绿色魏斯氏菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法的建立

作     者：张艺鸽 姜晓冰 于涛 孙丽滢 ZHANG Yige;JIANG Xiaobing;YU Tao;SUN Liying

作者机构：河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 新乡学院生命科学技术学院河南新乡453003 佛山市海天调味食品股份有限公司广东佛山528000 

出 版 物：《肉类研究》 (Meat Research)

年 卷 期：2018年第32卷第11期

页      面：41-46页

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083203[工学-农产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(5201049120105) 

主　　题：绿色魏斯氏菌 实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ rpoA基因 

摘      要：以rpoA基因为靶基因,建立绿色魏斯氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测方法。针对rpoA基因设计特异性引物,建立绿色魏斯氏菌实时荧光定量PCR检测体系,通过特异性、灵敏度和重复性实验评价体系的检测效果,同时与常规PCR方法进行比较。结果表明:实时荧光定量PCR方法能够特异性检出绿色魏斯氏菌,对基因组DNA的检测灵敏度达到2.667×10^(-3) pg/μL,对纯培养物和模拟污染牛肉样品直接检测的灵敏度分别为30 CFU/mL和0.8 CFU/g;与常规PCR相比,实时荧光定量PCR检测的灵敏度是其1 000倍;不同浓度样品独立重复实验循环阈值的标准差均小于1,变异系数在0.02%～1.28%之间。本研究所建立的绿色魏斯氏菌实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能够进行准确的定量检测,是快速检测绿色魏斯氏菌的有效手段。