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长链非编码RNA ptenP1通过miR-3611/pten基因途径调控宫颈癌进程的分子机制研究

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中国医药导报 2024年第3期21卷 19-27页

作者：包利利赵达俞岩周俏苗海南医学院第一临床学院海南海口570216 海南省妇女儿童医学中心妇科海南海口570100

目的探讨长链非编码RNA ptenP1 (以下简称“ptenP1”)在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法选取2019年1月至2022年12月海南省妇女儿童医学中心诊断的54例的癌组织与癌旁组织,另选取宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、C33A、Caski)和... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA ptenP1 (以下简称“ptenP1”)在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法选取2019年1月至2022年12月海南省妇女儿童医学中心诊断的54例的癌组织与癌旁组织,另选取宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、C33A、Caski)和正常宫颈上皮细胞系(H8),采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测ptenP1、miR-3611、pten基因、pten蛋白水平。选取合适的宫颈癌细胞系,比较ptenP1在细胞质和细胞核中的表达情况,并进一步将其分为空白组(无处理)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-ptenP1组(转染pcDNA3.1-ptenP1)、NC组(阴性对照,转染模拟物或抑制剂NC)、miR-3611抑制剂组(转染miR-3611抑制剂)、pcDNA3.1-ptenP1+NC组(转染pcDNA3.1-ptenP1和NC)和pcDNA3.1-ptenP1+miR-3611 mimics组(转染pcDNA3.1-ptenP1和miR-3611模拟物)。比较空白组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-ptenP1组ptenP1、miR-3611、pten基因、pten蛋白及上皮间质转化的相关指标,采用细胞活力检测及流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;比较空白组、NC组、miR-3611抑制剂组miR-3611、pten基因、ptenP1水平;比较pcDNA3.1-ptenP1+NC组和pcDNA3.1-ptenP1+miR-361 1 mimics组的细胞增殖情况及上皮间质转化的相关指标。采用双萤光素酶报告基因及RNA下拉实验验证miR-3611与ptenP1、pten基因的靶向关系。结果癌组织ptenP1、pten基因、pten蛋白水平低于癌旁组织,miR-3611水平高于癌旁组织(PptenP1、pten基因、pten蛋白水平低于H8细胞,miR-3611水平高于H8细胞(PptenP1在HeLa、Caski细胞质中高表达。pcDNA3.1-ptenP1组ptenP1、凋亡率、上皮钙黏素、pten基因高于空白组,细胞增殖活力(培养48、72、96h)及ZEB1、Snail、波性蛋白、miR-3611低于空白组(Ppten基因、ptenP1高于空白组(PptenP1+miR-361 1 mimics组细胞增殖活力(培养48、72、96 h)、上皮钙黏素低于pcDNA3.1-ptenP1+NC组,ZEB1、Snail、波性蛋白高于pcDNA3.1-ptenP1+NC组(PptenP1水平高于转染生物素标记的空白细胞和突变型miR-3611转染生物素标记的细胞,分别转染ptenP1或pten野生型和miR-3611模拟物的293T细胞的相对萤光活性低于仅转染ptenP1或pten野生型的293T细胞(PptenP1通过竞争性结合miR-3611调控pten表达影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词：长链非编码RNA 微RNA 竞争性结合机制 pten基因宫颈癌

pten基因诱导人胚肾293细胞凋亡和细胞周期停滞

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生物化学与生物物理进展 2003年第2期30卷 204-208页

作者：张利能俞强查锡良卫生部糖复合物重点实验室 ThePulmonaryCenterandDepartmentofBiochemistry

为了研究抑癌基因pten过表达对HEK2 93细胞凋亡和细胞周期停滞的作用 ,以野生型pten和pten突变子 (T910G)表达质粒分别转染无pten表达的人胚肾 2 93细胞 ,采用细胞质梯度DNA方法检测细胞凋亡 ,以流式细胞仪分析细胞周期 .发现pten过表... 详细信息

为了研究抑癌基因pten过表达对HEK2 93细胞凋亡和细胞周期停滞的作用 ,以野生型pten和pten突变子 (T910G)表达质粒分别转染无pten表达的人胚肾 2 93细胞 ,采用细胞质梯度DNA方法检测细胞凋亡 ,以流式细胞仪分析细胞周期 .发现pten过表达能够诱导人胚肾 2 93细胞质中出现梯度DNA ,2 93细胞发生凋亡 ,pten过表达改变细胞周期分布 ,G0 /G1期细胞增加 13% ,S期细胞下降 15 % .pten突变子对细胞凋亡和G1细胞停滞的影响略弱于野生型pten .pten基因过表达明显下调血小板衍生生长因子 (PDGF)诱导的蛋白激酶B (PKB)和p4 2 ,p4 4 促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)磷酸化水平 ,pten突变子对p4 2 ,p4 4 MAPK磷酸化水平的调节作用略弱于野生型pten .pten通过抑制细胞增殖。

关键词： pten基因诱导细胞凋亡细胞周期停滞蛋白激酶B

pten基因转染对白血病细胞VEGF调控作用的影响

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肿瘤 2010年第10期30卷 815-821页

作者：成志勇潘崚牛志云梁文同贾志强颜晓燕姚丽杨敬慈河北医科大学第二医院血液内科石家庄050000 保定市第一医院血液内科保定071000 四川大学华西医院血液内科成都610041

目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology dele-ted on chromosome ten gene,pten)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)调控作用的影响。方法:将携带有野生型pten及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒(Ad-pten-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562,实时荧光定量PCR法检测不同转染组细胞中pten、VEGF和VEGF1 mRNA表达水平,Western印迹法检测pten、VEGF、Akt和磷酸化Akt蛋白的表达水平,并采用Transwell小室侵袭实验检测不同转染组细胞的侵袭性。通过MTT实验及FCM法检测pten基因对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖和凋亡的影响。通过鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内血管生长实验检测pten基因对鸡胚血管生成的影响。结果:与空载体腺病毒(Ad-GFP)相比,Ad-pten-GFP转染人白血病细胞K562后,VEGF及其受体的表达被明显抑制,并呈剂量依赖性负相关;同时,Ad-pten-GFP转染后K562细胞侵袭能力明显减弱。pten基因转染能够抑制血管内皮细胞ECV304增殖,并促进其细胞凋亡,细胞周期阻滞在S期。pten基因转染可明显抑制CAM血管生长。结论:肿瘤抑制基因pten能够抑制内皮细胞增殖和白血病细胞侵袭,其作用机制可能是负调控白血病细胞VEGF表达以及抑制肿瘤血管新生。

关键词： pten基因基因转染人白血病细胞 VEGF 调控作用 endothelial growth factor gene transfection 肿瘤抑制基因实验检测腺病毒人慢性粒细胞白血病 GFP 血管生长血管内皮生长因子细胞侵袭脐静脉内皮细胞株及其受体表达水平 Western印迹法 Transwell小室

pten基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2009年第1期29卷 25-30页

作者：成志勇潘崚杨晓阳王素云薛芳牛志云温省初梁文同尚雪飞河北医科大学第二医院血液科河北省血液病重点实验室石家庄050000 保定市第一医院血液肿瘤科保定071000 保定市第一医院病理科保定071000

目的探讨肿瘤抑制基因pten对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法将携带有野生型pten、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-pten-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系。采用MTT法检测细胞生长... 详细信息

目的探讨肿瘤抑制基因pten对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法将携带有野生型pten、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-pten-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系。采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测ptenmRNA水平变化,Westernblotting检测pten蛋白水平变化。结果以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-pten-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%。细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)%vs(78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)%vs(13.6±1.02)%](均Ppten可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期。

关键词： pten基因 K562细胞系细胞周期白血病

pten基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响

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癌症 2006年第5期25卷 555-559页

作者：张建华杨为民周四维陈忠华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科湖北武汉430030

背景与目的:pten(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验... 详细信息

背景与目的:pten(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性pten转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有pten基因的重组真核表达质粒pBp-pten转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-pten体外转染BIU87细胞(pBp-pten-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测pten的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测pten基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-pten的酶切鉴定证实含有目的基因pten;pBp-pten-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-pten-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(Ppten基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-pten-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-pten-BIU87细胞明显少于两对照组(P基因pten转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性。

关键词： pten基因转染膀胱肿瘤 BIU87细胞增殖与侵袭基因治疗

pten基因在急性T淋巴细胞白血病患者中的表达水平及临床价值

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中国实验血液学杂志 2019年第6期27卷 1722-1727页

作者：彭志元杨春秀伞景辉刘水玉袁萍石彬遵义医科大学附属医院血液科遵义医科大学附属医院检验科/遵义医科大学检验医学院贵州遵义563003

目的:研究急性T淋巴细胞白血病患者pten基因表达水平及临床意义。方法:选取自2014年1月-2018年5月在本院接受治疗的T-ALL患者124例,同时选取120例健康体检者作为对照组,收集受试者骨髓后分离单个核细胞,通过RT-PCR检测pten基因表达水平... 详细信息

目的:研究急性T淋巴细胞白血病患者pten基因表达水平及临床意义。方法:选取自2014年1月-2018年5月在本院接受治疗的T-ALL患者124例,同时选取120例健康体检者作为对照组,收集受试者骨髓后分离单个核细胞,通过RT-PCR检测pten基因表达水平,采用Western blot检测pten蛋白表达水平,Kaplan-Meier法对T-ALL患者进行生存分析,Cox多因素分析患者预后的独立影响因素,并研究pten基因水平与T-ALL患者临床特征的相关性及其预后价值。结果:T-ALL患者的pten基因相对水平(0.19±0.06)显著低于健康者(Ppten表达水平与T-ALL患者的白细胞计数(r=0.993)及外周血幼稚细胞(r=0.996)呈显著相关关系。pten基因表达水平与T-ALL患者的性别、年龄、LDH水平、Hb水平及血小板数无相关性。中危组、标危组及高危组患者pten蛋白表达水平显著低于对照组(Ppten蛋白表达水平显著低于其它各组(Ppten基因高表达组的OS及DFS均高于pten低表达组(Ppten基因是OS独立影响因素(Ppten基因是DFS独立影响因素(Ppten基因水平与T-ALL患者预后相关,预后较好的患者pten基因水平较高。

关键词：急性T淋巴细胞白血病 pten基因临床预后

pten基因对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用

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中华肿瘤杂志 2004年第5期26卷 275-278页

作者：万小云石一复李娟清浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

目的　探讨pten基因在子宫内膜癌基因治疗方面的可行性。方法　通过腺病毒载体(Ad pten)将人野生型ptencDNA导入Ishikawa细胞 ,观察外源性pten蛋白的表达情况 ,以及pten蛋白对Ishikawa细胞生长的影响 ,同时还观察了pten蛋白是否影响胰... 详细信息

目的　探讨pten基因在子宫内膜癌基因治疗方面的可行性。方法　通过腺病毒载体(Ad pten)将人野生型ptencDNA导入Ishikawa细胞 ,观察外源性pten蛋白的表达情况 ,以及pten蛋白对Ishikawa细胞生长的影响 ,同时还观察了pten蛋白是否影响胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF Ⅱ )对Ishikawa细胞的作用。结果　Ad pten感染Ishikawa细胞后 1d ,即可见pten蛋白表达 ;第 3天时 ,表达明显增强 ,并能持续表达 10d。感染后的Ishikawa细胞生长受到明显抑制 ,并且pten还能明显抑制IGF Ⅱ诱导的Ishikawa细胞生长。结论　腺病毒介导的pten基因导入能诱导Ishikawa细胞生长受到明显抑制 ,提示野生型pten基因可能是治疗子宫内膜癌的一种新途径。

关键词： pten基因子宫内膜癌癌细胞细胞生长抑制作用基因治疗

pten基因多态性与河北省高发区食管鳞状细胞癌发病风险的关系

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中国肿瘤临床 2007年第22期34卷 1261-1265页

作者：葛晖曹延延王益民张秀凤李琰郭炜王娜张健慧河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所分子生物研究室石家庄市050011

目的:pten作为抑癌基因,具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶的活性,在调节细胞生长、分化和凋亡方面起重要作用。位于pten基因第4内含子的一个插入性多态ⅣS4(-/+)可能通过不同剪切来影响其基因表达。本研究旨在探讨河北省食管癌高发区人群中... 详细信息

目的:pten作为抑癌基因,具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶的活性,在调节细胞生长、分化和凋亡方面起重要作用。位于pten基因第4内含子的一个插入性多态ⅣS4(-/+)可能通过不同剪切来影响其基因表达。本研究旨在探讨河北省食管癌高发区人群中这一常见多态与食管鳞状细胞癌发病风险的关系。方法:采用基于人群的病例-对照研究,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法进行基因分型,分析来自食管癌高发区的350例食管癌患者和634例健康对照者的pten基因多态性。结果:具有上消化道肿瘤家族史可明显增加食管癌的发病风险,经性别、年龄和吸烟状况校正的OR值为1.73(95%CI=1.29～2.32)。ptenⅣS4基因型在食管癌患者和健康对照中总体分布无显著性差异。与ⅣS4-/-基因型相比携带ⅣS4+/+基因型显著降低食管癌发病风险,校正的OR值为0.64(95%CI=0.44～0.94)。根据吸烟状况和上消化道肿瘤家族史进行分层分析,发现在有上消化道肿瘤家族史个体中携带ⅣS4-/+基因型降低食管癌的发病风险(校正OR=0.55,95%CI=0.34～0.90),而在吸烟个体、非吸烟个体及上消化道肿瘤家族史阴性个体中ptenⅣS4-/+、+/+基因型均不影响食管鳞状细胞癌的发病风险。结论:ptenⅣS4+/+基因型是河北省食管癌高发区食管鳞状细胞癌发生的保护性因素,此外ptenⅣS4-/+基因型仅降低家族集聚性食管癌的发病风险。

关键词： pten基因食管鳞状细胞癌基因多态性

pten基因真核荧光表达载体的构建及其在喉癌细胞株中的表达

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吉林大学学报（医学版） 2009年第5期35卷 817-820页

作者：陈鸥李野赵明金春顺金玲姜艳芳吉林大学第二医院耳鼻咽喉科吉林长春130041 吉林大学中日联谊医院检验科吉林长春130033 吉林大学第一医院感染症科吉林长春130021

目的:构建人pten基因的真核荧光表达载体并在Hep-2喉癌细胞中高效表达,阐明pten基因在喉癌细胞株中的抑癌效果并为喉癌的基因治疗奠定基础。方法:从人喉黏膜组织中提取总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到pten全基因。克隆入PGEM-T ... 详细信息

目的:构建人pten基因的真核荧光表达载体并在Hep-2喉癌细胞中高效表达,阐明pten基因在喉癌细胞株中的抑癌效果并为喉癌的基因治疗奠定基础。方法:从人喉黏膜组织中提取总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到pten全基因。克隆入PGEM-T easy载体上,经过PCR和酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。将所获得的基因定向克隆入Pegfp-C1载体中构建pten真核荧光表达载体,并将其转入Hep-2细胞中进行表达,Western blotting检测其表达。结果:反转录PCR扩增后的产物,在约1400 bp处可观察到特异性条带,序列分析表明与GenBank中的pten基因序列相同。PCI-pten真核载体转染Hep-2细胞后的Western Blotting表明表达产物与抗人pten单克隆抗体有特异性免疫反应。结论:成功构建出pten真核荧光表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为pten蛋白。

关键词：抑癌基因 pten基因基因克隆基因表达