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SAHA对水牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育潜能的影响

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农业生物技术学报 2016年第9期24卷 1450-1456页

作者：陆杏蓉梁贤威邓廷贤朱鹏段安琴庞春英中国农业科学院广西水牛研究所/广西水牛遗传繁育重点实验室

卵母细胞体外成熟过程中组蛋白修饰发生了剧烈的变化,其表达模式的改变对卵母细胞的成熟乃至后续胚胎的发育有着至关重要的作用。去乙酰化酶抑制剂-伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)作为新型抗癌药物,是组蛋白去乙酰化... 详细信息

卵母细胞体外成熟过程中组蛋白修饰发生了剧烈的变化,其表达模式的改变对卵母细胞的成熟乃至后续胚胎的发育有着至关重要的作用。去乙酰化酶抑制剂-伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)作为新型抗癌药物,是组蛋白去乙酰化酶的潜在抑制剂,在体内和体外抑制多种类型肿瘤细胞生长并促进其分化和凋亡。为探讨组蛋白去SAHA对水牛(Bubalus bubalus)卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育潜能的影响,本研究比较了不同浓度(0,2,5,10,20和40 nmol/L)SAHA处理成熟期的水牛卵母细胞对其成熟率(第一极体排出率)、受精卵分裂率、囊胚率和囊胚总细胞数的影响。结果表明,10 nmol/L SAHA处理组成熟率、卵裂率、囊胚率显著高于对照组((77.07±1.79)%和(62.3±2.08)%,(86.81±1.93)%和(74.86±2.07)%,(27.56±2.86)%和(24.23±1.74)%,P0.05)。q RT-PCR检测结果显示,SAHA对水牛卵母细胞成熟过程的处理,均显著下调了c AMP反应元件结合蛋白(c AMP responsive element binding protein,CREB)结合蛋白基因CBP、组蛋白乙酰转移酶1基因(histone acetyltransferases 1,HAT1)、组蛋白去乙酰化酶1基因(histone deacetylase 1,HDAC1)在MⅡ期卵母细胞中的表达,P300则有所上调。实验结果表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA处理是一种能够提高水牛卵母细胞体外成熟效率促进胚胎发育的有效途径之一,该研究结果可为今后研究转基因克隆胚胎发育相关基因调控机理提供了理论基础。

关键词：水牛卵母细胞胚胎发育 SAHA 组蛋白去乙酰化

添加亚油酸条件下不同剂量硝酸钠对水牛瘤胃体外发酵脂肪酸组成及相关微生物数量的影响

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草业学报 2021年第9期30卷 159-167页

作者：郭艳霞李孟伟唐振华彭丽娟彭开屏谢芳谢华德杨承剑中国农业科学院广西水牛研究所农业农村部广西水牛遗传繁育重点实验室广西南宁530001

为了探究添加亚油酸条件下不同剂量硝酸钠对水牛瘤胃体外发酵脂肪酸组成及相关微生物数量的影响,本试验选用3头装有永久性瘤胃瘘管的母水牛,以精粗比40∶60为底物进行瘤胃液体外发酵试验。试验组硝酸钠的浓度分别为1、2、3 mg·mL^(-1)... 详细信息

为了探究添加亚油酸条件下不同剂量硝酸钠对水牛瘤胃体外发酵脂肪酸组成及相关微生物数量的影响,本试验选用3头装有永久性瘤胃瘘管的母水牛,以精粗比40∶60为底物进行瘤胃液体外发酵试验。试验组硝酸钠的浓度分别为1、2、3 mg·mL^(-1),对照组不加硝酸钠,每组均添加0.25 mg·mL^(-1)的亚油酸,每组各5个重复。在体外培养3、6、9、12、24 h时测定产气量和甲烷产量,24 h结束培养,测定瘤胃体外发酵参数、脂肪酸含量及瘤胃微生物数量。结果表明:1)添加硝酸钠显著降低了总产气量和甲烷产量(P0.05);3)添加1 mg·mL^(-1)硝酸钠,C18:2cis-9,trans-11、C18:2trans-10,cis-12含量和不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸(UFA/SFA)显著高于其他组(P水牛TVFA含量不变的情况下显著降低了甲烷含量,且1 mg·mL^(-1)硝酸钠能促进亚油酸生成共轭亚油酸(CLA),优化脂肪酸组成,并能增加大多数瘤胃微生物的数量。

关键词：硝酸钠体外发酵甲烷生物氢化瘤胃微生物

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水牛LGALS3BP基因克隆及序列分析

基因组学与应用生物学 2016年第3期35卷 535-541页

作者：朱鹏庞春英段安琴邓廷贤陆杏蓉梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

为了阐明水牛半乳糖凝集素3结合蛋白(lectin,galactoside-binding,soluble,3 binding protein,LGALS3BP)基因的结构及功能,本试验采用了3'RACE克隆获得LGALS3BP基因并对其进行了信息学分析。结果表明:水牛LGALS3BP基因编码区长1 668 bp,3'UTR区长590 bp,编码555个氨基酸。BLAST程序比对结果表明克隆获得的LGALS3BP序列与人、非洲象、猫、马、猪、绵羊和牛的同源性分别为82%、82%、84%、83%、94%、94%和97%,系统进化树分析结果表明,LGALS3BP基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明LGALS3BP蛋白呈弱酸性,第18~19位氨基酸为其蛋白信号肽剪切区域,亚定位于细胞外,存在SR,BACK和BTB等结构域。micro RNA预测显示bta-mi R-2316,bta-mi R-484和btami R-2888等可能为LGALS3BP 3'非翻译区(untranslated region,UTR)潜在靶标。总之,本研究成功克隆获得了水牛LGALS3BP基因并对其进行了系统的信息学分析。

关键词：水牛 LGALS3BP 克隆分析

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RAPD标记鉴别四个水牛品种的初步研究

基因组学与应用生物学 2020年第4期39卷 1535-1539页

作者：于农淇郑海英杨春艳鄢胜飞李孟琪黄加祥尚江华中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

为进一步保护和开发中国本地水牛和国外引进水牛的遗传资源,建立快速区分鉴别本地和引进水牛品种的方法。设计57条随机扩增多态性(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)引物,对本地沼泽型水牛和国外引进的河流型(摩拉,尼里拉菲和... 详细信息

为进一步保护和开发中国本地水牛和国外引进水牛的遗传资源,建立快速区分鉴别本地和引进水牛品种的方法。设计57条随机扩增多态性(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)引物,对本地沼泽型水牛和国外引进的河流型(摩拉,尼里拉菲和地中海)水牛之间的遗传差异进行了调查。以128头水牛DNA样本为模板,通过PCR扩增从57条RAPD引物中筛选并优化反应条件。实验结果显示,筛选得到了5条可用于区分本地沼泽型水牛与引进河流型水牛的引物(OPG6,OPG7,S11,S40和S1013),建立了RAPD鉴别区分沼泽与河流水牛的方法。本实验的结果为中国水牛的杂交改良、良种培育和本地水牛种质资源的保护等工作提供了理论和实验依据。

关键词：水牛 RAPD 品种鉴定

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水牛STAT1基因多态与产奶性状关联分析

畜牧兽医学报 2016年第1期47卷 48-54页

作者：邓廷贤庞春英朱鹏段安琴陆杏蓉杨炳壮梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本研究旨在检测水牛STAT1基因的单核苷酸多态性(SNP),探究中国水牛多态性位点的群体遗传特征,寻找与产奶性状相关的分子标记。采用PCR和测序法筛选水牛STAT1基因序列的SNPs,以357头水牛为研究对象,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱... 详细信息

本研究旨在检测水牛STAT1基因的单核苷酸多态性(SNP),探究中国水牛多态性位点的群体遗传特征,寻找与产奶性状相关的分子标记。采用PCR和测序法筛选水牛STAT1基因序列的SNPs,以357头水牛为研究对象,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)对群体进行了基因型检测,运用SAS(9.3)软件一般线性模型(GLM)对STAT1基因型与产奶性状的关联程度进行统计分析。结果表明,在水牛STAT1基因中检测出3个突变位点,分别位于5′UTR(g.68G>A)、外显子10(g.986G>T)和3′UTR(g.2881C>A)。关联分析结果显示,水牛STAT1基因g.986G>T位点与305天产奶量和乳脂率显著关联(P水牛产奶量的重要环境因素之一。本研究表明,水牛STAT1基因的g.986G>T位点可能是影响其产奶性状的候选分子遗传标记,为今后建立中国水牛标记辅助选择育种研究奠定基础。

关键词：水牛 STAT1基因产奶性状飞行时间质谱关联分析

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水牛原代体细胞慢病毒感染体系的建立

中国畜牧兽医 2019年第10期46卷 3023-3031页

作者：段安琴陆杏蓉马小娅梁莎莎庞春英梁贤威邓廷贤中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室

试验旨在建立水牛原代体细胞慢病毒感染体系。通过比较慢病毒(lentivirus)感染水牛颗粒细胞(buffalo granulosa cell,BuGC)、水牛乳腺上皮细胞(buffalo mammary epithelial cell,BuMEC)、水牛成纤维细胞(buffalo fibroblast cell,BuFC)的效率及荧光强度,筛选出3种水牛原代体细胞的最佳感染复数(MOI)。分离培养获得BuGC、BuMEC及BuFC。将慢病毒质粒pLVX-Puro-GFP和包装质粒pSPAX2、pMAD2.G脂质体转染HEK293T细胞,于转染后48和72 h收集病毒并通过稀释计数法测定慢病毒滴度。将慢病毒按不同的感染复数(100、200、400、600、800)感染BuGC、BuMEC和BuFC,感染72 h后于倒置荧光显微镜下观察拍照,统计感染效率及荧光强度。慢病毒感染3种水牛原代体细胞后,用嘌呤霉素筛选。结果显示,在MOI≤200时,慢病毒感染后细胞荧光强度BuMEC最强,而BuGC和BuFC间无显著差异;在MOI≥400时,慢病毒感染后细胞荧光强度为:BuMEC>BuGC>BuFC。在MOI=100时,慢病毒感染效率为:BuGC>BuMEC>BuFC;在MOI=200时,BuMEC和BuGC感染效率达到100%;在MOI=800时,BuFC感染效率达到100%。不同细胞类型对慢病毒的毒性耐受存在差异,在嘌呤霉素的筛选和维持下,获得了3种水牛原代体细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)过表达慢病毒稳转细胞株。慢病毒感染BuMEC、BuGC、BuFC的最佳MOI分别为200、400和800;3种水牛原代体细胞均能通过慢病毒获得过表达外源基因细胞株。本研究结果为水牛的乳腺组织发育分化、泌乳调控、生殖发育及转基因动物制备等提供了较好的细胞模型。

关键词：水牛慢病毒颗粒细胞乳腺上皮细胞成纤维细胞

亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响

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浙江农业学报 2015年第2期27卷 165-170页

作者：郑海英杨春艳张秀芳黄芬香梁贤威尚江华郑威中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室广西南宁530001

收集屠宰场水牛卵巢卵母细胞,在卵子体外成熟和受精后胚胎体外发育过程中分别添加0(对照组),10,50,100和200μmol·L-1的亚麻酸,探究亚麻酸对水牛卵母细胞核成熟率、受精卵的分裂率和植入前胚胎体外发育的影响。结果显示:在水牛卵母细... 详细信息

收集屠宰场水牛卵巢卵母细胞,在卵子体外成熟和受精后胚胎体外发育过程中分别添加0(对照组),10,50,100和200μmol·L-1的亚麻酸,探究亚麻酸对水牛卵母细胞核成熟率、受精卵的分裂率和植入前胚胎体外发育的影响。结果显示:在水牛卵母细胞体外成熟液中添加亚麻酸,添加浓度50μmol·L-1组的核成熟率(74.18%)显著高于对照组和其他实验组(P水牛卵母细胞体外成熟液和胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸能有效促进水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育。

关键词：亚麻酸卵母细胞体外成熟卵母细胞胚胎发育水牛

沼泽型水牛VASA基因启动子的克隆及转录活性检测

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年第11期44卷 8-14,22页

作者：段安琴庞春英朱鹏邓廷贤陆杏蓉陈明棠杨炳壮梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室广西南宁530001

【目的】克隆沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列,对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测,为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5′侧翼序列,经过同源比对,设计PC... 详细信息

【目的】克隆沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列,对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测,为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5′侧翼序列,经过同源比对,设计PCR引物。以沼泽型水牛血液基因组为模板扩增VASA基因5′侧翼序列并进行测序和生物信息学分析。将扩增的VASA基因5′侧翼片段插入pEGFP-1多克隆位点处,构建pVASA-EGFP-1载体。载体经脂质体转染HEK-293T和CHO细胞系,分析其转录活性。【结果】成功克隆沼泽型水牛VASA 5′侧翼序列及部分CDS区序列,共3 081bp,同源性分析表明,沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列与河流型水牛、黄牛、绵羊、山羊、小鼠和人的相似性分别为99%,96%,93%,95%,90%和79%。对其5′侧翼序列2 000bp进行启动子预测及转录因子结合位点预测,发现在其翻译起始位点上游-635--586处存在TATA box,启动子区存在Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、Gata3、Smad2、Smad3和Smad4等反式作用因子结合位点,其中Stat家族基因在VASA启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个Stats基因结合的情况。水牛VASA启动子能启动EGFP在HEK-293T细胞中的表达,但非常微弱;能启动EGFP在CHO细胞中表达,且启动活性与CMV启动子相似。【结论】成功克隆了沼泽型水牛VASA基因启动子,分析了其启动子序列特征并成功验证其组织特异性和转录活性。

关键词：沼泽型水牛 VASA基因生物信息学分析转录活性

基于16S rRNA基因克隆文库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性

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动物营养学报 2014年第12期26卷 3635-3642页

作者：杨承剑梁辛韦升菊李舒露梁贤威邹彩霞杨炳壮李丽莉中国农业科学院广西水牛研究所、农业部广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本研究旨在利用16S rRNA基因克隆库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性。选取3头体况基本一致的健康雌性富钟水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,采用产甲烷菌引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S... 详细信息

本研究旨在利用16S rRNA基因克隆库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性。选取3头体况基本一致的健康雌性富钟水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,采用产甲烷菌引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S rRNA基因克隆文库。结果表明,本试验共获得93个非嵌合体16S rRNA序列,按照97%的相似性划分为39个分类操作单元(OTU)。其中,60个序列(15个OTU)与已培养细菌16S rRNA序列相似性≥97%,占总序列的64.5%;32个序列(23个OTU)与已培养菌16S rRNA序列相似性处于90%^(水牛瘤胃产甲烷菌以Methanobacteriales为优势菌群,其中有许多未知的产甲烷菌需进一步分离培养并对其功能进行分析。

关键词：富钟水牛瘤胃产甲烷菌多样性