检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=miRNA-2954"

共 2 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

mirna-2954在鸡睾丸发育中的作用及与相关基因的调控关系

MIRNA-2954在鸡睾丸发育中的作用及与相关基因的调控关系

引用

作者：于晓帆华中农业大学

学位级别：硕士

性腺的分化和发育是动物生长发育的一个重要过程。其中,睾丸的发育是雄性个体发育成熟、维持正常生殖生理活动的重要基础。许多在不同水平具有性别偏向性的因子构成复杂的调控网络,在性腺发育中起着重要调控作用。在鸡中,关于分化为睾... 详细信息

性腺的分化和发育是动物生长发育的一个重要过程。其中,睾丸的发育是雄性个体发育成熟、维持正常生殖生理活动的重要基础。许多在不同水平具有性别偏向性的因子构成复杂的调控网络,在性腺发育中起着重要调控作用。在鸡中,关于分化为睾丸或卵巢的性腺发育分子调控过程和机制的资料较少,还有待于进一步深入研究。本课题组在前期研究中筛选出了具有雄性偏向性的mirna-2954,并验证了FOXD1和YY1是它的两个靶基因。基于以上基础,本研究进一步在鸡中分析FOXD1基因在睾丸中的的表达谱和组织、细胞定位,并在支持细胞中分析mirna-2954与靶基因FOXD1和YY1、以及下游与睾丸发育相关的基因的调控关系,研究mirna-2954是否通过两个靶基因来调控睾丸的发育。本研究成果如下:1.通过定量PCR在成年雌雄鸡6种组织和不同胚胎期雌雄性腺中构建FOXD1的组织和时间表达谱,确认了FOXD1在成年鸡大脑、肾脏、性腺和鸡胚早期E6.5、E12.5、E18.5性腺中的雄性高表达模式。2.E6.5-18.5的睾丸组织切片的免疫组化和免疫荧光结果均表明FOXD1在鸡睾丸支持细胞中表达;且免疫荧光结果显示其表达与鸡睾丸支持细胞特异表达标记基因SOX9相同。鸡睾丸支持细胞爬片的免疫组化、免疫荧光显示FOXD1主要在支持细胞核中表达。3.在本实验室成功建立了完善的鸡睾丸原代支持细胞培养体系:采用胰酶/胶原酶二步消化法制备鸡睾丸原代支持细胞,并实现了原代支持细胞的传代、转染、冻存;通过油红O染色法鉴定了原代支持细胞的细胞质中含有大量脂肪颗粒的特征。4.在鸡睾丸支持细胞中成功进行mirna-2954的超表达和抑制试验,并通过定量PCR检测转染后细胞中靶基因YY1和FOXD1及DMRT1、SOX9、AMH、AR等睾丸相关基因的表达情况,结果表明mirna-2954抑制这些基因的表达,与前期DF-1细胞中靶基因抑制结果一致。5.在鸡睾丸支持细胞中进行FOXD1、YY1的siRNA干扰,然后利用定量PCR检测转染后睾丸发育相关基因的表达,除了DMRT1不受FOXD1调控,FOXD1抑制后的其他相关基因表达的结果与mirna-2954超表达的结果一致;而YY1的抑制引起DMRT1、SOX9、AMH的上调,初步表明YY1的抑制可能对mirna-2954有负反馈调节作用。以上结果揭示了靶基因FOXD1在鸡睾丸发育中的重要作用,在鸡睾丸支持细胞中确定了mirna-2954对靶基因FOXD1、YY1的抑制作用,通过靶基因的干扰说明了mirna-2954通过介导靶基因FOXD1、YY1来调控下游睾丸发育相关基因的表达,同时也可能受到YY1的反馈调节以维持稳态。

关键词：鸡 mirna-2954 FOXD1 YY1 睾丸发育

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

mirna-2954介导PI3K调控鸡缺硒性心肌凋亡和自噬的研究

miRNA-2954介导PI3K调控鸡缺硒性心肌凋亡和自噬的研究

引用

作者：刘琪东北农业大学

学位级别：硕士

硒是一种在人和动物体内维持机体生理功能和内环境稳态的重要的微量元素,对机体内分泌、免疫应答、炎症反应和生殖过程存在多重调控作用。硒缺乏可导致不同物种间的多种疾病,包括猪缺硒性桑葚心、鸡的脑软化、心肌损伤和人的克山病等等... 详细信息

硒是一种在人和动物体内维持机体生理功能和内环境稳态的重要的微量元素,对机体内分泌、免疫应答、炎症反应和生殖过程存在多重调控作用。硒缺乏可导致不同物种间的多种疾病,包括猪缺硒性桑葚心、鸡的脑软化、心肌损伤和人的克山病等等。此外,在禽类中,硒缺乏导致氧化应激增加和促进炎症发生,引起心肌细胞的凋亡、自噬和坏死发生,最终导致鸡的心肌损伤。近年来,mirnas作为一种高度保守的小分子RNA,真核生物中广泛存在,并在细胞死亡途径和多种疾病发生过程中的重要调控作用,因此,逐渐成为研究的热门话题,mirna在心肌疾病中的调控仍有待研究。该试验基于肉鸡的缺硒模型,对心肌组织的超微结构和组织病理学结果进行观察,利用mirna组学检测技术检测缺硒心肌组织中差异表达的mirnas,通过生物信息学分析,选择差异性最为显著且与心肌疾病存在密切关系的mirna-2954进行后续研究,利用细胞转染技术建立体外mirna-2954敲低/过表达模型,双荧光素酶报告基因测定用于确定靶向关系,并通过RT-PCR和Western印迹检测体外和体内的mRNA和蛋白质水平。自噬染色和流式细胞术用于检测心肌细胞中自噬和细胞凋亡的发生。主要研究结果如下:1)在该试验中,将180只雏肉鸡随机分成两组。向90只1日龄雏鸡喂食低硒(硒含量为0.008 mg/kg)日粮,另外90只雏鸡喂食正常日粮(硒含量0.2 mg/kg)30天。缺硒组肉鸡出现典型的缺硒症状显著的,剖检心脏有出血点,在超微结构观察结果中可见心肌出现典型自噬和凋亡特征,证实成功复制缺硒性鸡心肌损伤模型;病理组织学结果显示,与对照组相比,缺硒组心肌纤维明显肿胀、断裂以及明显的单核细胞浸润,证明缺硒可导致心肌组织的损伤。2)mirna组学结果表明,鸡心肌组织中共检测出468个mirna,其中缺硒组心肌组织与对照组相比,结果显示,有11个mirnas表达存在显著差异,其中7个mirnas上调,4个mirnas显著减少,mirna-2954的表达水平显著增加(Pmirna-2954的表达水平增加了3.5倍。上述结果证实mirna组学的可靠性以及缺硒过程中,鸡心肌组织中mirna-2954表达显著增加(Pmirna-2954的靶基因之一,应用细胞转染技术建立mirna-2954过表达和mirna-2954敲低的肉鸡原代心肌细胞,结果显示过表达组心肌细胞mirna-2954的表达上升75倍,敲低组心肌细胞内mirna-2954降低了55%。表明原代培养心肌细胞mirna-2954的过表达/敲低模型建立成功;随后结合双荧光素酶基因报告检测,RTPCR及Western blot等试验结果证实PI3K为mirna-2954的靶基因。4)缺硒肉鸡心肌组织内自噬相关基因IRS、RAS、MEK1、MEK2、ERK、TSC1、TSC2、ULK1、ATG13、LKB1、BECLIN1和LC3的mRNA表达水平与对照组相比显著上升,而抗自噬相关基因mTOR和AKT的表达水平显著下降(Pmirna-2954的心肌细胞自噬显著增加。流式细胞仪检测结果显示,过表达组心肌细胞凋亡率明显高于对照组;mirna-2954敲低组心肌细胞MDC染色和流式细胞术结果显示心肌细胞自噬和凋亡明显低于对照组。综上所述,mirna-2954过表达可在鸡心肌细胞内通过抑制PI3K的表达,导致PI3K/AKT通路下游促自噬和凋亡相关基因和蛋白表达上升,抗凋亡基因和蛋白的表达降低。机体缺硒过程中,肉鸡心肌组织中mirna-2954表达上调,并通过靶向抑制PI3K通路表达,导致心肌自噬和凋亡的发生,为缺硒引起的心肌疾病的诊断和治疗提供新的理论基础,为缺硒性心肌疾病的机制探究奠定基础。

关键词：硒缺乏 mirna-2954 心肌自噬凋亡

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：