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辣椒tale转录因子的生物信息学分析

分子植物育种 2020年第5期18卷 1401-1408页

作者：张中荣吉雪花张海英李慧姬朱冉冉石河子大学农学院特色果蔬生理与种质资源利用兵团重点实验室石河子832000

tale转录因子家族广泛存在于植物中,在植物生长发育的各个阶段发挥重要作用,但是目前关于辣椒tale转录因子家族的研究鲜见报道。本研究借助于生物信息学手段,通过HMMER、SMART、MEGA5.05、GSDS、MEME、DNAMAN、SOPMA、SWISS-MODEL等软... 详细信息

tale转录因子家族广泛存在于植物中,在植物生长发育的各个阶段发挥重要作用,但是目前关于辣椒tale转录因子家族的研究鲜见报道。本研究借助于生物信息学手段,通过HMMER、SMART、MEGA5.05、GSDS、MEME、DNAMAN、SOPMA、SWISS-MODEL等软件和网站对辣椒tale转录因子类型、结构域、系谱进化、蛋白理化性质及高级结构、信号肽进行分析。分析显示20个辣椒tale转录因子家族成员均含有HOX主结构域;系统进化树分析显示,20个tale转录因子家族成员可分为KNOX和BEL两个亚族,同一亚族含有相同的保守基序以及相似的基因结构和蛋白跨膜结构;辣椒tale转录因子家族的内含子在3~6之间;α-螺旋和无规则卷曲是该家族基因主要的二级结构,三级结构中都含有螺旋-转角-螺旋结构。本研究分析了辣椒tale转录因子的生物信息学的特征,结果表明该基因家族在辣椒中具有稳定、保守的特点,这为今后研究该基因参与的生长发育过程及其作用奠定了一定的理论基础。

关键词：辣椒 tale 转录因子生物信息学

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基于人工tale技术的抗双生病毒研究

基于人工TALE技术的抗双生病毒研究

作者：陈方圆浙江大学

学位级别：硕士

双生病毒是一类具有单链环状DNA的植物病毒,已在多个国家和地区造成严重危害。但现有防治双生病毒的策略都存在一定的缺陷,成效不显著,因此,需要不断研发抗双生病毒新技术。类转录激活因子(Transcription-like effector, tale)是植物致... 详细信息

双生病毒是一类具有单链环状DNA的植物病毒,已在多个国家和地区造成严重危害。但现有防治双生病毒的策略都存在一定的缺陷,成效不显著,因此,需要不断研发抗双生病毒新技术。类转录激活因子(Transcription-like effector, tale)是植物致病菌黄单孢杆菌通过III型分泌系统注入到寄主细胞内的一类具有DNA结合活性的蛋白质,根据其识别DNA序列的特征,近年来已迅速发展成有效的基因组编辑工具。因此,本文利用人工tale蛋白进行抗双生病毒研究。以在我国发生危害最重、分布最广的单组分双生病毒——番茄黄曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)为对象,通过与双组份双生病毒甘蓝曲叶病毒(Cabbage leaf curl virus, CaLCuV)作比较,利用tale在线工具https://***/分析TYLCV和CaLCuV的潜在靶点,根据天然tale识别序列的特征、tale靶点的选择原则和双生病毒复制所需的重要元件,确定了TYLCV和CaLCuV的复制蛋白(Rep)结合位点作为人工抗双生病毒tale的靶点。利用Golden-Gate克隆法快速组装分别针对TYLCV和CaLCuV的tale质粒,并通过酶切、测序和BLAST比对,成功构建了分别针对TYLCV和CaLCuV的tale质粒pTAL1-L4和pTAL1-L5。为了在体外验证人工tale的活性,建立并优化了tale的原核表达与纯化条件。根据前期研究,设计并获得了N端缺失152个氨基酸、C端保留46个氨基酸的截短的TYLCV-tale-L4、CaLCuV-tale-L5。进一步将截短后的TYLCV-tale-L4构建到5种含有不同融合标签的表达载体上,在相同的条件下通过比较目的蛋白的表达量,确定’tale在pET-28a、pET-32a及pMBP三个表达载体上的表达效果较好。又将构建在pET-32a的tale转化入4种不同的表达菌株中,发现表达载体在BL21(DE3)、BL21(DE3)-pLus及BL21(DE3)-Tf2表达菌株内的表达效果较好。考虑到标签对融合蛋白大小的影响和实验操作步骤的简便性,选择了pET-28a表达载体以及BL21(DE3)表达菌株进行L4和L5蛋白的大量诱导和纯化,最终建立了分别针对TYLCV和CaLCuV的tales的高效原核表达体系。为了研究人工tales的抗病毒活性,以tale蛋白的靶向DNA序列为探针,将原核表达系统获得的人工PALE蛋白与标记过的探针进行凝胶阻滞实验,发现人工tale蛋白L4可以特异性结合TYLCV相关序列,人工tale蛋白L5可以特异性结合CaLCuV相关序列。进一步将具有核定位信号的tale构建到带有flag标签的pCAMBIA2300载体上,通过农杆菌浸润和Western杂交印记分析发现人工tale蛋白能够在植物中表达。将该表达载体与靶标双生病毒共浸润后,在不同时间段提取植物可溶性蛋白和基因组DNA,利用Southern杂交印记分析,发现瞬时表达的人工tale蛋白L4会影响TYLCV病毒DNA的积累,人工tale蛋白L5会影响CaLCuV病毒DNA的积累。为获得稳定表达人工tale的转基因植株,分别利用叶盘法和花浸泡法将人工tale转化本氏烟和拟南芥植株,通过Western杂交印记分析筛选成功获得3株过表达L5的TO代转基因本氏烟和7株过表达L5的TO代转基因拟南芥,为进一步验证人工tale的抗病毒活性奠定了重要基础。

关键词： TYLCV CaLCuV tale 双生病毒

tale介导的PiggyBac转座子高效转座方法

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TALE介导的PiggyBac转座子高效转座方法

基于三联体和金门克隆的快速tale模块组装技术

2015中国遗传学会大会

作者：钟伯雄叶露鹏尤征英钱秋杰张玉玉车家倩宋佳浙江大学动物科学学院

PiggyBac转座子最初从粉纹夜蛾Trichoplusia ni基因组中分离得到,是一种非病毒载体,具有承载大片段外源基因,低毒以及长效表达等优点。在过去的几十年中,piggyBac转座子已成功应用在大量的脊椎动物和非脊椎动物,是一个广谱的、强大的遗... 详细信息

PiggyBac转座子最初从粉纹夜蛾Trichoplusia ni基因组中分离得到,是一种非病毒载体,具有承载大片段外源基因,低毒以及长效表达等优点。在过去的几十年中,piggyBac转座子已成功应用在大量的脊椎动物和非脊椎动物,是一个广谱的、强大的遗传操作工具,可以制备转基因动物,用于人类基因治疗和诱导多能干细胞。但是,piggyBac转座子介导的转基因效率还是较低,以家蚕转基因实验结果为例,所有已发表的研究论文平均转基因效率仅为8.8%。针对这个问题,本研究发明创建了一种有效提高转基因效率的新方法,其核心是构建一个类转录激活因子效应蛋白(transcription activator-like effector,tale)和piggyBac转座酶(PBase)的融合蛋白(tale-PBase)用于介导piggyBac转座子的转座。实验结果证明采用tale-PBase融合蛋白可以显著地将转座效率提高到63.9%,相当于是目前转座效率平均水平的7倍。而且新方法的转基因阳性蛾区中的阳性个体数每区平均达到了18.1条,比目前家蚕转基因实验的平均水平最大提高了5.7倍。tale-PBase融合蛋白介导的转基因技术不仅提高了转基因阳性蛾区数,而且也明显提高了阳性蛾区中的阳性个体数。这是piggyBac转座子介导的转基因技术的巨大突破,为今后的转基因研究提供了很好的技术支撑。

关键词： tale piggyBac 转座子转基因

来源： cnki会议评论

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生物化工 2023年第5期9卷 50-55,85页

作者：周继曾杨洋鹿璇李双鹏邹庆剑张焜广东工业大学生物医药学院广东广州510530 五邑大学生物科技与大健康学院广东江门529020

目的:通过降低转录激活因子样效应物(Transcription Activator-Like Effector,tale)重复,建立新型简单快速的组装方法。方法:利用密码子的简并性,建立含64种组合的三联体非重复序列库。设计一系列PCR引物,其5’端带有Ⅱ型限制性内切酶... 详细信息

目的:通过降低转录激活因子样效应物(Transcription Activator-Like Effector,tale)重复,建立新型简单快速的组装方法。方法:利用密码子的简并性,建立含64种组合的三联体非重复序列库。设计一系列PCR引物,其5’端带有Ⅱ型限制性内切酶识别序列。通过PCR扩增tale三联体,Esp3I酶切获得DNA突出末端按顺序互补配对。所有三联体片段与tale骨架载体混合后,用金门(Golden Gate)克隆技术进行有序组装,构建获得具有特定DNA靶向能力的tale表达载体。结果:利用三联体,可通过一步反应实现简单快速tale的构建,正确组装的效率高。将tale与脱氨酶融合,再与CRISPR/Cas9系统组合成Ta C9-BE系统,在293T细胞中5个位点实现了高效的单碱基编辑。结论:结合tale三联体库和金门克隆技术建立了一种新的tale构建技术——Tri-GG,这种方法具有易操作、成本低、时间短的优势,为tale在基因编辑的应用提供了一个新的技术途径。

关键词： tale 三联体简并密码子金门克隆单碱基编辑技术

Circle of Life——Symbolism in The Winter's tale

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各界 2007年第6期 65-页

作者：李潇雨北京航空航天大学外语系北京100083

This essay tries to illustrate Winter's tale's symbolic meaning about human *** draws conclusion that Shakespeare's plan is to combine the natural rule of seasonal cycle with the life circle of human world.

关键词： Shakespeare The Winter's tale circle

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Pre-Handmaid’s tale

Beijing Review 2022年第28期65卷 24-24页

作者： Ma Miaomiao 不详

May we compare real life today in the United States,a long self-proclaimed beacon of democracy and individual freedom,to Margaret Atwood s dystopian novel,The Handmaid’s tale,throughout which women are attempting to ... 详细信息

关键词： freedom claimed tale

The tale of Dspereaux

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小学生作文辅导（今天写什么习作素材版） 2009年第6期 F0002-F0002页

故事的主角是一只名叫德佩罗的小老鼠，长着一对超大尺寸耳朵的德佩罗自小体弱多病，好不容易长大成鼠，跟哥哥姐姐们住在图书馆里吃书度日，

关键词：《The tale of Dspereaux》小学生作文材料作文

Action modes of transcription activator-like effectors(tales) of Xanthomonas in plants

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Journal of Integrative Agriculture 2017年第12期16卷 2736-2745页

作者： XU Zheng-yin ZOU Li-fang MA Wen-xiu CAI Lu-lu YANG Yang-yang CHEN Gong-you School of Agriculture and Biology/State Key Laboratory of Microbial Metabolism Shanghai Jiao Tong University Shanghai200240 P.R.China

Plant-pathogenic Xanthomonas infects a wide variety of host plants and causes many devastating diseases on crops. Transcription activator-like effectors（tales） are delivered by a type III secretion system（T3 SS） of Xanthomonas into plant nuclei to directly bind specific DNA sequences（TAL effector-binding elements, EBEs） on either strand of host target genes with an unique modular DNA-binding domain and to bidirectionally drive host gene transcription. The target genes in plants consist of host susceptibility（S） genes promoting disease（ETS） and resistance（R） genes triggering defense（ETI）. Here we generally summarized the discovery of tales in Xanthomonas species, their functions in bacterial pathogenicity in plants and their target genes in different host plants, and then focused on the newly revealed modes of protein action in triggering or suppressing plant defense.

关键词： Xanthomonas tale itale ETS ETI suppressor

THE LONELY HEARTS CLUB tales of 21st-Century Love in China

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城市漫步（GBA版） 2016年第2期 42-49页

作者： Karotine Man 不详

When Yi Tingying and her first husband had their second son 26 years ago,they felt *** couple may have been forced to pay a fine for breacliiiig the one-child policy;but at least tliey didn't need to a second *** more... 详细信息

关键词： tale ill she