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肠球菌菌种鉴定方法的探索

疾病监测 2021年第5期36卷 462-467页

作者：白一波徐明超焦一帆周娟张思慧杨晶刘丽云徐建国山西医科大学公共卫生学院山西太原030001 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的选择一种能将肠球菌属鉴定到种水平的快速准确的方法。方法分别使用生化鉴定方法、16S rRNA基因测序技术、rpoa基因测序技术、基因组杂交技术(DNA-DNA hybridization,DDH)和平均核苷酸相似度(Average nucleotide identity,ANI)对12... 详细信息

目的选择一种能将肠球菌属鉴定到种水平的快速准确的方法。方法分别使用生化鉴定方法、16S rRNA基因测序技术、rpoa基因测序技术、基因组杂交技术(DNA-DNA hybridization,DDH)和平均核苷酸相似度(Average nucleotide identity,ANI)对12株肠球菌进行种水平鉴定,并比较生化鉴定方法、16S rRNA基因测序技术和rpoa基因测序技术和DDH/ANI结果的一致性。结果经过DDH和ANI鉴定,分离自高原野生岩羊粪便的12株肠球菌中有5株屎肠球菌,4株海氏肠球菌,1株蒙氏肠球菌,1株鹑鸡肠球菌和1株疑似肠球菌属内新种,rpoa基因序列比对结果与DDH/ANI结果高度一致,生化鉴定和16S rRNA基因测序技术与DDH/ANI结果不完全相符。结论rpoa基因序列比对可以方便快捷准确的将肠球菌鉴定到种水平。

关键词：肠球菌 rpoa基因 16S rRNA基因生化鉴定基因组杂交技术平均核苷酸相似度

AgrB信号分子对B型产气荚膜梭菌生物被膜形成的影响

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中国病原生物学杂志 2021年第10期16卷 1148-1152页

作者：陈晓慧贺曦徐淑琴贺晓龙冶贵生青海大学农牧学院动物医学系青海西宁810016

目的探讨QS系统AgrB分子对B型产气荚膜梭菌生物被膜(biofilm, BF)形成过程中htrA、rpoa基因表达水平的影响。方法体外培养B型产气荚膜梭菌12、24、36、48、56及64 h时期的BF,提取其总RNA,通过实时Real-Time PCR检测不同时间段B型产气荚... 详细信息

目的探讨QS系统AgrB分子对B型产气荚膜梭菌生物被膜(biofilm, BF)形成过程中htrA、rpoa基因表达水平的影响。方法体外培养B型产气荚膜梭菌12、24、36、48、56及64 h时期的BF,提取其总RNA,通过实时Real-Time PCR检测不同时间段B型产气荚膜梭菌BF agrB基因对BF形成相关基因htrA、rpoa表达的调节作用。结果 B型产气荚膜梭菌在24、36、48、56及64 h 5个时间段中,QS系统agrB基因和BF rpoa、htrA基因相对表达量均呈现出先增高后降低的趋势,且在36 h达到峰值。在峰值前期,agrB、rpoa、htrA基因的表达量较高,48 h后表达量迅速下降,提示B型产气荚膜梭菌BF形成相关基因rpoa、htrA的表达受到QS系统agrB基因表达的影响。结论 AgrB信号分子对rpoa、htrA基因调控表达趋势在产气荚膜梭菌BF形成过程呈现关联性。

关键词： B型产气荚膜梭菌 BF AgrB信号分子 htrA基因 rpoa基因 Real-Time PCR

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生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定

中国兽医杂志 2024年第7期60卷 58-64页

作者：史超张伟刘素平寇茜茜刘荣慧于海涛霍明凯王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室新疆石河子832003

为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoa)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和... 详细信息

为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoa)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和小鼠致病性试验确定分离菌株的药物敏感性和致病性。结果显示,从生鲜乳中分离到1株细菌,其培养特性和生化特性与肠球菌相似,16S rRNA基因测序结果显示其为肠球菌,rpoa基因测序结果显示其分子特征符合海氏肠球菌;药敏试验结果显示,分离海氏肠球菌对氨基糖苷类、林可胺类、磺胺类和多肽类药物表现一定的耐药性,而对四环素类、β-内酰胺类和部分喹诺酮类药物具有不同程度的敏感性;小鼠致病性试验结果显示,该菌株具有一定的致病性。本试验基于生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定、耐药性和致病性分析,初步说明该牛场乳品中存在肠球菌污染的风险,且分离菌株具有一定耐药性和致病性,因此需在日常生产加工环节加强监测。

关键词：生鲜乳海氏肠球菌 rpoa基因耐药性致病性

绿色魏斯氏菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法的建立

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肉类研究 2018年第11期32卷 41-46页

作者：张艺鸽姜晓冰于涛孙丽滢河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 新乡学院生命科学技术学院河南新乡453003 佛山市海天调味食品股份有限公司广东佛山528000

以rpoa基因为靶基因,建立绿色魏斯氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测方法。针对rpoa基因设计特异性引物,建立绿色魏斯氏菌实时荧光定量PCR检测体系,通过特异性、灵敏度和重复性实验... 详细信息

以rpoa基因为靶基因,建立绿色魏斯氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测方法。针对rpoa基因设计特异性引物,建立绿色魏斯氏菌实时荧光定量PCR检测体系,通过特异性、灵敏度和重复性实验评价体系的检测效果,同时与常规PCR方法进行比较。结果表明:实时荧光定量PCR方法能够特异性检出绿色魏斯氏菌,对基因组DNA的检测灵敏度达到2.667×10^(-3) pg/μL,对纯培养物和模拟污染牛肉样品直接检测的灵敏度分别为30 CFU/mL和0.8 CFU/g;与常规PCR相比,实时荧光定量PCR检测的灵敏度是其1 000倍;不同浓度样品独立重复实验循环阈值的标准差均小于1,变异系数在0.02%～1.28%之间。本研究所建立的绿色魏斯氏菌实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能够进行准确的定量检测,是快速检测绿色魏斯氏菌的有效手段。

关键词：绿色魏斯氏菌实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ rpoa基因

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鲨鱼弧菌LAMP检测方法的建立

广东农业科学 2012年第3期39卷 146-149,F0003页

作者：刘金叶冯娟刘广峰苏友禄徐力文郭志勋王云新中国水产科学研究院南海水产研究所/农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 广东省水生动物疫病预防控制中心广东广州510300

采用环介导等温扩增技术(LAMP)成功构建了一种鲨鱼弧菌的检测方法。根据鲨鱼弧菌的rpoa基因序列设计4条引物(内引物F3和B3,外引物FIP和BIP),并对LAMP扩增反应的各物质浓度和反应条件进行优化,确定最佳反应温度为65°C,最佳反应时间为55 ... 详细信息

采用环介导等温扩增技术(LAMP)成功构建了一种鲨鱼弧菌的检测方法。根据鲨鱼弧菌的rpoa基因序列设计4条引物(内引物F3和B3,外引物FIP和BIP),并对LAMP扩增反应的各物质浓度和反应条件进行优化,确定最佳反应温度为65°C,最佳反应时间为55 min。该法对鲨鱼弧菌纯菌培养物的检测浓度约为2.4×102CFU/mL,结果比PCR法具有相似或更高的灵敏度,而且操作简单,反应后体系变浑浊,肉眼可辨;加入SRYB Gold荧光染料,阳性反应为绿色,阴性对照为浅橘色,更便于观察,有望发展成为快速检测鲨鱼弧菌的一种有效方法。

关键词：鲨鱼弧菌环介导等温扩增技术 rpoa基因