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Cross-linked self-assembling peptide scaffolds

Nano Research 2018年第1期11卷 586-602页

作者： Raffaele Pugliese Amanda Marchini Gloria Anna Ada Saracino1 Ronald N. Zuckermann3, Fabrizio Gelain IRCCS Casa Sollievo della Sofferenza Opera di San Pio da Pietralcina Viale Capuccini I San Giovanni Rotondo Foggia 71013 Italy Center for Nanomedicine and Tissue Engineering (CNTE) A. O. Ospedale Niguarda Cd Granda Piazza dell' Ospedale Maggiore 3 Milan 20162 Italy The Molecular Foundry Lawrence Berkeley National Laboratory 1 Cyclotron Road Berkeley California 94720 USA

Self-assembling peptides （SAPs） are synthetic bioinspired biomaterials that can be feasibly multi-functionalized for cell transplantation and/or drug delivery therapies. Despite their superior biocompatibility and ease of scaling-up for production, they are unfortunately hampered by weak mechanical properties due to transient non-covalent interactions among and within the self-assembled peptide chains, thus limiting their potential applications as fillers, hemostat solutions, and fragile scaffolds for soft tissues. Here, we have developed and characterized a cross-linking strategy that increases both the stiffness and the tailorability of SAP hydrogels, enabling the preparation of transparent flexible threads, discs, channels, and hemispherical constructs. Empirical and computational results, in close agreement with each other, confirmed that the cross-linking reaction does not affect the previously self-assembled secondary structures. In vitro tests also provided a first hint of satisfactory biocompatibility by favoring viability and differentiation of human neural stem cells. This work could bring self-assembling peptide technology to many applications that have been precluded so far, especially in regenerative medicine.

关键词： self-assembling peptide co-assembling peptide cross-linking sulfo-smcc supramolecularself-assembly

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西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物的制备及鉴定

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天津医药 2014年第12期42卷 1153-1155页

作者：刘云龙周洁王光文聂振广西医科大学第一附属医院泌尿外科 530021

目的制备西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其酶活性与抗体活性。方法采用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(sulfo-smcc)将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶进行共价交联。采用非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PA... 详细信息

目的制备西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其酶活性与抗体活性。方法采用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(sulfo-smcc)将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶进行共价交联。采用非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、比色法、间接免疫荧光法对偶联物进行鉴定并检测β-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗的活性。结果在电泳图上可分别见到β葡萄糖苷酶、西妥昔单抗、西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物的清晰条带。比色法测定结果显示,西妥昔单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物的酶活性低于β-葡萄糖苷酶(U/L:672.97±46.19 vs869.50±57.28,t=5.972,Psulfo-smcc可成功将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶偶联,且偶联物仍能保持良好的酶活性与抗体活性。

关键词：西妥昔单抗 β-葡萄糖苷酶偶联物膀胱肿瘤癌 sulfo-smcc

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穿膜肽-β-葡萄糖苷酶—西妥昔单抗偶联物的制备与鉴定

穿膜肽-β-葡萄糖苷酶—西妥昔单抗偶联物的制备与鉴定

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作者：刘云龙广西医科大学

学位级别：硕士

目的探讨应用异型双功能蛋白偶联剂衍生物硫代琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧化物(sulfo-smcc)制备穿膜肽-p-葡萄糖苷酶-西妥昔单抗偶联物的可行性,同时检测偶联物中的穿膜肽活性、p-葡萄糖苷酶活性及西妥昔单抗活性,为... 详细信息

目的探讨应用异型双功能蛋白偶联剂衍生物硫代琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧化物(sulfo-smcc)制备穿膜肽-p-葡萄糖苷酶-西妥昔单抗偶联物的可行性,同时检测偶联物中的穿膜肽活性、p-葡萄糖苷酶活性及西妥昔单抗活性,为下一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础。方法1、采用sulfo-smcc将氨基水溶性量子点与巯基化穿膜肽进行共价交联。将偶联后的穿膜肽-量子点和人膀胱癌EJ细胞共培养,检测穿膜肽的活性。2、应用硫代琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧化物(sulfo-smcc)将西妥昔单抗、p-葡萄糖苷酶进行偶联。采用SDS-PAGE、比色法、NHS-Alexa Fluor 488标记偶联物进行鉴定二联偶联物并检测β-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗的活性。3、采用同上方法将穿膜肽、p-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗进行共价偶联,制备穿膜肽-β-葡萄糖苷酶-西妥昔单抗三联偶联物。采用非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定三联偶联物的连接方式和成份;比色法鉴定三联偶联物酶活性;采用NHS-Alexa Fluor 488对偶联物进行荧光标记,然后将穿膜肽-β-葡萄糖苷酶-西妥昔单抗三联物和EJ细胞共培养,检测三联偶联物中的穿膜肽活性及抗体活性。结果1、穿膜肽活性鉴定结果：将穿膜肽-量子点与EJ细胞分别共培养1小时和2小时后,在Olympus BX51正置荧光显微镜下观察到随着时间的延长,人膀胱癌EJ细胞内的红色荧光越来越明显,而对照组未见荧光,说明穿膜肽具有良好的穿膜活性。2、西妥昔单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物的鉴定结果：SDS-PAGE结果示在3泳道高分子端可见清晰的条带,而在β-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗相对应位置未见条带。比色法结果示,等浓度二联物的酶活性低于β-葡萄糖苷酶的酶活性(U/L：669.56±39.23 vs 870.60±61.34,t=7.863,Psulfo-smcc可以将穿膜肽、β-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗成功的偶联在一起,同时三联物仍能保持良好的穿膜肽活性、酶活性与抗体活性。该体系的建立为进一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础,为抗体介导的酶前体药物疗法(ADEPT)的开发提供了新的思路,并且对浸润性肿瘤的治疗具有重要意义。

关键词：穿膜肽量子点西妥昔单抗 β-葡萄糖苷酶偶联物 sulfo-smcc

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