检索结果-南通市图书馆

马立克氏病病毒pp38基因和1.8kb转录子之间双向启动子的特性研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2005年第3期45卷 363-367页

作者：丁家波崔治中姜世金孙爱军孙淑红山东农业大学动物科技学院泰安271018

从马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区某一点,将介于MDVpp38基因和1 8kb转录子之间的双向启动子分割成两个单方向的启动子。以pp38为报告基因,pUC18质粒为载体,构建了含不同方向完整启动子序列的pprofpp38和pprorpp38质粒,以及含... 详细信息

从马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区某一点,将介于MDVpp38基因和1 8kb转录子之间的双向启动子分割成两个单方向的启动子。以pp38为报告基因,pUC18质粒为载体,构建了含不同方向完整启动子序列的pprofpp38和pprorpp38质粒,以及含分割后单方向启动子序列的pdProfpp38和pdProrpp38质粒。4种质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(Chickenembryofibroblast,CEF)后,均能检测到pp38基因的表达。进一步以氯霉素乙酰转移酶(Chloramphenicolacetyltransferase,CAT)为报告基因,构建了含不同方向完整双向启动子的pprofCAT和pprorCAT质粒,以及含分割后单方向启动子序列的pdProfCAT和pdProrCAT质粒。通过转染试验,定量分析了完整启动子和分割后启动子在两个方向上的启动活性。实验结果表明,分割后的启动子在两个方向上的启动活性均比相应方向上完整启动子的活性低,其中1 8kb转录子方向上的活性下降了4

关键词：马立克氏病病毒 pp38基因 1.8kb转录子双向启动子

马立克氏病病毒pp38基因产物对其上游双向启动子活性的增强作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学（C辑） 2005年第6期35卷 519-526页

作者：丁家波崔治中姜世金 Sanjay Reddy 山东农业大学动物科技学院 Texas A & M University College StationTX77843USA

为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1．8 kb mRNA转录子基因间一双向启动子的活性,本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,构建了启动子以pp38方向转录的重组质粒pp(pp38)-EGFP和以1．8 kb方向转录的重组质粒pp(1．8-kb)-E... 详细信息

为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1．8 kb mRNA转录子基因间一双向启动子的活性,本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,构建了启动子以pp38方向转录的重组质粒pp(pp38)-EGFP和以1．8 kb方向转录的重组质粒pp(1．8-kb)-EGFP．将这二个重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF)、MDV rMd5克隆株感染的CEF(rMd5-CEF)以及pp38基因缺失的MDV rMd5Δpp38克隆株感染的CEF(rMd5Δpp38-CEF),结果只有在转染rMD5-CEF样品中才能检测到EGFP的表达；将上述二个EGFP重组质粒分别与能表达pp38的重组质粒pcDNA-pp38共转染CEF和rMd5Δpp38-CEF,在CEF中仍检测不到EGFP的表达,而在rMd5Δpp38-CEF形成的空斑周围,能检测到EGFP的表达．结果提示pp38是该双向启动子发挥作用的必要条件,但该启动子活性的发挥仍需除pp38以外的其他因子的共同作用．将pcDNA-pp38质粒和pp24表达质粒pcDNA-pp24,以及EGFP表达质粒共转染无MDV感染的CEF时,能检测到EGFP的表达．核酸阻滞试验表明,pp38必须和pp24共表达时,才能和启动子结合,表现出阻滞现象．说明pp38和pp24可能以聚合体形式与启动子结合并增强启动子的转录活性．还证明了该双向启动子在1．8 kb mRNA转录子方向的启动活性显著高于pp38基因方向．

关键词：马立克氏病病毒 pp38基因 1.8 kb mRNA转录子双向启动子

马立克氏病病毒pp38基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2004年第2期24卷 117-119页

作者：姜世金丁家波张志孙淑红王玉杨汉春崔治中中国农业大学动物医学院北京100094 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

通过 PCR方法扩增马立克氏病病毒 (Marek′s disease virus,MDV) Md11株的 pp38基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pc DNA3.1/ zeo(+)中。阳性克隆鉴定后 ,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)检测到了 p... 详细信息

通过 PCR方法扩增马立克氏病病毒 (Marek′s disease virus,MDV) Md11株的 pp38基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pc DNA3.1/ zeo(+)中。阳性克隆鉴定后 ,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)检测到了 pp38在 CEF中的表达。

关键词：马立克氏病病毒 pp38基因真核表达质粒构建鸡胚成纤维细胞表达

马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的克隆和序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2004年第1期35卷 93-96页

作者：丁家波赵文明姜世金张纪元王增福崔治中山东农业大学动物科技学院畜禽疫病防制中心山东泰安271018 扬州大学科研处江苏扬州225009

参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列,设计合成一对引物,分别以RB1B,814,GD2(广东分离株),J 1 E(北京分离株),Md11,Md5,CVI988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得了预期大小的PCR产物。该... 详细信息

参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列,设计合成一对引物,分别以RB1B,814,GD2(广东分离株),J 1 E(北京分离株),Md11,Md5,CVI988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得了预期大小的PCR产物。该产物经pGEM T easy克隆后测序,将所得序列进行比较分析。结果发现:不同毒株间pp38基因的启动子和增强子序列间有缺失突变,序列的同源性大于95 9%,其中大多数的突变发生在MDV复制的原点附近。

关键词：鸡马立克氏病病毒 pp38基因启动子增强子基因克隆序列分析

马立克氏病病毒pp38基因上游的一个双向启动子研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2004年第2期44卷 162-166页

作者：丁家波崔治中孙淑红姜世金山东农业大学动物科技学院泰安271018

马立克氏病病毒 (MDV)pp38基因上游是病毒基因组DNA复制原点。在其两侧均含有启动子TATA box、CAAT box等特征性的保守基元 ,推测是一个天然的双向启动子。为了在体外验证其双向启动活性 ,本研究以MD Vpp38为报告基因 ,并将其ORF插入到p... 详细信息

马立克氏病病毒 (MDV)pp38基因上游是病毒基因组DNA复制原点。在其两侧均含有启动子TATA box、CAAT box等特征性的保守基元 ,推测是一个天然的双向启动子。为了在体外验证其双向启动活性 ,本研究以MD Vpp38为报告基因 ,并将其ORF插入到pUC18中 ,构建了pUC pp38质粒。将包含该启动子完整区域的 789bp序列分别以正反两个方向克隆进pUC pp38质粒中pp38报告基因的上游 ,获得的重组质粒pprofpp38和pprorpp38。将所获得的重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验检测pp38基因的表达以验证该启动子的双向启动活性。结果表明 ,马立克氏病病毒复制原点区的启动子无论以何种方向插入pUC pp38质粒中 ,在转染细胞2 4h内能检测到pp38基因的表达 ,4 8h后能获得高效和持续的表达。逐渐缩小该启动子的范围 ,最终在 32 0bp时 ,仍能检测到两个方向较强的启动活性。

关键词：马立克氏病病毒 pp38基因双向启动子重组质粒鸡胚成纤维细胞 MDV

马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的部分功能

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2004年第1期24卷 6-8页

作者：丁家波姜世金孙淑红王增福张纪元崔治中山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染... 详细信息

通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用小鼠抗大肠杆菌表达的 pp38血清作间接免疫荧光试验 ,验证 pp38基因的表达。结果 ,在转染的细胞浆中看到了绿色的荧光。

关键词：马立克氏病病毒 pp38基因启动子增强子间接免疫荧光试验

马立克病病毒pp38基因的编码序列及译读框

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

江苏农学院学报 1991年第3期12卷 1-5页

作者：崔治中 L.F.Lee H.J.Kung 美国农业部地区家禽研究所美国CWRU大学医学院微生物及分子生物学系

马立克病病毒(MDV)与致肿瘤相关的38kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列是一个不含有内含子的由870个碱基对组成的DNA片断。从对MDVpp38-λgtll Lac Z融合基因的定序及已知Lac Z基因的译读框,直接读出了MDVpp38基因的译读框。根据计算,由该... 详细信息

马立克病病毒(MDV)与致肿瘤相关的38kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列是一个不含有内含子的由870个碱基对组成的DNA片断。从对MDVpp38-λgtll Lac Z融合基因的定序及已知Lac Z基因的译读框,直接读出了MDVpp38基因的译读框。根据计算,由该译读框推导出的该基因编码的由290个氨基酸组成的初级多肽分子量约为31kd.

关键词：马立克病病毒 pp38基因编码序列

鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38基因的真核表达及其特异性单克隆抗体的研制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38基因的真核表达及其特异性单...

作者：刘明亮扬州大学

学位级别：硕士

根据Genbank发表资料,设计了一对引物,应用PCR方法扩增出鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38基因,将PCR产物克隆到pGEM-T easy载体,经限制性酶切分析和测序证实扩增到的pp38基因序列完全正确。用BamHⅠ和PstⅠ酶将该基因片段从pGEM-T e... 详细信息

根据Genbank发表资料,设计了一对引物,应用PCR方法扩增出鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38基因,将PCR产物克隆到pGEM-T easy载体,经限制性酶切分析和测序证实扩增到的pp38基因序列完全正确。用BamHⅠ和PstⅠ酶将该基因片段从pGEM-T easy载体切下,回收目的DNA片段并与杆状病毒转座载体pFastBac 1连接,筛选出重组转座载体pFastBac 1- pp38,转座含有杆状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后,获得重组穿梭质粒rBacmid-pp38;将重组质粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得了含有鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38基因的重组杆状病毒rBacmid- pp38 ( r pp38 )。重组病毒感染Sf9细胞后,用IFA方法对细胞表达产物进行检测,结果表明:构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38蛋白。将表达鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38蛋白的昆虫细胞免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。用丙酮乙醇固定液固定的感染了鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B的鸡成纤维细胞CEF,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测杂交瘤细胞培养上清,结果筛选出1株分泌抗MDV-pp38蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株,命名为pp38-2F6,经2次亚克隆后,100%杂交瘤细胞保持了分泌抗体的能力。间接免疫荧光试验证明,这一株单克隆抗体能与MDV-RB1B以及MDV-CVI988感染的CEF反应,应用捕获ELISA方法进行的亚类鉴定结果表明:单抗2F6为IgG2b,此单抗将可以广泛用于体外表达系统表达pp38基因的鉴定和功能的深入研究。

关键词：鸡马立克氏病病毒,RB1B pp38基因真核表达间接免疫荧光单克隆抗体

马立克氏病病毒38kd磷蛋白H19-和T65-抗原表位分析及鸡对该抗原表位点突变病毒的免疫反应

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学（C辑） 2003年第3期33卷 263-272页

作者：崔治中张志秦爱建 L.F.Lee 山东农业大学预防兽医系扬州大学畜牧兽医学院 Avian Disease and Oncology Lab East LansingMI48823USA

对马立克氏病病毒(MDV)38 kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列的测定表明,所有在间接荧光抗体试验(IFA)中与单抗H19反应的10个不同致病型MDV毒株,在第320位碱基为“A”,相应第107位氨基酸是谷氨酰胺,而在IFA中不与单抗H19反应的疫苗株CVI988... 详细信息

对马立克氏病病毒(MDV)38 kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列的测定表明,所有在间接荧光抗体试验(IFA)中与单抗H19反应的10个不同致病型MDV毒株,在第320位碱基为“A”,相应第107位氨基酸是谷氨酰胺,而在IFA中不与单抗H19反应的疫苗株CVI988相应位点分别是“G”和精氨酸。另一方面,在IFA中能与另一个单抗T65反应的毒株,在第326位碱基是“G”,第109位氨基酸是甘氨酸,而其他不与单抗T65反应的毒株,相应位点碱基和氨基酸分别是“A”和谷氨酸。通过比较CVI988及其在pp38基因的第320和326位的单一或双碱基点突变病毒CVI988/rpp38(AG)和CVI/rpp38(AA)对H19和T65的反应性,证明了在第107和109位的谷氨酰胺和甘氨酸分别对pp38上的H19和T65两个抗原表位起关键作用。比较CVI988及其点突变株CVI/rpp38(AG)在SPF鸡诱发的抗体反应表明,接种了点突变株CVI/rpp38(AG)鸡的抗体反应出现得比天然株抗体反应明显延缓且显著降低。进一步对MDV不同抗原成分的相应抗体水平比较表明,该功能区内可能存在着第3个特异性抗原表位,它决定于CVI988株pp38第107位的精氨酸,而且天然CVI988株及其点突变株诱发的抗MDV抗体水平间的显著差异可能正与这个抗原表位相关。

关键词：马立克氏病病毒 38kd磷蛋白 pp38基因 H19 T65 抗原表位点突变鸡免疫反应