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MicroRNA-200家族在肝脏疾病中的研究进展

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中国科技期刊数据库医药 2024年第10期 0047-0051页

作者：刘江丽杜贵永云南省曲靖市第二人民医院核医学科云南曲靖655000

肝脏疾病主要包括非酒精性脂肪性肝病、酒精性脂肪性肝病、肝癌等,其中非酒精性脂肪性肝病和肝癌是人们身体健康的潜在威胁,为了能找到更好的治疗方法,肝脏疾病的相关基因研究成为热点。MicroRNAs(mirnas/miRs)是长度约22个碱基的非编... 详细信息

肝脏疾病主要包括非酒精性脂肪性肝病、酒精性脂肪性肝病、肝癌等,其中非酒精性脂肪性肝病和肝癌是人们身体健康的潜在威胁,为了能找到更好的治疗方法,肝脏疾病的相关基因研究成为热点。MicroRNAs(mirnas/miRs)是长度约22个碱基的非编码单链RNA,mirnas参与了细胞的生长、分化、衰老、凋亡、自噬、迁移等多种发展过程。mirna-200家族是2500多个mirnas中之一,由miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429五个成员组成,据研究显示mirna-200家族主要作为癌症因子在如乳腺癌、肺癌、结直肠癌等不同类型的癌症中存在不一样的表达,促进癌症的发生发展。在脂肪性肝病的mirnas基因研究中发现mirna-200家族成员在促进脂肪变性、脂肪炎性改变、肝脏纤维化改变等有积极作用,在肝癌研究中发现上皮-间充质转化(EMT)是肿瘤进展的重要过程,而mirna-200家族是EMT的主要调节因子,参与抑制EMT、抑制癌症干细胞的自我更新和分化、调节细胞分裂和凋亡以及逆转化疗耐药,与肿瘤的转移和侵袭密切相关。mirna-200家族在脂肪性肝病和肝癌的临床研究中有重要意义,本文将从mirna-200家族在肝脏疾病中研究应用方面进行综述。

关键词： microRNA mirna-200家族非酒精性脂肪性肝病肝癌

microRNA-200家族调控AP-2α基因表达的研究

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microRNA-200家族调控AP-2α基因表达的研究

作者：吴渊湖南师范大学

学位级别：硕士

AP-2α是转录因子AP-2家族的成员之一,通过调控细胞增殖和凋亡过程中的多种基因起到肿瘤抑制的作用。已有研究表明：包括顺铂在内的多种化疗药物可诱导内源性AP-2a的表达,从而促进癌细胞凋亡、增强细胞对化疗药物的敏感性。与此相反,mic... 详细信息

AP-2α是转录因子AP-2家族的成员之一,通过调控细胞增殖和凋亡过程中的多种基因起到肿瘤抑制的作用。已有研究表明：包括顺铂在内的多种化疗药物可诱导内源性AP-2a的表达,从而促进癌细胞凋亡、增强细胞对化疗药物的敏感性。与此相反,microRNA-200(miR-200)家族(包括miR-200b、miR-200c和miR-429)在子宫内膜癌与食道癌中高表达,而它们的过度表达与细胞对顺铂的抗性相关。因此,本文研究miR-200家族对AP-2α基因的调控,以及与子宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的关系。我们通过生物信息学软件Target Scan、Microcosm和miRanda来预测AP-2a基因上的mirna结合位点,发现在AP-2a基因的3'端非翻译区(UTR)有一个miR-200b、miR-200c和miR-429共有的mirna应答元件(MRE),而且在这个应答元件中具有一个单核苷酸多态性位点(SNP) rs1045385。为了验证这个预测的MRE是否正确,我们分别将AP-2a基因的野生型3'UTR、MRE缺失的3'UTR以及MRE克隆进双荧光素酶报告基因载体pmirGLO中,并且分别与miR-200b, miR-200c和miR-429共转染进入HEK293细胞中,转染后24小时测定荧光素酶活性。结果表明：过表达miR-200b、miR-200c和miR-429都降低了MRE以及包含有MRE的野生型3'UTR的荧光素酶表达,而缺失了MRE的3'UTR的荧光素酶活性不受影响。这些结果表明miR-200b, miR-200c和miR-429确实能结合到AP-2α基因3'UTR的MRE上。为了研究miR-200家族对内源的AP-2a蛋白表达的影响,我们在AP-2a高表达的宫颈癌细胞系HeLa细胞中分别转染miR-200b, miR-200c和miR-429;在miR-200表达高的子宫内膜癌细胞系HEC-1-A细胞中转染miR-200b, miR-200c和miR-429的抑制剂。转染后36小时用Western blot检测内源AP-2α的表达。结果显示在AP-2α高表达的宫颈癌细胞系HeLa中过表达miR-200b, miR-200c和miR-429中的任一个mirna都能够抑制内源的AP-2α蛋白的表达,而在miR-200表达高的子宫内膜癌细胞系HEC-1-A细胞中抑制miR-200b, miR-200c和miR-429中的任一个mirna的表达都能增强AP-2α的表达。这些结果说明miR-200b, miR-200c和miR-429都能负调控细胞内源性的AP-2α的表达。为了研究SNP rs1045385A>C变化对mirna结合的影响,我们将完整的3'UTR以及突变了SNP位点的3'UTR克隆进入pmirGLO中,并且与mirna共转染进入HEK293细胞中,结果显示当等位位点C替换为A后抑制了miR-200b, miR-200c和miR-429结合到3'UTR。为了进一步证明这个结论,我们构建了两种基因型的全长AP-2α(包含完整的编码区和3'UTR)表达质粒pMyc-AP-2a(A）和pMyc-AP-2a(C),然后将其分别与miR-200b, miR-200c和miR-429共转染进HEK293细胞中。Western结果分析也表明AP-2α的3'UTR中rs1045385位点A改变为C后,干扰了miR-200b, miR-200c和miR-429与AP-2α基因3'UTR的结合来,导致AP-2α的表达上调。我们接着测试了SNP rs1045385A>C变化是否影响子宫内膜细胞对顺铂的敏感性。我们将两种基因型的AP-2α表达质粒pMyc-AP-2α(A)和pMyc-AP-2α(C)分别转染进入HEC-1-A细胞中,并用不同浓度的顺铂处理6小时。克隆形成实验等结果表明,转染pMyc-AP-2α(C)的HEC-1-A细胞对顺铂更加敏感,而转染pMyc-AP-2α(A)的HEC-1-A细胞相对于对照组细胞则无太大影响。总之,我们发现miR-200b, miR-200c和miR-429在子宫内癌细胞中通过抑制AP-2α的表达来降低细胞对顺铂的敏感性,且发现了AP-2a的一个SNP位点(rs1045385)通过影响miR-200、miR-200c和miR-429与AP-2α mRNA的结合,从而影响HEC-1-A细胞对顺铂的敏感性。我们的结果表明,SNP位点rs1045385很可能是一个顺铂治疗的预后标志。

关键词： AP-2α mirna-200家族单核苷酸多态性(SNP) mirna应答元件(MRE) 顺铂

miR-200/amh的靶向关系及其在牙鲆性腺中的功能研究

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miR-200/amh的靶向关系及其在牙鲆性腺中的功能研究

作者：张浩然上海海洋大学

学位级别：硕士

牙鲆(Paralichthys olivaceus)作为我国优质的海水经济鱼类品种之一,广泛养殖在我国北方区域,其肉质鲜美且蛋白质含量高,具有较高的营养价值,在工厂化养殖过程中发现雌鱼个体大且生长速率明显高于雄鱼。在性别决定和性腺的分化与发育过... 详细信息

牙鲆(Paralichthys olivaceus)作为我国优质的海水经济鱼类品种之一,广泛养殖在我国北方区域,其肉质鲜美且蛋白质含量高,具有较高的营养价值,在工厂化养殖过程中发现雌鱼个体大且生长速率明显高于雄鱼。在性别决定和性腺的分化与发育过程中,体细胞的作用越来越被研究学者们重视,体细胞不仅在胚胎时期促进原始生殖细胞(Primordial Germ Cell,PGC)形成具有分化成双性潜能的生殖原基,在性别决定中体细胞内的相关基因表达量也起到了至关重要的作用,当性腺成熟后,性腺内的体细胞不仅为生殖细胞提供增殖和分化的场所与营养,而且可分泌雌激素或雄激素促进生殖细胞的增殖与分化。因此可以说,体细胞从胚胎阶段开始就与性腺的一切功能紧密相关,然而在硬骨鱼类中体细胞对生殖细胞的调控作用,尤其是mirna在其中发挥了如何的作用少有研究报道。根据本实验室前期在牙鲆的雌雄性腺中mirna高通量测序结果显示,有大量的mirna在牙鲆雄鱼精巢和雌鱼卵巢中差异表达。我们选中了4个成员均在精巢和卵巢中差异表达的miR-200家族,分别为miR-200a,miR-200b,miR-141,miR-429。通过生物信息学方法预测了一批性别相关基因如amh、foxl2、dmrt1、wnt4、sox9、gsdf是否与该家族存在着可能的结合位点,结果显示仅amh与该家族存在结合位点,且由于miR-200家族保守性极强,在amh的3’UTR区预测出两个可能的结合位点。为此,本研究首先将amh的3’UTR区构建进了双荧光素酶报告载体中,在HEK293T细胞中验证了两者的靶向关系。初步结果显示,四个成员中miR-200a,miR-200b,miR-141与amh存在着靶向关系,其中miR-200a,miR-200b对于amh的抑制效果最为明显。为清楚miR-200a,miR-200b通过何位点来调控amh的表达,在前面构建的双荧光素酶报告载体进行了定点突变,将两个可能的位点分别突变为无关的碱基,结果进一步显示在位点一(位于3’UTR区第91个碱基)突变之后,原先的miR-200a,miR-200b对amh的抑制作用消失,而位点二(位于3’UTR区第244个碱基)突变后依然存在着抑制作用。与双荧光素酶报告系统结果一致,通过构建绿色荧光蛋白报告载体结果发现,克隆进amh的3’UTR绿色荧光蛋白在miR-200a,miR-200b作用下绿色荧光蛋白明显减少,而当位点一突变后绿色荧光蛋白又可正常表达,而位点二突变绿色荧光蛋白依然减少。这些结果充分说明miR-200a,miR-200b通过位点一来调控amh的表达,说明amh是miR-200a,miR-200b的直接靶基因。此外还发现,miR-200a在这些报告系统中均对amh的3’UTR调控作最为明显。PCR凝胶电泳结果显示amh在胚胎发育过程中直至晶体期才开始表达,在组织中的性腺和肾脏中特异性表达。因此我们推测amh与牙鲆的性腺形成或凋亡相关。为了解体细胞对生殖细胞的作用,我们体外培养了牙鲆性腺细胞,并将体细胞与生殖细胞分离开,先采用荧光定量PCR的方法鉴定了一些性别相关基因在精巢生殖细胞和支持细胞中的表达差异以及卵巢颗粒细胞中性别相关基因的表达差异。结果显示,除vasa生殖细胞标记基因外,其余性别相关基因如:cyp19a1、dmrt1、gsdf、sox9、amh等表达都主要集中于支持细胞或颗粒细胞中。为进一步清楚miR-200a在精巢中如何调控amh的作用,通过在牙鲆支持细胞中转染miR-200a mimics进行过表达研究。结果显示,与NC组相比miR-200a表达量显著上升,而amh表达量显著下降。与此同时,雄性性别相关基因dmrt1和gsdf的表达量也显著上升,但dmrt1和gsdf并不是miR-200a的靶基因。这些结果说明,miR-200a可以在精巢的支持细胞中抑制amh的表达参与精巢的性腺发育和配子形成,而amh可以负反馈调节雄性相关基因的表达。综上所述,本论文的研究为阐述amh介导miR-200家族在性腺中的功能作用奠定了重要基础。

关键词：牙鲆 mirna-200家族 amh 支持细胞颗粒细胞性腺

Ascl2/miR-200/ZEB轴调控结肠癌细胞EMT-MET的可塑性研究

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Ascl2/miR-200/ZEB轴调控结肠癌细胞EMT-MET的可塑性研究

作者：田音第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景及目的：在全世界癌症死亡率中，结直肠癌由于其早期的低诊断率排位第三，而在发达国家的发病率和死亡率中，其则居首位。在世界范围内结肠癌的诊疗一直都是一个巨大的难题，现有的治疗方法包括手术切除、化疗等，但都未能阻... 详细信息

研究背景及目的：在全世界癌症死亡率中，结直肠癌由于其早期的低诊断率排位第三，而在发达国家的发病率和死亡率中，其则居首位。在世界范围内结肠癌的诊疗一直都是一个巨大的难题，现有的治疗方法包括手术切除、化疗等，但都未能阻遏结肠癌再次的复发和其他部位的转移。在早期阶段，其诊断极为困难，而当结肠癌发展到中晚期时，其向周围组织浸润、侵袭和远处转移又为其根治性治疗带来巨大的挑战，因此寻找治疗结肠癌的新方法势在必行。上皮间质转化即EMT (epithelial-mesenchymal transition,EMT)，已在乳腺癌、结肠癌、前列腺癌等上皮样肿瘤中被发现,同时在人类肿瘤细胞株和小鼠异常活化模型研究中证实EMT能使肿瘤细胞传播和流通到周围组织，因而EMT也被认为是肿瘤浸润、转移的一个非常重要的机制。在大量的文献中提示mirna-200家族通过Zeb1/2参与调节了EMT的转录调控过程。现关于mirna的研究主要集中在下游调节，而对已有转录因子等蛋白质通过调控mirna异常表达而调节下游的研究较为缺乏，且据现有文献报道，关于mirna的转录调节机制目前仍不清楚。Ascl2(Achaete scute-like2)在大量的文献研究中证实其控制正常成体肠隐窝干细胞“命运”的能力。并已证实Ascl2在维持结肠癌干细胞自我更新方面发挥重要的作用。Ascl2作为最新发现的调节肿瘤干性因子调节肿瘤干细胞干性的同时是否影响了EMT进程目前尚不清楚，且Ascl2调控mirna尚未见任何文献报道。探讨肿瘤干性因子Ascl2对结肠癌细胞上皮-间质转化的影响。因此，对Ascl2在EMT中的调节作用的研究，我们选择了人结肠癌HT-29细胞和LS174T细胞。方法及结果：在人肠道粘膜中，免疫组织化学检测证实Ascl2仅表达在正常肠道粘膜隐窝内的干细胞中而在结肠腺癌组织中出现表达增高;Ascl2干扰后，HT-29和LS174T细胞的肿瘤侵袭能力在细胞生物学行为上表现出明显的抑制，而Western-blot和real-timePCR实验检测发现上皮细胞的标志E-cadherin表达明显增高，间质细胞的标志N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug的明显降低，即出现EMT的逆转现象—MET。microRNA芯片筛选出mirna-200家族(miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-141，miR-429)在LS174T细胞中出现2倍以上的表达上调，行real-time PCR验证证实了其表达差异。我们同时发现mirna-200家族调节EMT相关蛋白ZEB1/2在mRNA水平和蛋白表达明显下降。在荧光素报告实验提示的Ascl2对于miR-200b-200a-429和miR-200c-141启动子的转录激活有抑制作用。干扰后的LS174T细胞分别转染negative control inhibitor(NC-inhibitor)、 miR-200a inhibitor， miR-200b inhibitor，miR-200c inhibitor，miR-141inhibitor和miR-429inhibitor后行Western-blot和real-time PCR实验检测，发现miR-200a inhibitor，miR-200b inhibitor和miR-429inhibitor出现EMT现象，且部分恢复shRNA-Ascl2/LS174T细胞的细胞生物学行为。结论： Ascl2的RNA干扰可以导致结肠癌细胞生长抑制，促进了结肠癌细胞EMT-MET的发生发展。Ascl2通过调节miR-200家族mir-200a-200b-429和mir-200c-141两条调控轴参与转录调节结肠癌细胞EMT过程。为肠粘膜更新的干预治疗提供了新的理想靶位，为炎症性肠病及其肠道肿瘤的防治和治疗开拓一种不同的思路。

关键词： Ascl2 mirna-200家族结肠癌细胞上皮-间质转化

乳腺癌肿瘤微环境中的间充质干细胞通过调节TGF-β1促进乳腺癌细胞的转移

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乳腺癌肿瘤微环境中的间充质干细胞通过调节TGF-β1促进乳腺癌细...

作者：王椋北京协和医学院

学位级别：硕士

肿瘤的发生发展涉及细胞对凋亡信号的耐受或逃避、肿瘤新生血管生成、细胞获得侵袭和转移能力、细胞增殖能力的维持、贴壁侵入脉管系统、到达远端部位后的定植、在转移部位的存活和克隆性增生等一系列级联过程,最终形成肉眼可见的肿瘤... 详细信息

肿瘤的发生发展涉及细胞对凋亡信号的耐受或逃避、肿瘤新生血管生成、细胞获得侵袭和转移能力、细胞增殖能力的维持、贴壁侵入脉管系统、到达远端部位后的定植、在转移部位的存活和克隆性增生等一系列级联过程,最终形成肉眼可见的肿瘤。其中肿瘤的侵袭转移是癌症患者的主要致死因素。因此,探讨调控肿瘤细胞侵袭和转移的分子机制有望为临床上防止肿瘤侵袭和转移的发生,提高肿瘤病人的生存率和生活质量提供新的手段。本文的第一部分,我们研究乳腺癌微环境中的间充质干细胞(MSC)能否促进乳腺癌的转移。乳腺癌是严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤。随着医学的进步,对乳腺癌的诊断和治疗水平有了很大提高。但是,大部分乳腺癌患者终将死于癌症的复发和转移。上皮间质转化过程(EMT)在胚胎发育的过程中必不可少,同时被认为是肿瘤细胞发生转移早期的必要阶段。我们利用乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-435S细胞与MSCs共培养来模拟并研究乳腺癌微环境中的MSCs对乳腺癌细胞的作用。共培养3天后,两种细胞系均发生了EMT的变化;进而我们借助MTT细胞增殖试验、碘化丙锭单染的流式细胞术、软琼脂克隆形成实验、Transwell侵袭和迁移实验等一系列实验方法观察比较了MCF7细胞在共培养前后增殖、周期、成瘤性以及侵袭迁移能力的变化,结果发现,MSCs共培养能明显促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移,但对细胞周期和增殖能力没有明确的影响;此外,MCF7经共培养后miR-200b和miR-200c的表达下调,伴随这些mirnas表达的改变,它们的靶基因ZEB1与ZEB2有明显的上调,而且,当外源性的过表达：miR-200b和]miR-200c时,能够部分逆转EMT的现象;进一步的研究发现,共培养后MCF7 TGF-p1水平明显升高,外源性的TGF-p1抑制剂能够显著抑制与MSC共培养引起的乳腺癌细胞MCF7的EMT过程,包括E-cadherin、mirna-200及其靶基因的变化。上述结果表明乳腺癌微环境中的MSCs可以通过调节TGF-β1,诱发乳腺癌细胞MCF7的EMT过程,从而增加其转移的潜能。本文的第二部分,我们研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,与正常人来源的间充质干细胞比较,是否存在免疫功能的异常。我们分离了正常人和CML患者的骨髓中的MSCs,利用MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式检测其对T细胞周期、凋亡的作用情况。结果显示,CML和正常志愿者骨髓来源的MSCs的细胞形态和表型没有差异,CML患者来源的MSCs抑制T细胞增殖的能力和抑制T细胞停留在GO/G1期的作用均减弱,CML患者抑制T细胞凋亡的作用增强。我们认为,CML患者骨髓来源的MSCs存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用CML患者自体的MSC移植治疗可能不是一种很好的选择,对于CML患者最好是选用异基因的MSC移植。

关键词：间充质干细胞(MSCs) 间质上皮转化(EMT) mirna-200家族乳腺癌慢性粒细胞白血病

mirna-200-cbx2在牙鲆性腺中的表达与功能研究

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miRNA-200-cbx2在牙鲆性腺中的表达与功能研究

作者：王新艳上海海洋大学

学位级别：硕士

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是一种重要的海水经济鱼类,雌性个体较雄性个体生长快,在生产上雌鱼饲养周期较短,因而具有很高的经济价值。性别分化与性腺发育一直是鱼类发育和繁殖生物学研究的重要方向。近年来,越来越多的研究表明miRN... 详细信息

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是一种重要的海水经济鱼类,雌性个体较雄性个体生长快,在生产上雌鱼饲养周期较短,因而具有很高的经济价值。性别分化与性腺发育一直是鱼类发育和繁殖生物学研究的重要方向。近年来,越来越多的研究表明mirna在脊椎动物发育和生殖中发挥重要作用。我们在先前的研究中意外发现色素框同源物2(chromobox homolog 2,CBX2)是牙鲆雌雄性腺差异表达的miR-200家族作用的潜在靶基因。CBX2是多梳蛋白(Polycomb group complex,PcG)家族的关键成员之一,它作为重要的转录因子在哺乳动物的性发育中发挥着关键作用。如果该基因突变或功能缺失将导致性反转,但关于CBX2在除哺乳动物外的其他脊椎动物性别分化与性腺发育中的功能,至今尚不清楚。因而本研究在牙鲆中鉴定了cbx2基因,并采用多种分子生物学技术分析了其表达谱以及其与miR-200家族与多个性别相关基因的作用关系,为揭示mirna通过调节cbx2基因表达而参与牙鲆性腺发育的分子机制奠定基础。本研究利用分子克隆技术克隆了牙鲆cbx2基因的cDNA序列,该cDNA序列含有1 584bp的开放阅读框,编码527个氨基酸;运用生物信息学方法分析牙鲆CBX2蛋白质的理化性质与空间结构,结果显示蛋白质分子量和等电点分别为56578.98和10.03,是一种亲水性蛋白,且偏碱性,该蛋白无信号肽,无跨膜区域,且编码该蛋白的氨基酸中以丝氨酸(Sr)的含量为最高;其二级结构中含有1个染色质结构域和4个低复杂结构域,该染色质结构域常结合甲基化氨基酸残基;空间结构分析发现,牙鲆CBX2蛋白以α螺旋和无规则卷曲为主;并比较了脊椎动物中cbx2的基因结构、氨基酸同源性、系统进化,表明cbx2基因在脊椎动物进化中较为保守,牙鲆cbx2与尼罗罗非鱼与青鳉的基因结构更为相似,其氨基酸同源性与杜氏鰤(Seriola dumerili)最高,为89%。本研究运用实时荧光定量PCR技术构建了牙鲆cbx2基因在性腺发育时期与成鱼的各个组织的时空表达谱,结果显示cbx2基因在牙鲆精巢中的表达量最高,卵巢次之,而在其他组织中的表达较低,与RT-PCR结果相似。cbx2基因在牙鲆未受精卵和早期胚胎发育中有一定的母源性表达,至神经胚期表达量达到最高,出膜之后表达量则降到较低的水平;运用免疫组织化学检测CBX2蛋白在精卵巢组织中的定位,结果发现CBX2在II、III和IV期精巢组织中均有表达,其中在III期的初级和次级精母细胞中具有较强的免疫信号,而在V期的精子中则几乎检测不到CBX2蛋白的表达,同时检测了CBX2蛋白在II期到V期卵巢的表达,发现CBX2蛋白主要在II期和III期卵巢组织中表达,但同时期总体上其在精巢中的表达高于卵巢中表达,此结果与定量结果也较为相似。这些结果表明cbx2基因可能参与了性腺中生殖细胞的增殖和减数分裂。为探讨cbx2与性别相关基因的相关性,本研究利用实时荧光定量PCR技术检测了cbx2与4个已知性别相关基因(sf1、sox9、foxl2和wnt4)在牙鲆雌雄性腺中的表达,结果发现cbx2、sf1、sox9在精巢中的表达显著高于卵巢,而foxl2和wnt4在卵巢中的表达较高。本研究还运用RNAi干扰技术在牙鲆胚胎细胞中对cbx2基因进行干扰,筛选出了cbx2-siRNA的最佳干扰序列和干扰时间,并利用荧光定量PCR技术检测了RNAi干扰后cbx2及sf1、sox9、foxl2和wnt4的表达变化。结果显示cbx2的表达明显被抑制,精巢发育关键因子sf1、sox9被同向抑制,而其反向表达的卵巢发育关键因子foxl2和wnt4的表达则明显上调。最后,为证实cbx2基因与mirna间的作用关系,本研究利用双荧光素酶报告基因技术研究了mirna-200家族基因与cbx2间的靶向关系,实验表明牙鲆cbx2是miR-200家族中pol-miR-200a和pol-miR-200b直接调节的靶基因,而该家族中pol-miR-429和pol-miR-141对牙鲆cbx2基因表达无明显的调节作用,表明pol-miR-200a和pol-miR-200b可能通过直接调节cbx2基因表达而参与牙鲆性腺发育的过程。综上所述,本论文为深入研究mirna-cbx2-性别相关基因在牙鲆性腺发育中的作用奠定了重要基础。

关键词：牙鲆性腺发育 cbx2 mirna-200家族