Talin-1调控网络促进肝癌生长和转移的研究

作     者：陈朋 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：钱叶本

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肝细胞肝癌 Talin-1 生长 转移 

摘      要：目的:Talin-1是一种大分子骨架蛋白,其能促进肝癌的进展。然而Talin-1促进肝癌进展的机制目前尚无报道。本文通过人全基因芯片分析比较肝癌细胞和敲低Talin-1的肝癌细胞的全基因表达谱来分析Talin-1促进肝癌发生发展的潜在机制。方法:分别应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative assay,qRT-PCR)及Western blot(WB)检测肝癌细胞株MHCC-97L及正常肝上皮细胞LO2中Talin-1 mRNA及蛋白的表达水平。使用病毒转染MHCC-97L细胞制备稳定转染的Talin-1敲低MHCC-97L细胞株(sh-Talin-1 MHCC-97L)。使用细胞计数法分析比较MHCC-97L细胞和sh-Talin-1 MHCC-97L细胞的生长能力;使用细胞划痕实验和Transwell迁移实验分析比较MHCC-97L细胞和sh-Talin-1 MHCC-97L细胞的转移能力。使用人全基因芯片(40000个基因)分析MHCC-97L细胞和sh-Talin-1 MHCC-97L细胞中差异表达的基因;使用GO富集分析芯片数据,分析Talin-1调控的生物学行为;使用Cytoscape v3.4.0制作Talin-1的调控网络。使用GraphPad Prism 5进行统计学分析。结果:MHCC-97L细胞及LO2细胞中Talin-1均有表达,且Talin-1mRNA(P0.001)及蛋白(P0.001)在MHCC-97L细胞中的表达显著高于其在LO2细胞中的表达水平。Talin-1 mRNA(P0.001)及蛋白(P0.001)在MHCC-97L细胞中的表达显著高于其在sh-Talin-1 MHCC-97L细胞中的表达水平。进一步通过全基因芯片分析发现在这40000个基因中,Talin-1敲低后3099个基因表达发生改变,其中1924个基因表达上调,2175个基因表达下调。通过GO富集分析发现Talin-1促进许多HCC进展相关的生物学行为,包括离子转运(相关基因:CAV3与KCNE3等),膜去极化(相关基因:CAV3与KCNE3等),细胞生长(相关基因:EDN1,IGFBP5,CYR61等)及细胞粘附(相关基因:MUC1,SLAMF7,WISP1等)。最后通过检索已发表文章和数据库并制作Talin-1调控网络,我们发现Talin-1能调控细胞周期蛋白(如Cyclin D1,BCL-2家族和p53网络),EMT相关蛋白(如E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白and vimentin)及PI3K/AKt/mTOR信号通路等的表达。结论:1、较之正常肝上皮细胞,Talin-1在MHCC-97L细胞中高表达。2、Talin-1可促进MHCC-97L细胞的生长和转移。3、Talin-1可促进一系列肝癌发展相关生物学行为。4、Talin-1通过一个复杂的调控网络参与MHCC-97L细胞的生长和转移。