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recql4 regulates DNA damage response and redox homeostasis in esophageal cancer

Cancer Biology & Medicine 2021年第1期18卷 120-138页

作者： Guosheng Lyu Peng Su Xiaohe Hao Shiming Chen Shuai Ren Zixiao Zhao Yaoqin Gong Qiao Liu Changshun Shao Key Laboratory of Experimental Teratology Ministry of EducationDepartment of Molecular Medicine and GeneticsSchool of Basic Medical SciencesShandong UniversityJinan 250012China Department of Pathology Qilu Hospital of Shandong UniversityJinan 250012China State Key Laboratory of Radiation Medicine and Protection Institutes for Translational MedicineSoochow UniversitySuzhou 215123China

Objective:recql4(a member of the RECQ helicase family)upregulation has been reported to be associated with tumor progression in several ***,whether recql4 sustains esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)has not been *** this study,we determined the functional role for recql4 in ESCC ***:recql4 expression in clinical samples of ESCC was examined by *** proliferation,cellular senescence,the epithelial-mesenchymal transition(EMT),DNA damage,and reactive oxygen species in ESCC cell lines with recql4 depletion or overexpression were *** levels of proteins involved in the DNA damage response(DDR),cell cycle progression,survival,and the EMT were determined by Western blot ***:recql4 was highly expressed in tumor tissues when compared to adjacent non-tumor tissues in ESCC(P48).recql4 was positively associated with proliferation and migration in ESCC *** of recql4 also inhibited growth of tumor xenografts in ***4 depletion induced G0/G1 phase arrest and cellular ***,the levels of DNA damage and reactive oxygen species were increased when recql4 was ***,as measured by the activation of ATM,ATR,CHK1,and CHK2,was ***4 was also shown to promote the activation of AKT,ERK,and NF-k B in ESCC ***:The results indicated that recql4 was highly expressed in ESCC and played critical roles in the regulation of DDR,redox homeostasis,and cell survival.

关键词： ESCC recql4 senescence redox DNA damage response

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recql4与肿瘤发生的关系

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河南师范大学学报（自然科学版） 2014年第5期42卷 116-124页

作者：梁乐唐超智赵哲王文晟河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

recql4属于人类RECQ解旋酶家族,广泛参与DNA的复制和损伤修复.早期研究证实,recql4突变会导致RTS,BGS和RAPA 3种综合症,其中RTS和BGS患者都有很高的骨肉瘤和淋巴瘤发生倾向,此外,recql4还可通过维持线粒体和端粒的基因稳定避免多种肿瘤... 详细信息

recql4属于人类RECQ解旋酶家族,广泛参与DNA的复制和损伤修复.早期研究证实,recql4突变会导致RTS,BGS和RAPA 3种综合症,其中RTS和BGS患者都有很高的骨肉瘤和淋巴瘤发生倾向,此外,recql4还可通过维持线粒体和端粒的基因稳定避免多种肿瘤发生,recql4也被认为与血液恶性肿瘤爆发相关.最新实验结果提示,recql4缺陷的大部分骨肉瘤患者9号外显子缺失,recql4维持线粒体稳定的重要结合蛋白是p53,recql4是与生存素结合在一起避免乳腺癌细胞凋亡的,recql4过量表达通过增强MCM复制起始复合物活性而促进宫颈癌细胞等的增殖.但目前有关recql4与肿瘤关系的机制仍有许多不明之处,需进一步深入探讨.本文对recql4与肿瘤发生的关系作一综述,以期为癌症研究和治疗提供思路.

关键词： recql4 肿瘤 DNA复制 DNA损伤修复线粒体端粒

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recql4在维持基因组稳定中的作用

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湖北农业科学 2014年第4期53卷 745-749页

作者：唐超智杨钧棠王文晟河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

recql4属于人类RECQ解旋酶家族,其变异已引起至少3种基因组不稳定性疾病。除了同家族其他成员一样参与DNA损伤修复外,recql4独特的结构还使其参与了复制的起始。最新研究结果表明,recql4可维持端粒和线粒体DNA的稳定,提示recql4的作用... 详细信息

recql4属于人类RECQ解旋酶家族,其变异已引起至少3种基因组不稳定性疾病。除了同家族其他成员一样参与DNA损伤修复外,recql4独特的结构还使其参与了复制的起始。最新研究结果表明,recql4可维持端粒和线粒体DNA的稳定,提示recql4的作用可能更为广泛。对recql4维持基因组稳定的不同途径及其机制进行了归纳,以期为人们探索recql4相关性疾病的发病机理和治疗方案提供思路。

关键词： recql4 复制修复端粒线粒体

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recql4在U2OS细胞中调控细胞自噬和凋亡的作用研究

RecQL4在U2OS细胞中调控细胞自噬和凋亡的作用研究

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作者：段仰苗中国科学院北京基因组研究所

学位级别：硕士

自噬是细胞在受到外界压力,如饥饿,缺氧,以及过氧化物等刺激下所发生的大分子物质或细胞器降解成小分子供细胞重新利用的生物学过程,它可防止突变在体内过度积累,维持基因组的稳定和细胞稳态,从而使机体获得生存的一种自我保护。自噬过... 详细信息

自噬是细胞在受到外界压力,如饥饿,缺氧,以及过氧化物等刺激下所发生的大分子物质或细胞器降解成小分子供细胞重新利用的生物学过程,它可防止突变在体内过度积累,维持基因组的稳定和细胞稳态,从而使机体获得生存的一种自我保护。自噬过程是通过一组特定蛋白发生泛素化或磷酸化,通过蛋白相互作用进而形成自噬体,然后与溶酶体融合,最终被其中的蛋白水解酶降解。线粒体自噬是一种通过自噬机制选择性清除受损伤(包括线粒体DNA损伤)或非必需线粒体的过程,它是线粒体质量控制的重要机制。recql4,作为DNA解旋酶家族一员,参与多种的DNA修复途径和维持线粒体DNA稳态。本实验室的前期研究发现recql4除了参与细胞核内DNA损伤修复外,也参与维持线粒体DNA稳定性。本研究重点关注recql4缺失突变对细胞自噬(尤其是线粒体自噬)和凋亡的影响。我们发现在recql4敲除的U2OS细胞中,自噬标记蛋白LC3表达水平升高,且在共聚焦显微镜下观察到外源导入GFP-LC3形成的绿色荧光聚集点数量明显增加,据此推测recql4敲除可导致细胞自噬水平显著升高。然而,采用线粒体标记mitotracker检测没有发现recql4敲除增加线粒体自噬;在进一步的试验中,用线粒体自噬诱导剂鱼藤酮处理细胞时,没有发现在recql4敲除的U20S细胞中线粒体数量以及LC3表达量的明显变化,而在野生细胞中线粒体数量减少且LC3表达量增加,说明recql4是有效诱导线粒体自噬的必要条件。用鱼藤酮处理细胞后,recql4缺失突变的U20S细胞比正常细胞更容易发生凋亡。以上结果提示,recql4对于线粒体自噬的诱导是必须的;recql4的敲除可能阻断了线粒体自噬,使得细胞更容易趋向凋亡。由于敲除recql4后总的细胞自噬水平升高,而线粒体自噬水平没有同时增加,推测recql4只介入线粒体自噬而不参与别的细胞自噬或以相反的方式参与别的细胞自噬。另外我们在recql4敲低细胞中,做了相关实验,得到的实验结果同样支持我们以上得出的结论。

关键词： recql4 自噬线粒体自噬细胞凋亡鱼藤酮

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De novo myelodysplastic syndrome in a Rothmund-Thomson Syndrome patient with novel pathogenic recql4 variants

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Blood Science 2023年第2期5卷 125-130页

作者： Chuanhe Jiang Hao Zhang Chuxian Zhao Luxiang Wang Xiaoxia Hu Zengkai Pan National Research Center for Translational Medicine State Key Laboratory of Medical GenomicsShanghai Institute of HematologyRuijin HospitalShanghai Jiao Tong University School of MedicineShanghai 200025China Shanghai Zhaxin Traditional Chinese&Western Medicine Hospital Shanghai 200435China Collaborative Innovation Center of Hematology Shanghai Jiao Tong University School of MedicineShanghai 200025China

Rothmund-Thomson syndrome(RTS)is a rare autosomal-recessive disorder with clinical features consisting of rash,poikiloderma,sparse hair,short stature,juvenile cataracts,skeletal abnormalities,and cancer *** studies involving detection of pathogenic recql4 variants provide the diagnostic *** was found in two-thirds recql4-mutated RTS patients,while hematological malignancies were rarely *** variant diversity of recql4 gene has not been fully identified and mutations associated with hematologic malignancies are not well *** this study,we presented a pedigree of RTS from a Chinese family,among which the proband was diagnosed with de novo myelodysplastic syndrome(MDS).Comprehensive medical examination and chromosome karyotyping were performed on the *** exome sequencing(WES)was performed on the proband,his sister and his *** familial cosegregation of sequence variants derived from WES was conducted by polymerase chain reaction–based Sanger *** of candidate recql4 mutants were done by in silico analysis to assess *** novel recql4 germline variants,including c.T274C,c.G3014A,and c.G801C,were identified by WES and validated by Sanger *** of conformation indicated that the structural stability of human recql4 protein was largely affected with these *** co-occurring U2AF1 p.S34F and TP53 p.Y220C mutations might contribute to the development of *** study expands the mutational spectrum of recql4 and provides underlying molecular mechanism for the development of MDS in RTS patients.

关键词： Myelodysplastic Syndrome Pedigree recql4 Rothmund-Thomson Syndrome Whole Exome Sequencing

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recql4基因在肝细胞癌中的表达及其与患者临床病理特征的关联性

RECQL4基因在肝细胞癌中的表达及其与患者临床病理特征的关联性

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作者：李君桂林医学院

学位级别：硕士

目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的形成是一个十分复杂的过程,受到多基因、多因素的影响。在前期的cDNA表达谱芯片分析中,我们发现recql4基因在HCC组织中的表达上调。recql4是人类DNA解旋酶的一种,在维持基因组的稳定过程... 详细信息

目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的形成是一个十分复杂的过程,受到多基因、多因素的影响。在前期的cDNA表达谱芯片分析中,我们发现recql4基因在HCC组织中的表达上调。recql4是人类DNA解旋酶的一种,在维持基因组的稳定过程中具有重要的作用。基因组的不稳定是致癌的一个重要原因。然而,到目前为止recql4在HCC发生发展过程中的作用仍然是未知的。本文旨在研究recql4在HCC中的表达,并进一步分析其在HCC患者中潜在的临床意义。方法:本项研究使用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测recql4 mRNA在205对HCC组织和相应的癌旁正常肝组织(adjacent normal liver tissues,ANLT)样本中的表达。随后用卡方检验分析recql4基因表达水平与HCC患者的临床病理特征的关系。通过Kaplan–Meier方法,单变量分析,以及Cox多变量比例风险回归模型计算recql4对HCC患者的无瘤生存(disease-free survival,DFS)和总生存(overall survival,OS)的影响。结果:qRT-PCR的实验结果表明recql4mRNA在HCC组织中的表达(1.10±0.07)显著高于正常的癌旁肝组织(0.33±0.04)(Precql4 mRNA的表达水平和血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的水平(>100 ng/ml)(χ2=4.246,P=0.039),肿瘤的大小(>6 cm)(χ2=7.852,P=0.005),以及巴塞罗纳临床肝癌(Barcelona Clinic Liver Cancer,BCLC)的分期(χ2=6.293,P=0.012)呈正相关关系。在这205例HCC患者中,仅AFP水平升高有34例(16.59%),仅recql4升高有45例(21.95%),而AFP水平和recql4同时升高则有96例(46.83%)。Kaplan-Meier生存分析表明高表达recql4 mRNA的HCC患者术后的DFS时间[34.23个月;95%置信区间(confidence interval,CI),28.42-40.03]和OS时间(38.37个月;95%CI,32.84-43.90)显著低于那些低表达患者的DFS时间(50.73个月,95%CI,41.88-59.58)和OS时间(56.31个月,95%CI,48.33-64.30)(P=0.002和P=0.001)。而且,recql4 mRNA高表达的HCC患者的1-,2-,3-,5-年的总生存率(67.07%、48.15%、39.05%、32.82%)也显著低于低表达的患者(89.50%,70.08%,63.32%,57.88%)。除了高表达的recql4基因之外,肿瘤大小>6 cm,多发肿瘤,BCLC分期的B-C期以及转移均与HCC患者术后较差的DFS和OS相关,而术后肿瘤的复发则与较差的OS相关(所有的Precql4的高表达是HCC患者的DFS[风险比(hazard ratio,HR),1.635;95%CI,1.062-2.515;P=0.025]和OS(HR,1.618;95%CI,1.050-2.493;P=0.029)的重要的独立预测因子。结论:recql4基因在HCC组织中的表达水平明显上调,它有可能作为HCC患者早期诊断和预测预后的有效的新的生物标志物。

关键词：肝细胞癌 recql4 预后诊断生物标志物

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靶向recql4基因的shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定

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广东医学 2015年第5期36卷 685-687页

作者：陈泓磊吴晓滨王华摄林义佳彭俊生中山大学附属第六医院食管胃肠外科广州510655

目的构建介导recql4 RNA干扰的shRNA慢病毒表达载体。方法将人工合成的recql4 siRNA经PCR扩增后与线化的p LKO.1慢病毒表达载体连接,经测序鉴定后,将p LKO.1-recql4-shRNA与慢病毒包装质粒共转染入HEK-293T细胞,产生慢病毒颗粒并测定病... 详细信息

目的构建介导recql4 RNA干扰的shRNA慢病毒表达载体。方法将人工合成的recql4 siRNA经PCR扩增后与线化的p LKO.1慢病毒表达载体连接,经测序鉴定后,将p LKO.1-recql4-shRNA与慢病毒包装质粒共转染入HEK-293T细胞,产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞RKO后,实时定量PCR和Western blot检测recql4 mRNA和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的RKO细胞为未感染组,感染p LKO.1-scramble-shRNA慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建p LKO.1-recql4-shRNA慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107IU/m L。感染RKO细胞后,recql4的mRNA和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向recql4基因的shRNA慢病毒表达载体,可有效抑制人结肠癌RKO细胞recql4 mRNA和蛋白的表达。

关键词：慢病毒表达载体 recql4 结肠癌

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解旋酶recql4出核机制的研究及分离纯化线粒体的新方法的建立

解旋酶RecQL4出核机制的研究及分离纯化线粒体的新方法的建立

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作者：彭钊中国科学院北京基因组研究所

学位级别：硕士

RecQ解旋酶家族中的一员—recql4,因其缺失易导致肿瘤、个体发育不全、早衰等多种症状而为研究人员所重视。recql4缺失直接与三种罕见的常染色体隐性疾病的发生相关联,提示了recql4与同蛋白家族相比,其结构和功能都更为复杂。本研究揭... 详细信息

RecQ解旋酶家族中的一员—recql4,因其缺失易导致肿瘤、个体发育不全、早衰等多种症状而为研究人员所重视。recql4缺失直接与三种罕见的常染色体隐性疾病的发生相关联,提示了recql4与同蛋白家族相比,其结构和功能都更为复杂。本研究揭示了这种复杂性有可能与recql4在亚细胞中的定位相关,并探讨和研究了可能的recql4出核机制：泛素化介导及出核信号介导的途径。此外,本研究亦从技术层面上尝试建立行之有效的新方法来为相关的研究打下基础。其中之一为一项新的利用抗原标记蛋白分离并纯化线粒体的方法。此方法利用线粒体外膜上的转位酶复合体TOM复合体经过改造加上Flag尾的亚基蛋白TOM20、TOM22作为抗原,直接使用Flag的抗体来从组织细胞匀浆中得到高纯度的线粒体。

关键词： recql4 亚细胞定位线粒体

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肝癌患者血浆recql4变化的研究

肝癌患者血浆RECQL4变化的研究

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作者：周慧琴郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的肝细胞癌英文名称Hepatocellular Carcinoma缩写HCC,我们通常简称肝癌。肝癌是现在世界上致死率最高的恶性肿瘤之一,并且在全世界范围内的发病率有逐年升高的趋势。我国死于肝癌者占全球肝癌死亡人数的53%。它给人们造成了极... 详细信息

背景与目的肝细胞癌英文名称Hepatocellular Carcinoma缩写HCC,我们通常简称肝癌。肝癌是现在世界上致死率最高的恶性肿瘤之一,并且在全世界范围内的发病率有逐年升高的趋势。我国死于肝癌者占全球肝癌死亡人数的53%。它给人们造成了极大的痛苦和困扰,当看到患者因为诊断延误,肝癌晚期的时候我们感到非常的痛心,非常的无奈,也多了份作为医护人员的惋惜。当前我们对晚期肝癌的治疗还不够理想,因此早期诊断对肝癌患者的预后至关重要。AFP是检查肝癌常见的主要方法,当AFP出现异常增高时,就要考虑肝癌或其他严重肝病的可能。临床发现有60%5%的肝癌患者血清甲胎蛋白是升高的,这些患者的血清甲胎蛋白平均值在490 ng/ml以上,但是也有15%5%的肝癌患者血清甲胎蛋白正常。这种差异性能不能达到我们的理想效果呢,事实上并非我们想的那么好,因为除肝癌外许多疾病都可能引起血清甲胎蛋白增高,现在已知的疾病有胆管细胞癌,卵黄囊肿瘤,肝硬化,原发性胃癌,病毒性肝炎,宫内死胎,胎儿严重神经管畸形,新生儿肝炎等,甚至是正常人也可能出现甲胎蛋白升高。所以单单依靠检测患者血清甲胎蛋白作为依据来判断患者是否肝癌还不够严谨,从而筛选新的肝癌标记物受到了高度关注。我们综合现代医学研究的成果,和肿瘤有很大关系的RecQ解旋酶家族进入了我们的研究视线。recql4(人解螺旋酶蛋白,DNA helicase Q1-like)是RecQ解旋酶家族其中之一,在维持基因组稳定性方面起着非常重要的作用。recql4广泛的参与DNA的复制和损伤的修复,recql4的缺失可导致个体发育不全,也能导致早衰,肿瘤的几率更高。许多实验研究中发现它在肝癌时增高,这引起了医护人员的高度关注,但是相关的临床研究较少,本研究旨在探讨recql4在肝癌诊断中的价值。材料和方法1材料采集50例肝癌,40例肝硬化,20例食管癌,20例乳腺癌,20例胃癌及20例健康志愿者的外周静脉血5ml于EDTA-抗凝管内,在常温下以3500r/min离心15分钟,取上清进行分装,并放置在-80℃下冷冻保存待用。并详细记录肝癌患者完整的临床资料,包括性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤TNM分期等。病人均为我院消化科和肝胆外科住院患者,且已签署知情同意书,经医院伦理委员会批准。2方法应用recql4 ELISA试剂盒及AFP ELISA试剂盒(Novatein Bio公司),按说明书操作。用96孔酶标仪于波长450nm测OD值,用ELISA Calc采用Logistic曲线拟合(四参数)法计算标准曲线回归方程,分别计算出蛋白质浓度。按美国Invitrogen公司提供的Trizol试剂说明书操作,提取血浆总RNA。放在严格的储存环境下进行储存,以备后用。用紫外分光光度计测定所提取的DNA的A260/A280,然后计算总RNA的纯度。引物设计由上海生物工程有限公司设计并合成吗,上海生物工程有限公司提供GAPDH作为内参基因,按大连宝生物公司提供的说明书进行操作,先后进行去除基因组DNA反应和逆转录反应。荧光定量PCR按照大连宝生物公司提供的SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂盒说明书进行操作。用美国产ABI 7300扩增仪进行PCR反应,反应条件为95℃预变性30s,进入PCR反应:95℃5S,60℃31S,共40个循环。记录各样本Ct值,每个样本测三次取平均值,。结果1.小肝癌患者中,recql4mRNA阳性率为77.78%,,显著高于肝硬化,乳腺癌,胃癌,食管癌及健康志愿者中recql4mRNA的表达(Precql4的蛋白质浓度平均水平为20.18ng/m L,仍明显高于肝硬化(10.24 ng/m L)及健康志愿者(2.17 ng/m L)的平均水平(Precql4蛋白质水平升高与肿瘤TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、血管浸润、淋巴结转移正相关(Precql4 mRNA阳性表达率与其蛋白质浓度呈正相关(r=0.481,χ2=13.241,P4 mRNA与AFP的相关性。recql4蛋白质在肝癌患者血浆中的平均值为22.43ng/m L,显著高于肝硬化患者10.24 ng/m L及健康志愿者2.17ng/m L(Precql4 mRNA阳性表达率及蛋白质浓度与血浆AFP蛋白水平无显著相关性(P>0.05)。5.在AFP阴性的小肝癌实验对象中,recql4mRNA阳性率明显高于肝硬化,乳腺癌,胃癌,食管癌及健康志愿者中的表达(P4 mRNA与AFP的联合诊断的医学价值。recql4 mRNA与AFP的联合诊断中只要有一项显示阳性即联合诊断为阳性.在小肝癌中,阳

关键词： recql4 AFP 肝癌诊断敏感度肝癌

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解旋酶recql4抗原表位分析及其免疫检测技术的初步建立

解旋酶RecQL4抗原表位分析及其免疫检测技术的初步建立

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作者：吴萌河北师范大学

学位级别：硕士

Waston和Crick提出DNA双螺旋结构后，人们逐步发现了DNA聚合酶，它是以一条链为模板通过DNA聚合酶聚合形成一条新的链。科学家后来又发现另一种酶能够在DNA复制时破坏互补碱基对中的氢键，从而使DNA双螺旋打开，这类酶被称为解旋酶，至... 详细信息

Waston和Crick提出DNA双螺旋结构后，人们逐步发现了DNA聚合酶，它是以一条链为模板通过DNA聚合酶聚合形成一条新的链。科学家后来又发现另一种酶能够在DNA复制时破坏互补碱基对中的氢键，从而使DNA双螺旋打开，这类酶被称为解旋酶，至今已有上百种解旋酶被发现。人们根据解旋酶的二维结构和一级序列,把解旋酶分为几大家族来分类研究。经过多年的研究发现解旋酶具有多种功能,在细胞内它们参与DNA复制、修复、转录重组以及RNA接拼、核糖体组装、蛋白质翻译,端粒稳定等。最近,还发现个别解旋酶甚至参与机体天然免疫反应机制。解旋酶已不仅仅只是分开核酸双链结构的一类酶,它的生物功能远不止此。解旋酶第二大家族中的RecQ解旋酶亚家族在核酸代谢过程中起了关键的作用。在哺乳动物中包含有5个成员:RecqQL1,WRN,BLM,recql4和recql5,其中WRN,BLM和recql4的突变可分别导致3种常染色隐形遗传病:布卢姆综合征,沃纳综合征和Rothmund Thomson Syndrome。特别是recql4作为RecQ家族一员由于它在临床上的发现它具有双重作用，即不但其功能缺失促进肿瘤高发，而且其异常的高表达也可促进人类肿瘤的进展过程。有研究发现异常高水平的recql4蛋白与前列腺肿瘤细胞的致瘤性密切相关。因此做为抗肿瘤药物研发及新的肿瘤治疗战略recql4具有重要的临床应用价值。基于此本研究希望利用生物信息学的方法分析recql4抗原表位和研制特异性配对单克隆抗体，并初步开展相关检测产品的研发。为进一步开展研究recql4表达水平与肿瘤细胞相关性，以及肿瘤对铂类或其它种类化疗药物敏感性研究奠定基础。本项目分别采用生物信息学的方法获得recql4的多肽抗原，通过软件预测确定5条抗原表位多肽的氨基酸序列，并进行人工合成。合成的多肽抗原通过质谱鉴定和高效液相纯化，纯度达到抗原合成的要求。并把合成多肽与载体蛋白KLH偶联，形成免疫抗原。用该5个抗原免疫Balb/c小鼠，每条多肽抗原分别获得了一株稳定分泌单克隆抗体杂交瘤细胞株，编号分别为1B5、2D6、3C8、4D2、5A7。5株单克隆抗体细胞培养上清抗体Westernblot显示2D6和5A72个抗体与recql4基因工程表达抗原特异性结合。2株单克隆抗体纯化后的抗体效价分别为1:1.24×105、1:1.24×105，亲和力常数分别为K(2D6)=2.1×109L/moL，K(5A7)=6.7×108L/moL。利用2D6和5A7这2株抗体进行胶体金双抗体夹心检测方法初步探讨，在胶体金检测方法初步建立的过程中，我们对反应体系中的各个环节进行了优化。确定了包被胶体金为2D6，标记浓度为4.8ug/ml，5A7为划膜抗体，划膜浓度为0.6mg/ml。在0.25ng/ml-8ng/ml的检测范围内，线性方程y=1.0356x+0.0039，R2=0.9924。

关键词： recql4 肿瘤抗原表位单克隆抗体胶体金

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