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非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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山东农业科学 2023年第10期55卷 140-145页

作者：矫健李建达韩先杰张琳张玉玉任素芳刘飞陈智 Nataliia Hrabchenko 张文娟于江吴家强青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室山东济南250100 山东碧蓝生物科技有限公司山东泰安271400

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的一种高度传染性病毒性疾病,发病率和死亡率高达100%,对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击。p22蛋白为ASFV的结构蛋白,本研究构建了重组原... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的一种高度传染性病毒性疾病,发病率和死亡率高达100%,对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击。p22蛋白为ASFV的结构蛋白,本研究构建了重组原核表达质粒pET-32a-p22,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组p22蛋白并纯化,经Western blot鉴定证实重组p22蛋白与ASFV阳性血清有良好的免疫反应性。利用重组p22蛋白免疫Balb/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌p22蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株2D6和5E7。经抗体亚型鉴定两株抗体均为IgG1型;经Western blot鉴定,两株抗体能够特异性识别过表达的p22蛋白。综上,本研究成功表达并纯化了p22重组蛋白,制备了p22单克隆抗体,为进一步探讨p22蛋白的结构功能及其在ASFV中的感染致病机制提供了基础条件。

关键词：非洲猪瘟病毒 p22蛋白单克隆抗体原核表达

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非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医 2023年第1期50卷 270-279页

作者：张凯张春平戈胜强孙春喜程杰伏春雨王刚牛星彭军山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室泰安271000 山东省潍坊市动物疫病预防与控制中心潍坊261000 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 临沂科技职业学院现代农业学院临沂276000

【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因Kp177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原... 详细信息

【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因Kp177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IpTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFp-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具有良好的免疫原性,小鼠血清抗体效价为1∶12800。本研究建立的ELISA方法(p22-ELISA)的最佳抗原包被浓度为0.125μg/孔,最佳待检血清稀释度为1∶800,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.384;与CSFV、pRRSV、pCV2、pRV等抗体阳性猪血清无交叉反应,说明特异性好;批内与批间变异系数均低于10%,表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品,与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) p22蛋白原核表达间接ELISA 抗体

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非洲猪瘟p22蛋白的原核表达和间接ELISA检测方法的建立

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非洲猪瘟p22蛋白的原核表达和间接ELISA检测方法的建立

作者：余怡丰华中农业大学

学位级别：硕士

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是一种急性出血性、传染严重的病毒性动物疾病,由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)感染所引起。世界动物卫生组织(WOAH)规定发生ASF疫情的国家必须向其通报,中国将其定为一类动物传染病... 详细信息

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是一种急性出血性、传染严重的病毒性动物疾病,由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)感染所引起。世界动物卫生组织(WOAH)规定发生ASF疫情的国家必须向其通报,中国将其定为一类动物传染病。然而,迄今为止尚无能够有效预防或治疗ASF的商业化疫苗及药物。因此,及时精准检测并切断其传播途径是减少ASF疫情造成的损失的有效方法。本研究利用大肠杆菌表达系统制备高纯度的ASFV p22重组蛋白,并将其作为包被蛋白,建立了一种间接ELISA方法用于检测ASFV抗体。本研究将ASFV毒株SY-18(Gen Bank:MH766894)中p22蛋白对应的Kp177R基因序列中抗原性较好的42-189位氨基酸连接到pET-30a(+)原核表达载体上,构建pET30a-p22重组质粒。将重组质粒进行原核表达,优化诱导条件使目的蛋白大量表达在菌液上清中,对大量诱导表达的蛋白进行纯化和浓缩,测得浓度为670μg/m L。Western Bolt试验结果表明原核表达的重组蛋白pET30a-p22表达无误,并且具有良好抗原性,可与ASFV抗体阳性血清发生强烈的特异性结合反应。使用pET30a-p22作为抗原蛋白,对各项ELISA试验条件进行探索和优化,最终的最佳试验条件如下:最佳包被液为pBS,最佳抗原稀释浓度0.25μg/m L(每孔100μL),4℃条件下包被过夜,最佳血清稀释比例为1:1600(每孔100μL),最佳封闭液5%脱脂奶粉(每孔200μL),最佳封闭条件为4℃封闭12-16 h,待检血清37℃孵育0.5 h。最佳二抗稀释比例为1:10000(每孔100μL),37℃孵育1.5 h,显色液(每孔100μL)的最佳反应时间为15 min。本间接ELISA方法判定标准为待测样品OD值≥0.261为ASFV抗体阳性,0.261>待测样品OD值≥0.224判定为可疑,待测样品OD值224判定为ASFV抗体阴性。对本间接ELISA方法进行检验和评估:使用本方法对伪狂犬病等7种不同的流行猪病阳性血清进行检测,各样品的判定结果均为阴性,表明本检测方法与其他流行的猪病抗体均无交叉反应,特异性良好。不同的ASFV阳性血清在稀释度高达1:3200时仍可判定为阳性,表明本检测方法具有较高的灵敏性。批内和批间重复性试验表明,批内变异系数为0.30%-3.23%,批间变异系数为1.04%-7.33%,均小于10%,表明本检测方法重复性和稳定性良好。使用本间接ELISA方法分别与两种不同的商品化ELISA试剂盒共同检测226份临床样品,结果显示两种商品化ELISA抗体检测试剂盒的符合率为100%。本方法与商品化试剂盒相比,符合率为98.6%(223/226),表明本间接ELISA检测方法可用于ASFV抗体的大量检测。本研究以大肠杆菌原核表达系统表达的重组蛋白pET30a-p22为基础,成功优化并建立了一种间接ELISA检测方法。经过试验验证,该方法对于ASFV抗体的检测具有良好的敏感性、特异性、重复性和稳定性,能够快速、高效和大批量地检测临场样品中的ASF抗体,可用于ASFV疫情的大规模筛查。该研究成果为ASFV的临床检测和流行病学调查提供了一种可靠和有效的技术手段,对防控ASF疫情具有重要意义。

关键词：非洲猪瘟病毒 p22蛋白原核表达间接ELISA

非洲猪瘟病毒p22蛋白表达及其iELISA检测方法建立

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非洲猪瘟病毒p22蛋白表达及其iELISA检测方法建立

作者：张凯山东农业大学

学位级别：硕士

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种高度致死性病毒性传染病,是世界动物卫生组织法定报告的动物疫病,在我国属于一类动物疫病。该病在2018年8月传入我国,由于其很高的... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种高度致死性病毒性传染病,是世界动物卫生组织法定报告的动物疫病,在我国属于一类动物疫病。该病在2018年8月传入我国,由于其很高的死亡率,使得存栏母猪量迅速下降,导致猪肉价格上涨,给养猪业的发展和社会经济稳定带来了严峻的挑战。目前ASF没有有效的治疗方法和效果确实的疫苗能够用于防控,防控手段主要依靠生物安全和扑杀。然而,随着该病的逐渐流行和发生,部分动物会表现出亚急性感染并存活下来。ASF感染后的康复动物具有较高的抗体水平,血液中通常检测不到病毒,因此抗体检测对ASF的筛查以及净化具有重要的意义。本研究通过原核表达方式制备ASFV p22蛋白,以此建立适用于ASFV抗体检测的ELISA方法。本研究根据NCBI公布的ASFV中p22基因序列(Gen Bank:MK128995.1),通过DNASTAR软件分析其氨基酸序列,筛选出亲水性和抗原性较好的第24-145位氨基酸序列,对其进行密码子优化、在片段下游添加6×His标签基因,合成上述融合蛋白表达的基因片段并连接至原核表达载体p ET-32a质粒中。将重组质粒p ET32a-p22转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)表达宿主菌中,经IpTG诱导表达后表达目的蛋白,再经Ni柱亲和层析纯化,用BCA法测定重组蛋白浓度,其蛋白浓度为2.5μg/μL。Western Blot试验结果表明,本研究所表达的p22蛋白能够与灭活的ASFV阳性血清发生特异性反应,而不能和pRRSV、pCV2、CSFV、pRV等其他常见病原的阳性血清以及健康猪的血清发生反应。用纯化后的His-p22重组蛋白作为抗原进行包被ELISA反应板,建立并优化猪血清中ASFV抗体检测的间接ELISA方法,标准的ASFV灭活阳性血清和阴性血清均由中国动物卫生与流行病学中心惠赠。经过对检测条件的摸索和优化,最终确定最佳的抗原包被浓度为0.125μg/m L,被检血清稀释倍数为1:800,4℃过夜包被抗原,封闭液选择5%脱脂奶粉(每孔200μL),封闭时间为60 min,血清在37℃条件下作用时间为60 min,二抗以1:10,000稀释(100μL/孔),37℃作用90 min,TMB显色液(100μL/孔)最佳显色时间为15 min。应用优化完的ELISA方法检测60份无ASFV感染的猪阴性血清,根据统计学原理计算该ELISA方法的临界值。当血清样品的OD值≥0.384时为抗体阳性;OD值pCV2、pRRSV、pRV、CSFV的阳性血清,结果均为阴性,说明该检测方法的特异性比较好。重复性试验结果显示,同一批血清样本在同一批试验和不同批次的试验中数值别分为4.5%～7.5%和1.7%～9.08%,均小于10%,表明该间接ELISA方法具有良好的重复性。使用本试验建立的间接ELISA方法和动物卫生与流行病学中心的非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒同时检测263份临床样品,结果显示本实验室建立的间接ELISA方法和商品化试剂盒符合率为97.7%,无显著差异;表明本文建立的p22抗体间接ELISA检测方法可用于ASFV p22抗体的检测。综上所述,本研究基于原核表达系统表达ASFV p22蛋白,以此建立了适用于抗体检测的间接ELISA方法,该方法具有良好的灵敏度、重复性和特异性,为我国ASFV的防控提供了技术支撑。

关键词：非洲猪瘟病毒原核表达 p22蛋白间接ELISA

瓜类褪绿黄化病毒p22蛋白与寄主因子互作研究及其抗血清的制备

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瓜类褪绿黄化病毒P22蛋白与寄主因子互作研究及其抗血清的制备

作者：袁媛河南农业大学

学位级别：硕士

甜瓜(Cucumis melo)是热带和温带地区的一种重要葫芦科作物,也是我国的重要经济作物。瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbci chloratic yellows virus,CCYV)主要侵染甜瓜并且严重影响甜瓜的品质。CCYV由两条正单链RNA构成的病毒,分别为RNA1和RNA2... 详细信息

甜瓜(Cucumis melo)是热带和温带地区的一种重要葫芦科作物,也是我国的重要经济作物。瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbci chloratic yellows virus,CCYV)主要侵染甜瓜并且严重影响甜瓜的品质。CCYV由两条正单链RNA构成的病毒,分别为RNA1和RNA2,属于长线形病毒科毛型病毒属,p22是RNAl的3'末端编码的一个分子量为22 KDa的病毒蛋白,本实验利用酵母双杂交系统,筛选与p22蛋白互作的寄主因子,从而阐明p22蛋白在病毒侵染过程中的作用机制。主要研究内容和结果如下:克隆了瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)p22蛋白基因,并在大肠杆菌BL21中得到高效表达。以被瓜类褪绿黄化病毒侵染的甜瓜叶片为供试材料,应用RT-pCR方法克隆其p22蛋白基因,并将其连接到原核表达载体pGex-4T-3上,pCR验证及克隆测序确定开放阅读框的正确性。将重组载体pGexp22转化大肠杆菌BL21菌株,诱导表达,SDS-pAGE分析表明,经IpTG诱导,p22基因在大肠杆菌BL21中得到高效表达。成功制备了 CCYVp22的特异性抗血清。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了 CCYVp22的特异性抗血清。ACp-ELISA检测结果表明,血清效价高达1.28×105。Western blot检测甜瓜叶片,结果表明抗血清能够特异性地检测CCYV侵染的甜瓜叶片的CCYVp22蛋白。构建了甜瓜cDNA酵母文库,筛选出了 Rpol、M2、M39等3个可与p22互作的蛋白因子,分析测定了 3个蛋白因子与p22互作的功能域。以提取甜瓜叶片总RNA为供试材料,应用SMART技术构建甜瓜cDNA酵母文库,将p22的全长基因构建到诱饵质粒pGBKT7以获得重组克隆pGBKT7p22,对其进行自激活检测表明该蛋白无自激活活性。将诱饵质粒进行文库筛选获得98个克隆,测序比对后选择同源性比较高且阅读框正确的4个基因,并分别扩增其全长阅读框,将其构建到pGADT7载体上,与p22进行酵母共转化验证。结果表明其中有3个蛋白可以与p22互作,它们分别与 Cucumis sativus uncharacterized(ribosomal prtoein,rpol),Cucumis sativus SKp1-like protein 1A-like,Cucumis sativus SKp1-like protein 1B-like的同源性分别为95%,94%和95‰,并分别命名为Rpol、M2、M39。通过蛋白分析软件对p22蛋白进行功能域分析,将其分为3段分别构建到诱饵质粒pGBKT7,获得重组克隆pGBKT7F1,pGBKT7F2,pGBKT7F3,将其分别与pGADT7M2,pGADT7Rpol,pGADT7M39进行共转验证,结果表明M2蛋白能与pGBKT7F2互作,Rpol能同时与pGBKT7F1及pGBKT7F2互作,M39与重组克隆均不能互作。

关键词：原核表达抗血清瓜类褪绿黄化病毒酵母双杂交蛋白互作 p22蛋白

HBV/p22蛋白影响HepG2细胞凋亡的实验研究

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HBV/P22蛋白影响HepG2细胞凋亡的实验研究

作者：张帆南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景我国是乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染的高流行区,一般人群的乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen,HBsAg）阳性率为9.09%,随着HBV疫苗纳入计划免疫,一些大城市HBV感染率已有所降低,但HBV感染... 详细信息

研究背景我国是乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染的高流行区,一般人群的乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen,HBsAg）阳性率为9.09%,随着HBV疫苗纳入计划免疫,一些大城市HBV感染率已有所降低,但HBV感染仍然是影响人类健康的重大公共问题之一。HBV感染与肝细胞凋亡关系密切,Canbay A等认为在慢性HBV感染中,病毒为保持持续感染,宿主则为清除病毒而进行双方的较量,就病毒而言,在其增殖阶段,抑制肝细胞凋亡,可使其在细胞内持续感染,大量繁殖;就宿主而言,细胞凋亡是限制病毒复制的自然细胞反应。凋亡细胞迅速被吞噬而无毒性物质漏出时,不会发生炎症反应。但在病理条件下凋亡细胞数过多,超过吞噬细胞吞噬能力,凋亡细胞自发性裂解而内容物释放,将会导致炎症反应及组织损伤。在实际研究中,HBV感染与肝细胞凋亡之间的关系相当复杂,多种因素参与了肝细胞凋亡的调节,其中包括HBV病毒蛋白,目前研究较多的是HBx蛋白,对前C/C蛋白与肝细胞凋亡的关系研究较少。HBV全基因组前C/C区开放读框编码多种病毒蛋白,主要包括HBcAg（p21）、HBeAg（p17）、25kD（p25）蛋白、22kD（p22）蛋白等,其中HBV/p22蛋白是由p25蛋白在内质网上切割信号肽后生成,HBV/p22蛋白在细胞内组织蛋白酶作用下水解C-端肽段,形成17 kD的HBeAg（p17）分泌到细胞外,但部分HBV/p22蛋白滞留于胞浆内。长期以来,人们认为HBV前C/C区蛋白对细胞没有生物调控作用,近几年的研究发现C区基因编码的核心抗原可以调控细胞内的基因表达。HBcAg能反式抑制IFN-β基因转录,从而抑制细胞内IFN蛋白的表达;它能反式抑制MXA基因启动子活性,EMSA证明HBcAg与MXA基因启动子有直接相互作用。在我们的前期实验中,我们通过构建HBcAg表达载体并筛选HepG2细胞克隆株进行研究,结果表明HBcAg表现为抑制FasAb及IFNα诱导的HepG2细胞凋亡效应。HBV/p22蛋白含有核心抗原的全部氨基酸序列,因此该蛋白也可能参与抑制细胞凋亡。TNFα在体内主要存在于肝脏中,约占全身30%,TNFα是重症肝炎发病的核心细胞因子之一,但体外研究表明,TNFα诱导肝细胞凋亡需要某些因素协同作用,即TNFα诱发细胞凋亡需要其他因素在转录水平进行阻遏。放线菌素D（Act-D）是一种RNA合成抑制剂,Act-D处理后肝癌细胞对TNFα的刺激变得敏感,从而导致凋亡。有报道HBV/p22蛋白的AA23-73部分与Fas死亡结合蛋白（FADD）的死亡效应区（DED）有23.5%的同源性,FADD是TNFα诱导细胞凋亡的重要通路蛋白,因此HBV/p22蛋白可能通过影响Fas—FasL介导的凋亡途径,从而抑制TNFα诱导的细胞凋亡。本研究通过体内、体外试验较为深入的研究HBV/p22蛋白对肝细胞凋亡的影响。研究目的1、在体外实验中研究HBV/p22蛋白影响Act-D、TNFα诱导的HepG2细胞凋亡。2、在体内实验中研究HBV/p22蛋白影响Act-D、TNFα诱导的HepG2瘤体细胞凋亡。研究方法1、鉴定HepG2-pCDNA3.1+HBV/p22细胞株稳定表达HBV/p22蛋白:HepG2-pCDNA3.1+、HepG2-pCDNA3.1+HBV/p22细胞株分别以1×10～6/孔接种于六孔板,3天后收集上清,雅培试剂检测HBeAg表达,HBeAg含量S/CO参考值p22蛋白的Western blot检测。2、HBV/p22蛋白影响HepG2细胞凋亡的体外研究:采用流式细胞术及原位末端标记技术（terminal deoxynucleotide mediated nick end labeling TUNEL）检测HBV/p22蛋白影响Act-D、TNFα诱导的HepG2细胞凋亡。使用终浓度为333nM Act-D及1001μg/L TNFα诱导HepG2-pCDNA3.1+HBV/p22细胞凋亡,同时以HepG2-pCDNA3.1+细胞作为对照,刺激时间6h后,使用流式细胞术（FlowCytometry,FCM）,利用Annexin V-FITC双染色,检测细胞凋亡率;同样方法培养和诱导细胞凋亡后,丙酮固定,样本通透性处理后,使用TUNEL技术检测细胞凋亡率,DAB显色液显色,倒置显微镜下观察。阳性细胞判断标准:细胞核呈棕黄色染色为阳性,细胞核无棕黄色染色为阴性,随机取5个视野,高倍镜下（400×）观察记数阳性细

关键词：肝炎病毒乙型前C/C蛋白 p22蛋白肝细胞凋亡

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非洲猪瘟病毒p22蛋白的生物信息学分析

贵州畜牧兽医 2023年第2期47卷 50-55页

作者：杨芸芸蔡海情冯轶刘馨张黔东袁阳王微张人俊张霞文明贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州贵阳550025 贵州省动物疫病预防控制中心贵州贵阳550008

为了对靶向研制非洲猪瘟病毒(ASFV)疫苗提供理论参考依据,利用NCBI数据库及相关软件对该病毒Kp177R基因编码的p22蛋白进行理化性质、疏水性、抗原性和抗原决定簇、信号肽和跨膜结构域、高级结构、磷酸化和糖基化位点进行分析和预测。结... 详细信息

为了对靶向研制非洲猪瘟病毒(ASFV)疫苗提供理论参考依据,利用NCBI数据库及相关软件对该病毒Kp177R基因编码的p22蛋白进行理化性质、疏水性、抗原性和抗原决定簇、信号肽和跨膜结构域、高级结构、磷酸化和糖基化位点进行分析和预测。结果:p22蛋白为亲水性不稳定蛋白,存在跨膜结构域,不含信号肽;p22蛋白的抗原指数为0.578 6,有7个B细胞优势抗原表位,具有良好的免疫原性;该基因表达蛋白的结构元件主要为α螺旋、β转角、延伸链和无规则卷曲等构成,抗原性及氨基酸表面可及性较好;取阈值0.481 6时位于113处的丝氨酸存在1个N-糖基化位点,阈值为0.5时第7、9、55、76、79、119、136位氨基酸处有磷酸化位点。结论:p22蛋白是不稳定、没有信号肽的跨膜亲水蛋白,为可能抗原且具有7个抗原决定簇,无规则卷曲在高级结构中含量最高,同时拥有多个磷酸化位点和1个糖基化位点。

关键词：非洲猪瘟病毒 Kp177R基因 p22蛋白生物信息学分析

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弓形虫表面抗原p22蛋白的研究进展

中国寄生虫病防治杂志 2005年第1期18卷 67-70页

作者：陈义忠林建银福建医科大学免疫学系福建福州350004

弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性寄生于人和多种动物组织有核细胞内的原虫,呈世界性分布.近年来关于弓形虫细胞表面抗原作为诊断试剂及免疫疫苗的双重潜在价值得到广泛研究,主要发现有5种表面抗原:p22、p23、p30、p35、p43.其中p22基... 详细信息

弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性寄生于人和多种动物组织有核细胞内的原虫,呈世界性分布.近年来关于弓形虫细胞表面抗原作为诊断试剂及免疫疫苗的双重潜在价值得到广泛研究,主要发现有5种表面抗原:p22、p23、p30、p35、p43.其中p22基因依据克隆的顺序也被称为SAG2.本文就弓形虫重要抗原p22的基因和蛋白结构,及该抗原在弓形虫虫株的分型、血清诊断、疫苗方面的研究作简要介绍.

关键词：弓形虫表面抗原 p22蛋白蛋白结构膜蛋白

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乙型肝炎病毒e抗原的生物学作用

胃肠病学和肝病学杂志 2004年第1期13卷 76-78页

作者：王建军成军解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.它的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有4个主要的开放阅读框架,分别负责... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.它的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有4个主要的开放阅读框架,分别负责编码核心抗原(pre-C/C)、核酸聚合酶(p)、表面抗原(pre-S/S)和X蛋白(X).乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)是核壳蛋白的分泌型,是前-C和C区段的基因产物,在嗜肝DNA病毒间和感染的各例间高度保守.因前-C区的开始有分泌信号,可自感染的肝细胞分泌而成为功能性蛋白.HBcAg由同一基因的第2个启始密码子(ATG)转译,因无分泌信号,故主要是结构性蛋白.HBcAg与HBeAg有很长的共同序列,在T细胞水平,HBcAg与HBeAg有高度交叉反应性[1].

关键词：乙型肝炎病毒 e抗原生物学作用免疫应答基因突变 p22蛋白