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talin-1调控网络促进肝癌生长和转移的研究

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Talin-1调控网络促进肝癌生长和转移的研究

作者：陈朋安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:talin-1是一种大分子骨架蛋白,其能促进肝癌的进展。然而talin-1促进肝癌进展的机制目前尚无报道。本文通过人全基因芯片分析比较肝癌细胞和敲低talin-1的肝癌细胞的全基因表达谱来分析talin-1促进肝癌发生发展的潜在机制。方法:... 详细信息

目的:talin-1是一种大分子骨架蛋白,其能促进肝癌的进展。然而talin-1促进肝癌进展的机制目前尚无报道。本文通过人全基因芯片分析比较肝癌细胞和敲低talin-1的肝癌细胞的全基因表达谱来分析talin-1促进肝癌发生发展的潜在机制。方法:分别应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative assay,qRT-PCR)及Western blot(WB)检测肝癌细胞株MHCC-97L及正常肝上皮细胞LO2中talin-1 mRNA及蛋白的表达水平。使用病毒转染MHCC-97L细胞制备稳定转染的talin-1敲低MHCC-97L细胞株(sh-talin-1 MHCC-97L)。使用细胞计数法分析比较MHCC-97L细胞和sh-talin-1 MHCC-97L细胞的生长能力;使用细胞划痕实验和Transwell迁移实验分析比较MHCC-97L细胞和sh-talin-1 MHCC-97L细胞的转移能力。使用人全基因芯片(40000个基因)分析MHCC-97L细胞和sh-talin-1 MHCC-97L细胞中差异表达的基因;使用GO富集分析芯片数据,分析talin-1调控的生物学行为;使用Cytoscape v3.4.0制作talin-1的调控网络。使用GraphPad Prism 5进行统计学分析。结果:MHCC-97L细胞及LO2细胞中talin-1均有表达,且talin-1mRNA(P1)及蛋白(P1)在MHCC-97L细胞中的表达显著高于其在LO2细胞中的表达水平。talin-1 mRNA(P1)及蛋白(P1)在MHCC-97L细胞中的表达显著高于其在sh-talin-1 MHCC-97L细胞中的表达水平。进一步通过全基因芯片分析发现在这40000个基因中,talin-1敲低后3099个基因表达发生改变,其中1924个基因表达上调,2175个基因表达下调。通过GO富集分析发现talin-1促进许多HCC进展相关的生物学行为,包括离子转运(相关基因:CAV3与KCNE3等),膜去极化(相关基因:CAV3与KCNE3等),细胞生长(相关基因:EDN1,IGFBP5,CYR61等)及细胞粘附(相关基因:MUC1,SLAMF7,WISP1等)。最后通过检索已发表文章和数据库并制作talin-1调控网络,我们发现talin-1能调控细胞周期蛋白(如Cyclin D1,BCL-2家族和p53网络),EMT相关蛋白(如E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白and vimentin)及PI3K/AKt/mTOR信号通路等的表达。结论:1、较之正常肝上皮细胞,talin-1在MHCC-97L细胞中高表达。2、talin-1可促进MHCC-97L细胞的生长和转移。3、talin-1可促进一系列肝癌发展相关生物学行为。4、talin-1通过一个复杂的调控网络参与MHCC-97L细胞的生长和转移。

关键词：肝细胞肝癌 talin-1 生长转移

沉默talin-1基因对前列腺癌PC-3细胞株上皮间质转化及侵袭能力的影响

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中华老年医学杂志 2016年第10期35卷 1115-1119页

作者：陈慧军陈少豪陈锦添李晓东蔡海薛学义魏勇郑清水许宁福建医科大学附属第一医院泌尿外科福州350005

目的探讨沉默talin-1基因对前列腺癌PC-3细胞上皮间质转化及侵袭能力的影响。方法RNAi法靶向沉默前列腺癌PC-3细胞talin-1基因，选取PC-3空白对照组，PC-3加入空质粒（plsmifl）组、基因沉默组、基因沉默后加入转化生长因子p1（TGF-β1... 详细信息

目的探讨沉默talin-1基因对前列腺癌PC-3细胞上皮间质转化及侵袭能力的影响。方法RNAi法靶向沉默前列腺癌PC-3细胞talin-1基因，选取PC-3空白对照组，PC-3加入空质粒（plsmifl）组、基因沉默组、基因沉默后加入转化生长因子p1（TGF-β1）组，PC-3加入TGF—p1组体外培养。MTT法检测各组细胞增殖能力，Transwell小室侵袭和迁移实验检测侵袭及迁移能力，Western-blot技术检测E—cadherin以及Vimentin蛋白表达情况。结果PC一3与PC-3＋plsmid两组增殖、侵袭和迁移能力以及E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平未见明显差异（P〉0．05）；沉默talin-1基因后，PC-3＋TGF-β1、PC-3、PC-3＋TGF—B1＋RNAi、PC-3＋RNAi中增殖、侵袭和迁移能力以及Vimentin蛋白表达水平依次递减，而E-cadherin蛋白表达水平依次递增（F-58．683、28．972、20．314、37．541、145．925，均P〈0．05）。结论沉默talin_1基因后前列腺癌PC-3细胞生长受抑制，并且侵袭和迁移能力下降。talin-1在前列腺癌侵袭和转移中发挥重要作用，其机制可能是通过升高Vimentin蛋白表达及降低E-cadherin蛋白表达从而诱发上皮间质表型转化而实现。

关键词：前列腺肿瘤基因沉默 talin-1 细胞转化肿瘤

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血清talin-1在肝细胞癌诊断中的作用

血清Talin-1在肝细胞癌诊断中的作用

作者：李会芬郑州大学

学位级别：硕士

研究背景原发性肝癌（Primary Liver Cancer,PLC）简称肝癌,是世界范围内发病率位居第五的恶性肿瘤,每年新增病例超过100万人,严重危害人类生命健康[1]。当下,肝癌在全球的发病率呈上升趋势,在我国肝癌年发病率居第4位,肿瘤死亡率居第2... 详细信息

研究背景原发性肝癌（Primary Liver Cancer,PLC）简称肝癌,是世界范围内发病率位居第五的恶性肿瘤,每年新增病例超过100万人,严重危害人类生命健康[1]。当下,肝癌在全球的发病率呈上升趋势,在我国肝癌年发病率居第4位,肿瘤死亡率居第2位。《全球癌症报告2014》显示,肝癌的新增病例、死亡人数均居于世界第一位,HCC的死亡率占全球的51%。病毒性肝炎、酒精、肝硬化、黄曲霉毒素、饮用水污染、遗传因素、亚硝胺类等是可能的致病原因。在我国,慢性病毒性肝炎是肝癌诸多致病因素中最主要的病因,流行病学调查发现约1/3患者有慢性肝炎病史,85%0%的肝癌与乙肝病毒相关,5%-8%的患者抗HCV抗体呈现阳性。HCC起病隐匿,早期缺乏典型症状,临床症状明显者大多已进入中晚期,而且其恶性程度高,容易复发及转移,手术切除率低,复发率高,预后差,而且早期诊断较困难,延误了最佳治疗时期。因此,早期发现、早期诊断是提高治疗效果的前提。肝癌的诊断主要根据血清学检测、影像学检查及肝穿刺,而血清学检测主要是检测甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）,AFP是目前用于诊断HCC最实在且可行的血清学标志物。然而,AFP较低的敏感性和特异性限制了其作用,这就迫切要求我们去寻找能够诊断HCC的新的生物学标志物。踝蛋白（talin）是一类大分子细胞骨架蛋白,是粘附细胞黏着斑中心的一个重要组成部分,能与多种细胞粘附分子相结合。踝蛋白是第一个被证实的能与整合素相结合的细胞骨架蛋白,参与调节细胞粘附、转移及扩散,并能促进肿瘤的发生发展。近年来相关研究表明talin-1在肿瘤的转移和和浸润过程中发挥重要作用。talin-1是踝蛋白家族的一个重要组成成分,在肿瘤的粘附和迁移中起着至关重要的作用。talin-1主要在前列腺、肾、胃、肝、脾、肺及血管平滑肌等组织中表达,研究表明其过度表达与前列腺癌的黏附、转移和浸润密切相关。近年来相关研究表明talin-1对于HCC的发展来说是一个新的分子学标志物。然而,talin-1作为血清学标志物对于HCC的诊断及预后评估尚缺乏相关的研究。目的研究原发性肝细胞癌患者血清中的踝蛋白1（talin-1）的浓度,将其与传统的生物学标志物甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP,）相比,探讨其在肝细胞癌诊断中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）分别检测120例血清样本中的talin-1,分组情况为肝细胞癌血清40例、肝硬化（Liver Cirrhosis,LC）血清40例、正常对照组血清40例。分类变量及连续变量间的差异比较采用卡方检验、t检验或单因素方差分析;三个样本组血清talin-1水平与其他变量间的比较采用非参数检验K-W或M-W检验,相关性采用Spearman等级相关分析;ROC受试者诊断特征曲线（Operating Characterristic Curve）分析talin-1与AFP在HCC诊断中的敏感性、特异性。检验水准α=0.05,Ptalin-1与AFP相比较的诊断预测模型。HCC组中talin-1的表达水平高于LC组、健康对照组（P=0.000talin-1的敏感性和特异性均明显高于AFP的敏感性、特异性。结论talin-1在HCC的诊断中可能是一个潜在的生物学标志物,相对于传统的生物学标志物AFP而言,talin-1具有更高的敏感性和特异性。

关键词：肝细胞肝癌 talin-1 甲胎蛋白肝硬化标志物

内皮祖细胞通过talin-1促进骨髓来源巨噬细胞迁移和破骨细胞分化的研究

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内皮祖细胞通过Talin-1促进骨髓来源巨噬细胞迁移和破骨细胞分化...

作者：崔一公中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

背景目的:破骨细胞介导的骨吸收在骨愈合中起重要作用。内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)通过刺激新血管形成和成骨作用促进骨修复。目前,EPCs在破骨细胞形成和功能发挥中的作用尚不明确。本研究旨在探究EPCs对骨髓来源... 详细信息

背景目的:破骨细胞介导的骨吸收在骨愈合中起重要作用。内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)通过刺激新血管形成和成骨作用促进骨修复。目前,EPCs在破骨细胞形成和功能发挥中的作用尚不明确。本研究旨在探究EPCs对骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化及功能发挥的影响。材料和方法:首先,利用体外分离培养体系,建立了稳定的、可行的体外EPC分离培养模型。同时,利用体外诱导培养体系,建立了添加RANKL和M-CSF诱导培养BMM模型。通过TRAP染色及破骨细胞特异表达基因鉴定破骨细胞的特征。通过EPC-BMM共培养体系、CCK-8、qRT-PCR、细胞迁移和管腔形成实验验证共培养的EPC与BMM体系对BMM增殖、迁移和破骨分化能力的影响。通过TRAP染色和ELISA检测EPC与BMM共培养后,培养基中TGF-β1表达量变化。使用TGF-β1抑制剂对共培养体系中BMM向破骨细胞分化能力的影响。通过siRNA干扰talin1基因、qPCR和Western blot实验检测共培养体系中缺失talin-1的BMM细胞的破骨分化能力。结果:首先,我们利用CD31,FIK-1,VEGFR2,vWF,CD34,CD133,UFA-1等细胞表面标记鉴定,确认经传代培养的细胞符合内皮祖细胞表面抗原特性。同时,利用体外诱导培养体系,获得了稳定的破骨细胞诱导模型。其次,我们发现EPC-BMM共培养体系可促进BMM增殖、迁移和破骨分化能力。接下来,进一步证实了共培养体系中,EPC分泌并提高了培养环境中TGF-β1表达量从而促进其破骨分化。同时确认了共培养体系中,EPC促进BMM中talin-1的表达进而加快破骨细胞分化进程。结论:本研究首次提出:EPC-BMM共培养环境中,EPC通过分泌TGF-β1以及提高BMM中talin-1表达,促进BMM的迁移能力和加快向破骨细胞分化进程。

关键词：内皮祖细胞骨髓巨噬细胞破骨细胞分化 TGF-β1 talin-1

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talin-1与原发性肝癌的侵袭和迁移

肝胆外科杂志 2014年第6期22卷 464-470页

作者：方鲲鹏章社民钱叶本任彦红宣城市人民医院普外二科宣城242000

目的探讨talin与不同来源人肝癌细胞侵袭及迁移的关系,进而为进一步研究talin与肝癌的侵袭和迁移的可能机制提供理论基础。方法体外培养人高转移肝癌细胞株(MHCC-97H细胞株)、人低转移肝癌细胞株(MHCC-97L细胞株)、人肝癌SMMC-7721细胞... 详细信息

目的探讨talin与不同来源人肝癌细胞侵袭及迁移的关系,进而为进一步研究talin与肝癌的侵袭和迁移的可能机制提供理论基础。方法体外培养人高转移肝癌细胞株(MHCC-97H细胞株)、人低转移肝癌细胞株(MHCC-97L细胞株)、人肝癌SMMC-7721细胞株、人肝癌Be L-7402细胞株、人肝癌He PG-2细胞株及人正常肝脏细胞株(LO2细胞株),RT-PCR技术检测各细胞株中talin-1的mRNA表达水平,Western-blot技术检测各细胞株中talin-1的蛋白表达水平,Transwell侵袭和迁移实验及细胞划痕实验检测各细胞株侵袭及迁移能力,软琼脂集落形成实验检测各细胞株增殖和克隆能力。结果五种人肝癌细胞株中talin-1的mRNA表达水平不同(Ptalin-1蛋白表达水平不同,MHCC-97L细胞株中talin-1的蛋白表达比LO2细胞株高(P17)结论 talin-1与肝癌的侵袭和迁移能力相关;高表达talin-1的原发性肝癌的侵袭和迁移能力低,恶性度低,低表达talin-1的原发性肝癌的侵袭和迁移强,恶性度高,talin-1可作为原发性肝癌恶性度的预测指标之一。

关键词：原发性肝癌 HCC talin-1 侵袭迁移

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talin-1与肝癌的研究进展

肝胆外科杂志 2016年第4期24卷 313-314页

作者：陈朋郭晗朱良钱叶本安徽医科大学第一附属医院普外科合肥230022

原发性肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤，最新研究报道其年死亡率仅次于胃癌和肺癌而居肿瘤死亡率的第三位。复发和转移是肝癌的突出特点，同时也是治疗的难点。

关键词：肝细胞癌 talin-1 整合素

机械敏感分子talin-1在动脉粥样硬化小鼠中的表达和意义

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机械敏感分子Talin-1在动脉粥样硬化小鼠中的表达和意义

Circulating proteomic biomarkers for diagnosing sporadic amyotrophic lateral sclerosis:a cross-sectional study

中国生理学会张锡钧基金第十五届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议;中国生理学会第十三届全国青年生理学工作者学术会议

作者：李明轩邓丽佳党硕李史恬阿依木古丽·艾尼聂永梅李静新疆医科大学基础医学院新疆医科大学第一临床医学院新疆医科大学第二临床医学院西南医科大学附属医院

踝蛋白在动脉粥样硬化等由机械信号高度调节的疾病中扮演着重要角色。前期课题组蛋白质组学研究发现,层流低剪切应力作用下人脐静脉血管内皮细胞(***926)蛋白质表达出现差异,其中踝蛋白-1 (talin-1)表达上调,进一步通过建立载脂蛋白E基... 详细信息

踝蛋白在动脉粥样硬化等由机械信号高度调节的疾病中扮演着重要角色。前期课题组蛋白质组学研究发现,层流低剪切应力作用下人脐静脉血管内皮细胞(***926)蛋白质表达出现差异,其中踝蛋白-1 (talin-1)表达上调,进一步通过建立载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠构建动脉粥样硬化动物模型,检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的含量并通过HE染色观察管腔与斑块结构鉴定AS模型;免疫

关键词： talin-1 动脉粥样硬化

来源： cnki会议 cnki会议评论

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Neural Regeneration Research 2024年第8期19卷 1842-1848页

作者： Lu He Qinming Zhou Chaoyang Xiu Yaping Shao Dingding Shen Huanyu Meng Weidong Le Sheng Chen Department of Neurology and Institute of Neurology Ruijin HospitalShanghai Jiao Tong University School of MedicineShanghaiChina Department of Neurology Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese MedicineChengduSichuan ProvinceChina Center for Translational Research on Neurological Diseases the First Affiliated HospitalDalian Medical UniversityDalianLiaoning ProvinceChina Co-innovation Center of Neuroregeneration Nantong UniversityNantongJiangsu ProvinceChina Institute of Neurology Sichuan Academy of Medical Sciences-Sichuan Provincial HospitalChengduSichuan ProvinceChina Department of Neurology Xinrui HospitalWuxiJiangsu ProvinceChina

Biomarke rs are required for the early detection,prognosis prediction,and monitoring of amyotrophic lateral sclerosis,a progressive *** is an unbiased and quantitative method that can be used to detect neurochemical signatures to aid in the identification of candidate biomarke *** this study,we used a label-free quantitative proteomics approach to screen for substantially differentially regulated proteins in ten patients with sporadic amyotrophic lateral scle rosis compared with five healthy *** bstantial upregulation of serum proteins related to multiple functional clusters was observed in patients with spo radic amyotrophic lateral *** biomarke rs were selected based on functionality and expression *** validate the proteomics profiles,blood samples from an additional cohort comprising 100 patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis and 100 healthy controls were subjected to enzyme-linked immunosorbent *** substantially upregulated serum proteins in patients with spora dic amyotrophic lateral sclerosis were selected,of which the cathelicidin-related antimicrobial peptide demonstrated the best discriminative ability between patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis and healthy controls(area under the curve[AUC]=0.713,P1).To further enhance diagnostic accuracy,a multi-protein combined discriminant algorithm was developed incorporating five proteins(hemoglobin beta,cathelicidin-related antimicrobial peptide,talin-1,zyxin,and translationally-controlled tumor protein).The algo rithm achieved an AUC of 0.811 and a P-value of1,resulting in 79%sensitivity and 71%specificity for the diagnosis of sporadic amyotrophic lateral scle ***,the ability of candidate biomarkers to discriminate between early-stage amyotrophic lateral sclerosis patients and controls,as well as patients with different disease severities,was examined.A two-protein panel comprising talin-1 and transl

关键词： amyotrophic lateral sclerosis cathelicidin-related antimicrobial peptide hemoglobin label-free quantitative proteomics multi-protein combined diagnostic panel serum biomarkers talin-1 translationally-controlled tumor protein zyxin

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talin1与原发性肝癌的侵袭和迁移

Talin1与原发性肝癌的侵袭和迁移

作者：方鲲鹏安徽医科大学

学位级别：硕士

目的：通过体外培养不同来源人肝癌细胞株及人正常肝脏细胞株，模拟人原发性肝癌的不同组织学亚型及人正常肝脏模型，检测talin在各细胞株中的表达差异及各细胞株侵袭和迁移能力，探讨talin与不同来源人肝癌细胞侵袭及迁移的关系，进而... 详细信息

目的：通过体外培养不同来源人肝癌细胞株及人正常肝脏细胞株，模拟人原发性肝癌的不同组织学亚型及人正常肝脏模型，检测talin在各细胞株中的表达差异及各细胞株侵袭和迁移能力，探讨talin与不同来源人肝癌细胞侵袭及迁移的关系，进而为进一步研究talin与肝癌的侵袭和迁移的可能机制提供理论基础。方法：体外培养人高转移肝癌细胞株（MHCC-97H细胞株）、人低转移肝癌细胞株（MHCC-97L细胞株）、人肝癌SMMC-7721细胞株、人肝癌BeL-7402细胞株、人肝癌HePG-2细胞株及人正常肝脏细胞株（LO2细胞株），至对数生长期，利用RT-PCR技术检测各细胞株中talin-1的mRNA表达水平，Western-blot技术检测各细胞株中talin-1的蛋白表达水平，Transwell侵袭和迁移实验及细胞划痕实验检测各细胞株侵袭及迁移能力，软琼脂集落形成实验检测各细胞株增殖和克隆能力。结果：五种人肝癌细胞株中talin-1的mRNA表达水平不同（Ptalin-1的mRNA表达比LO2细胞株高（P1），MHCC-97H细胞株和SMMC-7721细胞株中talin-1的mRNA表达比LO2细胞株低，但不具有统计学意义（P>0.05），Bel-7402细胞株和HePG-2细胞株中talin-1的mRNA表达比LO2细胞株低（P1）;五种人肝癌细胞株中talin-1蛋白表达水平和mRNA表达相似，MHCC-97L细胞株中talin-1的蛋白表达比LO2细胞株高（Ptalin-1的MHCC-97L细胞株侵袭能力较低（P=1.0000），低表达talin-1的Bel-7402细胞株和HePG-2细胞株侵袭能力强（P1细胞株介于两者之间(P=0.091和0.092，>0.05);与正常人肝脏细胞相比，五种人肝癌细胞株的迁移能力不同（P=0.0000），高表达talin-1的MHCC-97L细胞株迁移能力较低（P=0.052，>0.05），Bel-7402细胞株、SMMC-7721细胞株、 HePG-2细胞株和MHCC-97H细胞株的迁移能力较强（P17），高表达talin-1的MHCC-97L细胞株的集落数是52，集落形成率是130%（P=0.185.>0.05），低表达talin-1的Bel-7402细胞株的集落数是64，集落形成率是160%（P1细胞株介于两者之间。结论：1、不同来源的人肝癌细胞的侵袭和迁移能力不同;2、不同来源的人肝癌细胞株中的talin-1的表达水平不同;3、talin-1与肝癌的侵袭和迁移能力相关;4、高表达talin1的原发性肝癌的侵袭和迁移能力低，恶性度低，低表达talin1的原发性肝癌的侵袭和迁移强，恶性度高;5、talin1可作为原发性肝癌恶性度的预测指标之一。

关键词：原发性肝癌 HCC talin-1 侵袭迁移