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Inhibitory actions of mibefradil on steroidogenesis in mouse Leydig cells： involvement of Ca^2＋ entry via the T-type Ca^2＋ channel

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Asian Journal of Andrology 2010年第6期12卷 807-813页

作者： Jae-Ho Lee Jong-Uk Kim Changhoon Kim Churl K. Min Institute of Tissue Regeneration Engineering Dankook University Cheonan 330714 South Korea Department of Molecular Sciences and Technology Ajou University Suwon 443749 South Korea Division of Cardiology Department of Medicine Emory University Atlanta GA 30322 USA Department of Biological Sciences Aj ou University Suwon 443749 South Korea

Intracellular cAMP and Ca^2＋ are involved in the regulation of steroidogenic activity in Leydig cells, which coordinate responses to luteinizing hormone （LH） and human ehorionic gonadotropin （hCG）. However, the identification of Ca^2＋ entry implicated in Leydig cell steroidogenesis is not well defined. The objective of this study was to identify the type of Ca^2＋ channel that affects Leydig cell steroidogenesis. In vitro steroidogenesis in the freshly dissociated Leydig cells of mice was induced by hCG incubation. The effects of mibefradil （a putative T-type Ca^2＋ channel blocker） on steroidogenesis were assessed using reverse transcription （RT）-polymerase chain reaction analysis for the steroidogenic acute regulatory protein （STAR） mRNA expression and testosterone production using radioimmunoassay. In the presence of 1.0 mmol L-1 extracellular Ca^2＋, hCG at 1 to 100 IU noticeably elevated both StAR mRNA level and testosterone secretion （P 〈 0.05）, and the stimulatory effects of hCG were markedly diminished by mibefradil in a dose-dependent manner （P 〈 0.05）. Moreover; the hCG-induced increase in testosterone production was completely removed when external Ca^2＋ was omitted, implying that Ca entry is needed for hCG-induced steroidogenesis. Furthermore, a patch-clamp study revealed the presence of mibefradil-sensitive Ca^24- currents seen at a concentration range that nearly paralleled those inhibiting steroidogenesis. Collectively, Our data provide evidence that hCG-stimulated steroidogenesis is mediated at least in part by Ca^2＋ entry carried out by the T-type Ca^2＋ channel in the Leydig cells of mice.

关键词： Leydig cells mibefradil STAR steroidogenesis T-type Ca^2+ channel

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Comparison of cardioprotective effects of mibefradil and ramipril in stroke-prone spontaneously hypertensive rats

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Acta Pharmacologica Sinica 2004年第6期 61-66页

作者： Alexander REINECKE,Marc DORENKAMP,Christain STORZ,Havvo BITTERLING,Susanne PENZ,Jack CLEUTJENS,Mat JAP DAEMEN,Reichiger SIMON,Thomas UNGER Institute of Pharmacology University of Kiel 24105 Kiel Germany Institute of Pharmacology University of Kiel 24105 Kiel Germany Clinic of Cardiology Institute of Pharmacology University of Kiel 24105 Kiel Germany Institute of Pharmacology University of Kiel 24105 Kiel Germany University of Kiel Department of Pathology University ofMaastricht Maastricht The Netherlands Clinic of Cardiology University of Kiel 24105 Kiel Germany 24105 Kiel Institute of Pharmacology University of Kiel 24105 Kiel Germany Germany Institute of Pharmacology University of Kiel 24105 Kiel Germany

AIM: To elucidate the cardioprotective effects of T-type calcium channel blocker mibefradil and compare with that of the angiotensin-converting enzyme inhibitor ramipril in a stroke-prone spontaneously hypertensive rats (SHR- SP) model of congestive heart failure (CHF) after myocardial infarction (MI). METHODS: SHR-SP rats were subjected to permanent ligation of the left anterior decending coronary artery. Treatment with mibefradil (10 mg·kg-1·d-1), ramipril (10 mg·kg-1·d-1), or placebo was initiated 4 weeks before surgery and continued up to 6 weeks after induction of MI. Sham-operated rats served as controls. RESULTS: In placebo-treated MI rats, six weeks after MI, left ventricular circumference, inner diameter, and left ventricular end-diastolic pressure (LVEDP) were increased, whereas mean arterial blood pressure (MAP) and maximum rate of rise of left ventricular pressure (dp/ dtmax) were decreased compared with sham-operated controls (P05), and dp/dtmax was improved (Pmibefradil-treated MI rats, heart weight, heart weight to body weight ratio were slightly but not signifi- cantly reduced, LVEDP was slightly elevated compared with placebo-treated MI rats, and was elevated (Pmibefradil. Moreover, 6 weeks after MI, mibefradil treatment results in a slight rise in LVEDP compared with placebo-treated rats. Therefore, treatment with mibefradil might be deleterious rather than beneficial compared with ramipril or even placebo treatment in experim

关键词： mibefradil ramipril angiotensin-converting enzyme inhibitors calcium channel blockers myocar- dial infarction heart failure cardiac remodeling ventricular function SHR-SP rats

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mibefradil可改善肥胖小鼠骨骼肌的质量、功能和结构

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南方医科大学学报 2022年第7期42卷 1032-1037页

作者：吴江豪吴永鑫杨韵菲余靖傅饶孙悦肖谦重庆医科大学附属第一医院老年病科重庆400016

目的探讨mibefradil对肥胖小鼠骨骼肌质量、功能及结构的影响。方法将15只6周龄C57BL/6小鼠随机分为普通饮食组(Con组,n=5)、高脂饮食组(HFD组,n=5)和高脂饮食+mibefradil干预组(HFD+Mibe组,n=5)。电子抓力仪测量小鼠前肢抓力,DXA分析... 详细信息

目的探讨mibefradil对肥胖小鼠骨骼肌质量、功能及结构的影响。方法将15只6周龄C57BL/6小鼠随机分为普通饮食组(Con组,n=5)、高脂饮食组(HFD组,n=5)和高脂饮食+mibefradil干预组(HFD+Mibe组,n=5)。电子抓力仪测量小鼠前肢抓力,DXA分析小鼠后肢肌肉含量,GPO-PAP法测定甘油三酯和总胆固醇,HE染色观察小鼠腓肠肌肌纤维横截面积,Western blot和免疫荧光技术检测自噬水平变化,Westernblot检测Akt/mTOR信号通路的激活情况。结果与Con组相比,HFD组体质量增加,相对抓力、后肢肌肉比率降低(Pmibefradil干预后体质量减轻,相对抓力升高、后肢肌肉比率升高(Pmibefradil干预后平均肌纤维横截面积得到改善(Pmibefradil干预后LC3Ⅱ蛋白表达水平降低,P62蛋白表达水平升高,AKT和mTOR的磷酸化表达升高(Pmibefradil干预可以抵抗高脂诱导的体质量增加,改善肥胖小鼠的肌肉质量和功能,这可能与其改善脂代谢和通过激活AKT/mTOR信号通路来抑制肥胖诱导的过度自噬有关。

关键词： mibefradil T型钙通道肥胖骨骼肌自噬

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mibefradil通过下调FoxO1表达改善HepG2细胞的胰岛素抵抗

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第三军医大学学报 2017年第20期39卷 1973-1979页

作者：马欢严军张克斌徐梓辉第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学新桥医院中心实验室重庆400037 第三军医大学新桥医院中西医结合科重庆400037

目的探索mibefradil在体外对胰岛素抵抗HepG2细胞的作用。方法将HepG2细胞分为对照组、棕榈酸盐(Palmitate,PA)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型组、药物溶剂(DMSO)组、低剂量(0.025μmol/L)mibefradil组、高剂量(0.05μmol/L)mibefradil组,通过检测各组糖原合成及葡萄糖消耗,观察mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的改善作用。用qRT-PCR、Western blot检测各组Fox O1,糖异生、糖原分解限速酶,即:磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase)的mRNA、蛋白相对表达量,明确转录因子Fox O1及其靶基因的表达水平。结果相比于对照组,HepG2细胞胰岛素抵抗模型组的糖原合成量[(3.28±0.74)μg/μL vs(9.14±0.33)μg/μL,Pmibefradil干预后,胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成及葡萄糖消耗得到明显改善,且高剂量组的糖原合成[(7.09±0.60)μg/μL vs(5.73±0.16)μg/μL,Pmibefradil可改善HepG2细胞的胰岛素抵抗。qRT-PCR及Western blot检测结果表明,胰岛素抵抗HepG2细胞的Fox O1、PEPCK、G6Pase的表达量均显著增加(Pmibefradil干预后,其表达量呈剂量依赖性下降(Pmibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞具有改善作用,此作用可能与下调Fox O1的表达有关。

关键词： mibefradil 胰岛素抵抗 HepG2细胞 FoxO1

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mibefradil抑制高糖诱导的胰岛素分泌作用及其机制的初步研究

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第三军医大学学报 2015年第7期37卷 660-665页

作者：游成姗严军李明徐梓辉第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 杜兰大学生理学教研室第三军医大学新桥医院中西医结合科重庆400037

目的初步探讨mibefradil对高糖作用下胰岛细胞胰岛素分泌的作用及其机制。方法体外培养大鼠胰岛瘤β细胞株(INS-1),将INS-1细胞分为对照组(11.1 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖)、药物组(11.1 mmol/L葡萄糖+1μmol/L Mibefra... 详细信息

目的初步探讨mibefradil对高糖作用下胰岛细胞胰岛素分泌的作用及其机制。方法体外培养大鼠胰岛瘤β细胞株(INS-1),将INS-1细胞分为对照组(11.1 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖)、药物组(11.1 mmol/L葡萄糖+1μmol/L mibefradil、1μmol/L NNC 55-0396、10μmol/L尼卡地平)、高糖+药物组(33.3 mmol/L葡萄糖+1μmol/L mibefradil、1μmol/L NNC 55-0396、10μmol/L尼卡地平),先用不同浓度葡萄糖孵育细胞48 h,再按分组加入药物继续孵育24 h。采用放射免疫法检测细胞培养上清胰岛素含量,RT-PCR及Western blot检测T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基表达。结果与对照组相比,高糖组能够明显增加细胞胰岛素分泌(P0.05);与高糖组相比,高糖+药物组可不同程度降低INS-1细胞胰岛素分泌,其中mibefradil组显著降低胰岛素分泌(Pmibefradil可能通过下调胰岛细胞T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基表达抑制高糖作用下INS-1细胞胰岛素分泌。

关键词： mibefradil 胰岛细胞胰岛素分泌糖尿病

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mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究

Mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究

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作者：游成姗第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景2型糖尿病是胰岛β细胞的功能障碍和外周组织的胰岛素抵抗为主要特征的一类代谢性疾病。长期高血糖对胰岛细胞的胰岛素合成、分泌以及存活等均产生不利的影响,其中涉及多种机制,包括体内钙离子平衡的破坏[1]。钙离子平衡的紊乱... 详细信息

研究背景2型糖尿病是胰岛β细胞的功能障碍和外周组织的胰岛素抵抗为主要特征的一类代谢性疾病。长期高血糖对胰岛细胞的胰岛素合成、分泌以及存活等均产生不利的影响,其中涉及多种机制,包括体内钙离子平衡的破坏[1]。钙离子平衡的紊乱对胰岛β细胞生长/功能和胰岛素分泌信号通路均会产生抑制作用[2]。mibefradil作为选择性T型钙通道拮抗剂,对T型钙离子通道的阻滞效应约为其对L型钙离子通道阻滞效应的30-100倍,最早作为抗心绞痛、降压药物应用于临床,目前该药物广泛用于肿瘤、疼痛、癫痫等方面的研究,在糖尿病方面研究尚不深入。T型钙通道是低电压激活钙离子通道,该通道仅需一个较低的电压(约-70mv)即可被激活,因此是唯一一类允许钙离子在膜静息电位内流的通道[3]。本课题组既往研究发现T型钙通道在db/db小鼠(2型糖尿病模型小鼠,瘦素受体自发突变导致极度肥胖、多食、消渴、多尿等)肝脏、脑组织中表达明显高于野生型小鼠,mibefradil可明显降低db/db小鼠的血糖及血脂水平,但对正常小鼠则无明显作用[4]。迄今为止,T型钙通道特别是mibefradil在胰岛β细胞中的作用仍不清楚。因此本研究拟将高糖培养大鼠胰岛素瘤细胞株(INS-1)作为研究对象,高糖培养细胞构建细胞高糖模型,mibefradil干预INS-1细胞,采用NNC 55-0396(NNC,仅拮抗T型钙离子通道)、尼卡地平(Nic,仅拮抗L型钙离子通道)作为对照药物,观察药物对INS-1细胞凋亡、胰岛素分泌的作用,在此基础上进一步观察其对INS-1细胞T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基表达的作用,以期初步探讨mibefradil对INS-1细胞功能的作用及其可能的机制。方法:本课题将INS-1细胞作为研究对象,利用CCK-8法检测细胞增殖确定最佳高糖及药物(mibefradil、NNC 55-0396、尼卡地平)作用浓度及时间后,高浓度葡萄糖(33.3mmol/L)处理细胞构建细胞高糖模型。将细胞分为正常培养组、高糖组、药物组、高糖+药物组,流式细胞技术检测细胞凋亡、放射免疫法检测细胞胰岛素分泌,以观察药物对INS-1细胞凋亡及胰岛素分泌的作用,RT-PCR、Western-Blot检测T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基基因及蛋白表达观察药物对其表达的作用。主要结果:1.较正常培养组,33.3mmol/L葡萄糖孵育细胞72h时,显著抑制细胞增殖(Pmibefradil、1μmol/L NNC 55-0396、10μmol/L尼卡地平作用24小时对细胞增殖无明显抑制(P>0.05),在此基础上增加药物浓度或延长作用时间均可显著抑制细胞增殖(P0.05)。3.较正常培养组,药物组细胞基础胰岛素分泌(3.3mmol/L葡萄糖刺激)及葡萄糖刺激胰岛素分泌(16.7mmol/L葡萄糖刺激)均无显著差异(P>0.05)。较高糖组,只有高糖+mibefradil组显著降低细胞胰岛素分泌(基础分泌以及葡萄糖刺激胰岛素分泌)(Pmibefradil组T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基的基因及蛋白表达无显著差异(P>0.05);而与高糖培养组相比,高糖+Mibefrail组显著降低T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基的基因及蛋白表达(Pmibefradil、NNC 55-0396、尼卡地平对高糖诱导的INS-1细胞凋亡无明显保护作用。***可显著抑制高糖作用下INS-1细胞胰岛素分泌,同时对正常培养的INS-1细胞无此作用;3.高糖可增加INS-1细胞中T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基基因及蛋白表达;***可显著抑制高糖培养下INS-1细胞T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基的基因及蛋白表达,而对正常培养的INS-1细胞无明显作用。上述结果提示mibefradil对正常培养下INS-1细胞胰岛素分泌以及cav3.1、cav3.2亚基基因及蛋白表达均无明显作用,仅降低高糖培养下INS-1细胞胰岛素分泌、T型钙通道cav3.1、cav3.2亚基表达,提示Mibefraidl可能通过拮抗T型钙通道抑制高糖作用下INS-1细胞胰岛素分泌,为深入研究T型钙通道及Mibefra

关键词： mibefradil 胰岛细胞细胞凋亡胰岛素分泌

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mibefradil通过CaMKⅡ-FoxO1通路改善糖代谢机制的初步研究

Mibefradil通过CaMKⅡ-FoxO1通路改善糖代谢机制的初步研究

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作者：李沛霖中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）,主要是由于代谢障碍所导致的慢性疾病,目前已从少见病变成一个全球流行的严重性疾病,特别是2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）在所有人群中的流行率都在急剧上升。由于T2DM发病机理... 详细信息

研究背景:糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）,主要是由于代谢障碍所导致的慢性疾病,目前已从少见病变成一个全球流行的严重性疾病,特别是2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）在所有人群中的流行率都在急剧上升。由于T2DM发病机理复杂,治疗手段有限是T2DM的临床治疗的新瓶颈。所以进一步探明T2DM发生发展的具体分子机制,可以为其临床治疗找到新的治疗思路和治疗靶标。胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）是T2DM发生发展的核心环节。研究证实,在T2DM发病过程中会出现持续性的钙离子紊乱,而用钙通道拮抗剂对糖尿病动物模型进行治疗后可以改善胞内调节紊乱作用,并通过调节细胞钙离子异常改善糖代谢,因此,深入探究胰岛素抵抗状态下的钙离子紊乱,能给临床治疗T2DM带来新思路。mibefradil能高选择性地阻滞T型钙通道,有研究证明mibefradil能够改善糖尿病小鼠血糖,可能是通过阻滞T型钙通道而达成的。胞内钙离子浓度升高与钙调蛋白结合会磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶2（Calcium/Calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ）,增加肝糖输出,CaMKⅡ的翻译后修饰可以增强与糖尿病发病密切相关的转录因子FoxO1的细胞核定位。生理条件下胰岛素可以激活FoxO1的磷酸化并使得FoxO1向胞浆移动,调控糖异生的关键限速酶:葡萄糖-6-磷酸激酶（Glucose-6-phosphokinase,G6Pase）及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（Phosphoenolpyruvate Carboxykinase,PEPCK）表达下调,糖异生过程减弱,血糖下降。因此本课题将通过研究mibefradil调节CaMKⅡFoxO1通路在糖尿病糖代谢中的作用及其机制,初步探寻改善钙离子紊乱与调节糖代谢的关系,进一步阐述糖尿病的发病机制,为临床治疗预防糖尿病找寻可能的新方向。方法:1.探究mibefradil处理后能否改善STZ/HFD小鼠糖代谢并保护糖尿病靶器官。采用STZ联合高脂饲料喂养构建STZ/HFD小鼠模型,腹腔注射mibefradil治疗一周后,检测其对各组小鼠基础糖代谢指标,糖尿病受累靶器官如心脏、肝脏的病理变化。2.阐明mibefradil通过CaMKⅡ-FoxO1通路改善糖代谢。采用PA诱导IR模型,检测糖原合成,葡萄糖消耗,CaMKⅡ-FoxO1信号通路相关基因和蛋白表达水平,及其磷酸化水平。结果:***能改善链脲佐菌素/高脂喂养（STZ/HFD）小鼠糖代谢并保护心肌细胞。mibefradil能够降低STZ/HFD小鼠血糖,增加胰岛素敏感性,增加肝糖原合成,减少肝细胞炎性浸润和脂肪样变,改善高血糖情况下的心肌肥大和心肌纤维化***通过CaMKⅡ-FoxO1通路改善糖代谢。mibefradil药物治疗后可增加IR细胞糖原合成,增加细胞的葡萄糖消耗,降低糖异生调控转录因子FoxO1及关键酶的基因及蛋白表达水平,能降低胞内钙离子浓度,下调CaMKⅡ的磷酸化水平,同时增加IR细胞的Akt及FoxO1的磷酸化水平,减少FoxO1的核定位从而改善细胞的胰岛素抵抗。结论:mibefradil具有降低2型糖尿病高血糖的作用,可保护糖尿病状态下肝脏和心脏组织,该效应是通过改善细胞内钙离子紊乱,调节CaMKⅡ/AKT/FoxO1通路实现的。

关键词： mibefradil 糖尿病(DM) 胰岛素抵抗(IR) 钙离子/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) FoxO1 糖代谢

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mibefradil在高糖诱导的心肌肥大中的作用机制研究

Mibefradil在高糖诱导的心肌肥大中的作用机制研究

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作者：赵灵巩中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopathy,DCM)是2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)的并发症之一,是排除其他病因,仅以高血糖、胰岛素抵抗和代偿性高胰岛素血症引起的,以心肌细胞代谢紊乱为特征的心肌病变,虽然临床和流... 详细信息

研究背景糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopathy,DCM)是2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)的并发症之一,是排除其他病因,仅以高血糖、胰岛素抵抗和代偿性高胰岛素血症引起的,以心肌细胞代谢紊乱为特征的心肌病变,虽然临床和流行病学证据都支持这一概念,但是目前对DCM的治疗依然以对症治疗为主,尚无针对这一疾病的药物问世。因此,对DCM的发病机制的进一步研究,可以深化对DCM的认识,有助于寻找DCM的药物治疗靶点。mibefradil是一种特异性的T型钙离子通道阻滞剂。T型钙通道是广泛存在于神经、肾脏、平滑肌、血管内皮、心脏等多个器官的一种电压门控钙通道,具有低电压、失活速度快、单通道等特点,是人体内唯一的低电压钙通道。T型钙离子通道主要有Cav3.1(α1G)、CaV3.2(α1H)、Cav3.3(α1I)三种亚型。在胚胎时期,心脏的T型钙通道大量表达,与心脏的生长发育相关。机体成年后,心室的T型钙通道表达几乎消失,而心房中存在少量T型钙通道,参与窦房结4期缓慢去极化。研究表明,在一些病理状态下,如高血压心脏病和心衰,T型钙通道可在心室中大量再表达,而对T型钙通道进行敲除或抑制,可以改善高血压引起的心肌肥大、降低猝死率。离体研究显示,心肌细胞的T型钙通道在25 mM葡萄糖浓度培养基环境下表达水平显著高于5 mM葡萄糖浓度的培养基,这表明高葡萄糖环境会引起心肌细胞T型钙通道的表达上调。这一现象,提示,糖尿病高血糖环境引起DCM,可能是由于T型钙通道表达上调引起下游信号通路活性改变而导致的。目的与方法第一部分实验:探究高糖模型模拟体内高血糖环境的最佳处理时间。首先培养H9c2大鼠心肌细胞,实验分为5组:对照组,高糖处理12 h组,高糖处理24 h组,高糖处理48 h组,高糖处理72 h组,分别用CCK-8法检测细胞生存率;检测心肌肥大水平心肌肥大相关基因表达和心肌细胞表面积的改变。第二部分实验:根据第一部分实验结果确定高糖模型所需高糖处理的最佳时长。采用T型钙离子通道抑制剂mibefradil作为处理药物。实验分为四组:对照组,高糖+溶剂组(高糖组),高糖+mibefradil低剂量组(低剂量组),高糖+mibefradil高剂量组(高剂量组)。在倒置显微镜下观察细胞生长状态;CCK-8检测各组细胞生存率;检测心肌肥大水平(心肌肥大相关基因表达和心肌细胞表面积);检测细胞自噬情况;检测心肌肥大信号通路和自噬信号通路活化水平。第三部分实验:通过药物干预H9c2大鼠心肌细胞在各组的自噬水平,观察mibefradil是否通过PI3K/Akt/m TOR信号通路改变自噬而改善心肌细胞肥大。实验分为5组,对照组,高糖+溶剂组(高糖组),高糖+mibefradil组(mibefradil组),高糖+mibefradil+MK2206预处理组(MK2206组),高糖+mibefradil+rapamycin预处理组(Rapamycin组)。在倒置显微镜下观察细胞生长状态;CCK-8检测各组细胞生存率;检测心肌肥大水平(心肌肥大相关基因表达和心肌细胞表面积);检测细胞自噬情况。通过电镜观察细胞内线粒体肿胀和自噬小体数量情况。检测心肌肥大信号通路和自噬信号通路活化水平。结果1.与对照组相比,高葡萄糖浓度(30 mmol/L)培养基环境处理12 h、24 h后,细胞存活率没有显著改变(P>0.05)。而培养48 h和72 h后,细胞存活率均显著下降(P0.05)。***可显著降低高糖环境下H9c2心肌细胞心肌肥大基因ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平(Pmibefradil以剂量依赖性方式缩小了高糖处理的H9c2心肌细胞表面积。与对照组相比,高糖环境的H9c2心肌细胞p62蛋白水平降低,自噬小体数量增加(Pmibefradil显著升高了高糖环境的H9c2心肌细胞的p62蛋白表达量,减少了自噬小体的数量(Pmibefradil对其具有显著的抑制作用(P<0.05)。同时高糖环境轻度激活了PI3K/Akt/mTOR信号通路,对比对照组,PI3K、Akt和mTOR的总蛋白含量没有改变,但是磷酸化水平轻度升

关键词： T型钙离子通道 mibefradil 糖尿病心肌病自噬心肌肥大

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mibefradil对db/db鼠的降糖作用及其机制初步研究

Mibefradil对db/db鼠的降糖作用及其机制初步研究

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作者：路玉洁第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景: 糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一组因长期慢性高血糖导致机体外周组织胰岛素敏感性降低，伴或不伴胰岛β细胞合成胰岛素能力缺陷的内分泌性疾病。现有许多研究证实糖尿病患者存在细胞内钙离子调节紊乱，新近研究表明，... 详细信息

研究背景: 糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一组因长期慢性高血糖导致机体外周组织胰岛素敏感性降低，伴或不伴胰岛β细胞合成胰岛素能力缺陷的内分泌性疾病。现有许多研究证实糖尿病患者存在细胞内钙离子调节紊乱，新近研究表明，胰岛β细胞属电兴奋性细胞，β细胞膜ATP依赖的钙通道及钾通道是影响胰岛素分泌的重要离子通道，在人类和啮齿类动物中钙离子通道影响葡萄糖诱导胰岛素分泌水平。钙离子通道阻滞剂是一种通过阻断细胞膜钙离子通道，抑制胞外的钙离子内流，使胞内钙离子水平降低，继而调节靶器官功能的药物。目前，已有少数关于L型钙离子通道阻滞剂对糖尿病影响的报道，但尚未有将T型钙离子通道阻滞剂应用于糖尿病模型，对其降糖作用的研究报道。本研究拟利用T型钙离子通道阻滞剂Mibefardil、NNC55-0396以及L型钙离子通道阻滞剂nicardipine分别干预db/db鼠，观察对比其降糖效果，并深入了解Mibefardil对糖代谢相关指标及T型钙离子通道特异性亚基Cav3.1及Cav3.2的表达，并对其作用机制进行初步探讨。方法: 取8W鼠龄雄性野生型小鼠及db/db鼠各24只，分别按随机法分为4组（共8组）：野生安慰剂组、野生mibefradil干预组、野生NNC干预组、野生nicardipine干预组、db/db安慰剂组、db/db mibefradil干预组、db/db NNC干预组及db/db nicardipine干预组（n=6）。mibefradil与NNC组予30mg/(kg d)剂量，nicardipine组予25mg/(kg d)剂量，安慰剂组予等体积生理盐水，均腹腔注射，分早晚两次给药，干预1周;比较实验动物药物干预前后血糖、体质量、平均血压、心率及ITT的变化。重点观察mibefradil干预后胰岛素、糖化血红蛋白及总胆固醇的变化水平，并用免疫组织化学法及Western-Blot检测T型钙通道特异性亚基Cav3.1及Cav3.2表达水平。结果: （1）与db/db安慰剂组相比，药物干预后，db/db mibefradil组及db/db NNC干预组空腹血糖水平显著下降（Pmibefradil早于NNC产生降糖作用，且效果更明显;db/db nicardipine组无明显差异（P>0.05）;而野生安慰剂组和野生药物干预各组之间均无明显差异（均P>0.05）;（2）与db/db安慰剂组相比，药物干预后，db/db mibefradil组及db/db NNC干预组均体质量明显下降（Pmibefradil早于NNC产生作用;db/db nicardipine组无明显差异（P>0.05）;而野生安慰剂组和野生药物干预各组之间均无明显差异（均P>0.05）;（3）与db/db安慰剂组比较，药物干预后，db/db mibefradil组24h摄食量、基础胰岛素、糖化血红蛋白、胆固醇水平均明显下降（均Pmibefradil组均无明显差异（均P>0.05）;（4）db/db鼠在肝脏及脑组织中发现Cav3.1及Cav3.2较野生安慰剂组蛋白高表达（均P0.05）。结论: mibefradil具有降低2型糖尿病高血糖的作用，其降血糖作用不同于传统糖代谢途径，是通过调节电压依赖性的钙通道发挥作用的。

关键词：糖尿病 mibefradil db/db鼠血糖

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新型钙拮抗剂mibefradil的药理作用及临床应用

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中国临床药理学与治疗学 1999年第1期4卷 58-61页

作者：赵智深黄从新等湖北医科大学附一院心内科，湖北430060

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