非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作     者：矫健 李建达 韩先杰 张琳 张玉玉 任素芳 刘飞 陈智 Nataliia Hrabchenko 张文娟 于江 吴家强 Jiao Jian;Li Jianda;Han Xianjie;Zhang Lin;Zhang Yuyu;Ren Sufang;Liu Fei;Chen Zhi;Nataliia Hrabchenko;Zhang Wenjuan;Yu Jiang;Wu Jiaqiang

作者机构：青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室山东济南250100 山东碧蓝生物科技有限公司山东泰安271400 

出 版 物：《山东农业科学》 (Shandong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第55卷第10期

页      面：140-145页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：山东省重点研发计划项目(2020CXGC010801,2022TZXD0041,2022CXPT010,2021LZGC001) 山东省现代农业产业技术体系(SDAIT-08-01) 山东省农业科学院农业科技创新工程项目(CXGC2023F10,CXGC2023A21,CXGC2023A21) 泰山学者工程项目 

主　　题：非洲猪瘟病毒 p22蛋白 单克隆抗体 原核表达 

摘      要：非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的一种高度传染性病毒性疾病,发病率和死亡率高达100%,对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击。p22蛋白为ASFV的结构蛋白,本研究构建了重组原核表达质粒pET-32a-p22,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组p22蛋白并纯化,经Western blot鉴定证实重组p22蛋白与ASFV阳性血清有良好的免疫反应性。利用重组p22蛋白免疫Balb/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌p22蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株2D6和5E7。经抗体亚型鉴定两株抗体均为IgG1型;经Western blot鉴定,两株抗体能够特异性识别过表达的p22蛋白。综上,本研究成功表达并纯化了p22重组蛋白,制备了p22单克隆抗体,为进一步探讨p22蛋白的结构功能及其在ASFV中的感染致病机制提供了基础条件。