的建立简单、有效的SIP1基因在先天性巨结肠症（Hirschsprung disease，HD）中表达情况及异质性筛查技术，并获取其相应的散发性HD人群频率分布。方法采用荧光实时定量PCR（quantitative real—time PCR，qRT-PCR）方法检测180例HD及... 详细信息

目的建立简单、有效的SIP1基因在先天性巨结肠症（Hirschsprung disease，HD）中表达情况及异质性筛查技术，并获取其相应的散发性HD人群频率分布。方法采用荧光实时定量PCR（quantitative real—time PCR，qRT-PCR）方法检测180例HD及正常人外周血SIP1基因的mRNA转录水平；采用PCR-DGGE（PCR degenerating gel gradient clactrophoresis，PCR-DGGE）法检测SIP1基因外显子1-rs11544569和外显子2-rs57148397的异质性。结果SIP1基因在62．2％（112／180）的正常人和90．5％（163／180）的HD中阳性表达。HD患儿中SIP1基因在mRNA转录水平的表达均高于正常人外周血（P〈0．05）。rs11544569和rs57148397两位点分别有104例和119例HD观察到异质性，其发生率为57．8％和66．1％。180例正常人中均未发现异常电泳条带。结论检测SIP1mRNA含量可作为判断HD的良好参考指标。PCR-DGGE是一种简单、灵敏、高效的SIP1基因多态性及异质性检测技术，可应用于医学实践。

关键词：巨结肠,先天性聚合酶链反应

miR-125a在先天性巨结肠中的表达及意义

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中华小儿外科杂志 2011年第2期32卷 158-160页

作者：高红苏真伟伍美张志波黄英王维林中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

MicmRNA（miRNA）是近几年在真核生物中发现的一类具有调控功能的非编码RNA，大小约为21～25个碱基的单链小分子RNA。miRNA能调节生物体生长、发育和疾病发生过程中有关基因的表达，推测这种小分子调控人类近1／3的基因，平均每个miRNA... 详细信息

MicmRNA（miRNA）是近几年在真核生物中发现的一类具有调控功能的非编码RNA，大小约为21～25个碱基的单链小分子RNA。miRNA能调节生物体生长、发育和疾病发生过程中有关基因的表达，推测这种小分子调控人类近1／3的基因，平均每个miRNA可调节人类200种不同的mR—NA表达，并且多个miRNA能够协调调节一些特殊的靶基因。大量实验证明在多种疾病中，

关键词：先天性巨结肠非编码RNA miRNA 小分子RNA 分子调控可调节靶基因真核生物