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mir-542-5p对1-磷酸鞘氨醇诱导的IEC-6细胞增殖的抑制作用

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中国病理生理杂志 2017年第7期33卷 1184-1190页

作者：蒋萍穆攀伟李静蒙克嘎勒聂永梅谷晓艳吴桂霞新疆医科大学基础医学院生理学教研室新疆乌鲁木齐830011 中山大学附属第三医院内分泌科广东广州510630

目的:观察mir-542-5p对1-磷酸鞘氨醇(S1p)诱导的大鼠小肠隐窝上皮IEC-6细胞增殖的影响。方法:建立稳定表达鞘氨醇激酶1(SphK1)的IEC-6细胞系(SphK1-IEC-C1和SphK1-IEC-C2),Western blot检测SphK1蛋白表达,放射性同位素示踪法测定SphK1酶活性和S1p分泌,细胞计数绘制生长曲线观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期变化,实时荧光定量pCR检测mir-542-5p表达。结果:与对照细胞相比,细胞系SphK1-IECC1和SphK1-IEC-C2中SphK1蛋白表达显著升高,SphK1酶活性升高,细胞内外S1p浓度升高,细胞生长速度加快,细胞周期中S期细胞所占比例升高,mir-542-5p的表达量降低;在IEC-6细胞的培养液中加入S1p(0.5~10μmol/L),能显著抑制mir-542-5p表达;采用siRNA干扰降低IEC-6细胞的SphK1,可明显升高mir-542-5p表达。升高SphK1-IEC-C1和SphK1-IEC-C2细胞中mir-542-5p水平,则可降低S期细胞比例,抑制细胞增殖。结论:S1p通过降低IEC-6细胞中mir-542-5p水平,引起细胞周期由G1期向S期转换,促进IEC-6细胞增殖。

关键词： mir-542-5p 1-磷酸鞘氨醇鞘氨醇激酶1 IEC-6细胞细胞增殖

mir-542-5p在非小细胞肺癌中的临床意义及初步机制研究

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miR-542-5p在非小细胞肺癌中的临床意义及初步机制研究

作者：谢优广西医科大学

学位级别：硕士

作为新一类的分子靶向标志物,微小RNA (microRNA, mirNA)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的诊断和生物治疗上的应用前景非常广阔。目前已发现若干直接或间接与NSCLC的发生和发展、诊断、分期、进展和预后等相关的mir... 详细信息

作为新一类的分子靶向标志物,微小RNA (microRNA, mirNA)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的诊断和生物治疗上的应用前景非常广阔。目前已发现若干直接或间接与NSCLC的发生和发展、诊断、分期、进展和预后等相关的mirNAs,但许多mirNA与NSCLC的相互关系及分子机制仍不明确,故探求mirNA在NSCLC中的作用机制已成为当前研究的热点和重点。mir-542-5p与肿瘤的关系研究不多,已有研究发现mir-542-5p在神经母细胞瘤中呈低表达,与患者的不良预后密切相关,体外实验结果显示,过表达mir-542-5p可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖,侵袭和转移,推测mir-542-5p可能在神经母细胞瘤中行使“抑癌”mirNA的功能。但到目前为止,mir-452-5p在NSCLC人群中的研究未见报道。因此,本课题将探讨mir-542-5p在NSCLC中的表达及其与临床病理参数的意义,预测mir-542-5p靶基因网络,继而构建鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤(Chick Chorioallantoic membrane, CAM)动物模型,探索mir-542-5p在NSCLC细胞生长,血管生成的作用及初步分子机制,为进一步开展NSCLC的肿瘤生物学相关研究提供了良好的技术平台。目的1检测mir-542-5p在NSCLC细胞及组织中的表达及临床意义。2利用生物信息学预测并分析mir-542-5p的靶基因网络并行信号通路等分析。3使用体内实验(CAM),探讨mir-542-5p在NSCLC肿瘤细胞生长及血管生成中的作用及潜在机制。方法***-542-5p在NSCLC中的表达收集125例NSCLC及癌旁非癌肺组织样本,其中101例肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD),23例肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma, LUSC),采用实时荧光定量pCR技术检测mir-542-5p的表达水平,分析mir-542-5p的表达与NSCLC的临床病理学特征的关系,初步探讨mir-542-5p在NSCLC中的临床意义。***-542-5p潜在靶基因信号通路及网络分析2.1通过mirNA预测软件(mirWalk, miranda, Microt4, mirDB, mirbridge, mirMap, RNAhybrid, mirNAMap, pITA, pictar2, RNA22, TargetScan)预测mir-542-5p的靶向作用基因,利用DAVID分别进行GO富集分析、KGEE通路分析、pANTHER通路分析。2.2用软件Cytoscape3.3.0绘制GO分析网络图, 在http://***/网站上绘制靶蛋白网络图,并提取hub gene。2.3通过GSEA软件构建的分子标签数据库(Molecular Signatures Database, MSigDB)对452个靶基因进行富集分析。通过来源于National Cancer Institute的NCI-60 cell lines的数据,以基因表达图谱的形式进行靶基因注释,在定义的功能分组中显示相互的表达趋势。3. mir-542-5p在NSCLC CAM中的作用及初步机制研究3.1实时荧光定量pCR方法检测四株肺癌细胞系(A549、pC9、H1299、 H460)中筛选出mir-542-5p表达量最低的肺癌细胞株进行转染。3.2构建LV-hsa-mir-542的慢病毒载体,转染至肺癌细胞株H460,构建mir-542-5p的过表达细胞模型。3.3通过构建NSCLC CAM模型从动物模型角度模拟人体NSCLC的生长发展,测量瘤块大小,并利用Image-pro plus软件测量不规则血管面积及开窗面积,计算比值,包埋瘤块制成石蜡组织后,组织切片常规HE染色和免疫组化表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)、 D2-40染色,以研究mir-542-5p对NSCLC肿瘤形成和血管生成的影响,进一步初步探讨其在肿瘤中的作用机制。结果***-542-5p在非小细胞肺癌中的表达1.1 mir-542-5p在125例NSCLC中的癌组织(1.952±1.507)中表达低于癌旁非癌肺组织(4.568±1.993)(t=-11.703,p56;t=-11.183,p<0.001);在23例LUSC癌组织

关键词： NSCLC mir-542-5p EGFR 鸡胚绒毛膜尿囊膜肿瘤生长

mir-542-5p靶向ILK调控心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究

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MiR-542-5p靶向ILK调控心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究

作者：殷晓莹山东大学

学位级别：硕士

研究背景急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的发病率及死亡率高,公认的治疗措施是AMI后尽早成功地进行血运重建。虽然冠状动脉血流得以迅速恢复,但是炎症、氧化应激、线粒体损伤、钙超载等多方面级联反应造成心肌缺血再灌... 详细信息

研究背景急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的发病率及死亡率高,公认的治疗措施是AMI后尽早成功地进行血运重建。虽然冠状动脉血流得以迅速恢复,但是炎症、氧化应激、线粒体损伤、钙超载等多方面级联反应造成心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,mirI)。MicroRNAs 通过结合靶基因 mRNA 的 3’ 非翻译区(3’-untranslated regions,3’-UTR),参与其转录后调控,促进靶基因mRNA的降解,和/或抑制蛋白的翻译,并参与调控mirI的病理生理过程,具有早期诊断、积极治疗、判断预后的巨大潜力和广阔的临床转化应用前景。本课题研究中涉及的mir-542-5p在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)中表达升高,抑制自噬后加重细胞损伤;AMI患者的血浆中mir-542-5p表达升高,与心肌损伤标志物呈正相关,提示mir-542-5p可作为AMI患者心肌损伤程度的辅助指标。mir-542-5p是否可以调控H/R诱导的原代乳鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs)凋亡和mirI目前尚未有报道。本研究主要探讨mir-542-5p在mirI中是否可以通过调控CMs凋亡起作用及其作用机制。研究目的1.明确mir-542-5p在mirI中的作用。2.探讨mir-542-5p在mirI中的作用机制,明确其是否可以作为mirI的精准治疗靶点,有效地缓解疾病进展并改善疾病预后。研究方法1.构建H/R诱导的NRCMs和小鼠mirI模型,检测mir-542-5p的表达变化。2.应用生物信息学方法分析mir-542-5p,预测其特异性结合的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。3.应用 mir-542-5p mimic、mir-542-5p inhibitor、靶基因的质粒和小干扰转染 NRCMs,然后进行H/R刺激,RT-qpCR检测mir-542-5p和靶基因mRNA的表达,western blot检测靶基因蛋白和凋亡通路蛋白Bcl-2的表达,CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。4.构建小鼠mirI模型,实验分组:(1)假手术组;(2)心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组:缺血30min后再灌注12h;(3)心肌缺血再灌注处理组(I/R+mir-542-5p antagomir-negative control 组):缺血 30min 后再灌注 12h;(4)心肌缺血再灌注处理组(I/R+mir-542-5p antagomir组):缺血30min后再灌注12h。5.心脏功能检测:小动物超声检测小鼠的心脏功能变化。6.心肌梗死面积检测:动物模型取材后使用伊文思蓝(evans blue)和2、3、5-三苯基氯化四唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium,TTC)双染法观察心肌梗死面积。7.统计分析:实验数据以平均值±标准误表示,应用Graphpad prism8软件统计分析,包括正态分布检验、方差齐性检验,参数检验采用两组间t检验、多组间One-way ANOVA检验,非参数检验采用两组间Mann-Whitney检验、多组间Kruskal-Wallis检验,p542-5p在H/R诱导的NRCMs中表达升高,抑制mir-542-5p可以上调ILK表达并减轻细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验验证了 ILK是mir-542-5p直接结合的靶基因。***-542-5p 在小鼠 mirI 后表达升高,mir-542-5p antagomir 上调 ILK 和 Bcl-2 蛋白表达,减少心肌梗死面积,改善心脏功能,从而减轻mirI。研究结论1.在H/R诱导的NRCMs及小鼠mirI中,mir-542-5p表达升高,ILK表达下降。2.抑制mir-542-5p可以上调ILK和Bcl-2表达,减轻心肌细胞凋亡,改善心脏功能,减少心肌梗死面积,从而减轻mirI。

关键词：急性心肌梗死心肌缺血再灌注损伤 mir-542-5p 整合素连接激酶

mir-542-5p对卵巢癌细胞SKOV3恶性生物学行为的影响

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现代肿瘤医学 2015年第9期23卷 1180-1184页

作者：陈琳雷晓娟姚丽张佳瑞李欣毅王姝妹兰淼李艳红第四军医大学唐都医院妇产科陕西西安710038 第四军医大学唐都医院病理科陕西西安710038

目的:探讨mir-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。方法:应用mir-542-5p mimics和mimics阴性对照(mimics NC)分别转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕试验、Transwell实验和流式细胞术检测... 详细信息

目的:探讨mir-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。方法:应用mir-542-5p mimics和mimics阴性对照(mimics NC)分别转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕试验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达mir-542-5p对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果:过表达mir-542-5p后,SKOV3细胞的增殖能力较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低(p5);Transwell实验和划痕实验显示,过表达mir-542-5p后,细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组明显下降(p5);流式细胞术结果显示,过表达mir-542-5p后,SKOV3细胞的凋亡率较阴性对照组升高,而对细胞周期无影响。结论:过表达mir-542-5p可以抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡。提示mir-542-5p在卵巢癌恶性生物学进程中可能发挥重要作用。

关键词： mir-542-5p 卵巢癌SKOV3细胞增殖迁移侵袭凋亡

心力衰竭大鼠活体心脏定向表达mir-542-5p对大鼠心肌线粒体功能的影响

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心力衰竭大鼠活体心脏定向表达miR-542-5p对大鼠心肌线粒体功能的...

有氧运动对早期心衰大鼠的干预中mir-10和mir-542靶蛋白的研究

第十二届全国体育科学大会

作者：李佳聪王硕赵云罡天津体育学院

研究背景:心力衰竭是复杂的临床征候群,是心血管疾病进展至严重阶段的常见症状。作为一个严重的公共卫生问题,它的药物治疗和非药物干预均是亟待解决的问题。运动康复作为心脏康复的主要手段之一,受到了广泛研究。有氧运动以其安全、可... 详细信息

研究背景:心力衰竭是复杂的临床征候群,是心血管疾病进展至严重阶段的常见症状。作为一个严重的公共卫生问题,它的药物治疗和非药物干预均是亟待解决的问题。运动康复作为心脏康复的主要手段之一,受到了广泛研究。有氧运动以其安全、可靠、易得的特性,成为运动干预心衰的主要手段。心肌细胞的线粒体功能与心脏的健康息息相关,同时又对有氧运动表现出高超的可塑性响应。有氧运动不仅可以提高线粒体的功能,还可以促进线粒体的生物合成以增加其数量,通过线粒体的动态平衡来维持较好的供能状态,高效去除功能失调或受损线粒体以保证线粒体网络的整体健康。因此,线粒体的功能研究是运动干预心衰的有效节点。我们的前期结果显示,mir-542-5p是一个因有氧运动干预而在心力衰竭大鼠心室肌中显著提高表达水平的微小RNA,且其表达水平的升高伴有线粒体功能的增强及心衰进程的延缓,其靶基因与心脏的形态、血管的发生、线粒体功能、细胞凋亡和炎症相关。但若人为在心衰大鼠体内过表达mir-542-5p,是否可以取代运动在延缓心衰进程中的作用,尚未可知。研究目的:将mir-542-5p以AAV9转染系统过表达于心衰大鼠心肌细胞,观察其对大鼠心肌线粒体功能的调节作用,为mir-542-5p延缓运动受限患者的心衰进程提供可能的临床理论支持。研究方法:选取30只8周龄wistar大鼠,禁食24小时,行腹主动脉缩窄术以制备心脏后负荷致心衰大鼠模型。术后饲养8周后以超声心动检测确定心衰模型建立成功。将30只心衰大鼠随机分为3组,每组10只,分别为HF对照组,AAV9对照组和mir-542-5p组。HF对照组不做任何处理;AAV9对照组尾静脉注射200μl AAV9空病毒,作为病毒载体对照;mir-542-5p组尾静脉注射200μl表达型病毒AAV9-mir-542-5p(滴度1.2×1012vg/ml)。所有大鼠安静饲养16周后,处死,取左心室,提取左心室心肌线粒体。以O2K高分辨率呼吸测定系统测定态Ⅲ呼吸速率和态IV呼吸速率,计算呼吸控制率(RCR),以评定心肌线粒体的呼吸功能;以20/20n发光检测仪和ATp检测试剂盒测定心肌线粒体中ATp含量,用于评定线粒体代谢水平;以DCFH-DA荧光法判断细胞内活性氧水平,用于评定线粒体的抗氧化能力;采用JC-1荧光法测定线粒体膜电位水平。研究结果:(1)尾静脉注射AAV9-mir-542-5p16周后,三组大鼠间的呼吸控制率无显著的统计学差异。与AAV9对照组相比,mir-542-5p组虽然RCR没有变化,但态Ⅲ呼吸速率增强(p5),态IV呼吸速率亦增强(p5)。这意味着尽管对于相同底物浓度而言,是否高表达mir-542-5p对产生的总能量值没有影响,但高表达mir-542-5p可以使呼吸链电子传递速度整体加快,产能和产自由基的比例同时增强,单位时间内产能总量增多,电子在能量代谢和自由基代谢间的分配比例不变。(2)从统计学上看,三组大鼠之间的活性氧水平无显著性差异(p>0.05),但mir-542-5p组的活性氧水平相比于其它两组而言有下降的趋势,且mir-542-5p组线粒体的ROS生成速率低于HF组。根据前期细胞实验的结果,mir-542-5p具有较好的抗氧化能力。而在体实验没有显示出强的降低活性氧能力,其原因可能是因新冠肺炎疫情的影响,mir-542-5p在体表达时间超过实验设计,导致抗氧化能力下降。(3)三组心衰大鼠之间的心肌线粒体ATp浓度无显著性差异。(4)mir-542-5p组心肌线粒体膜电位水平高于HF组和AAV9组,具有统计学显著性差异(p5),说明mir-542-5p的高表达使得心衰大鼠线粒体内膜稳定性和完整性增强,线粒体趋于健康状态。(5)心脏重量结果显示,mir-542-5p组的心重体重比显著低于HF组(0.0030±0.000221 vs 0.0035±0.000189,p5),说明mir-542-5p的高表达显著改善了心衰大鼠心肌肥厚的情况。研究结论:心脏后负荷致心力衰竭的Wistar大鼠在体心脏过表达mir-542-5p后,其心肌肥厚进程被显著延缓。mir-542-5p过表达可以提高心衰大鼠心肌细胞线粒体的膜电位水平,提升单位时间内ATp生成总量,一定程度上提高了心肌细胞线粒体功能,降低了其氧化应激水平。这与有氧运动训练有一定的类比性。

关键词：心力衰竭大鼠 mir-542-5p 心脏定向表达心肌细胞线粒体功能

来源： cnki会议评论

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有氧运动对早期心衰大鼠的干预中miR-10和miR-542靶蛋白的研究

作者：王莉莉天津体育学院

学位级别：硕士

目的:rno-mi R-10a-5p和rno-mi R-542-5p是本实验室首次鉴定的参与有氧运动干预慢性心衰进程的两个micro RNA。它们在压力负荷致慢性心衰大鼠的心室肌中低表达,以有氧运动为干预手段,可以使它们的表达量显著升高,同时伴有线粒体功能的... 详细信息

目的:rno-mi R-10a-5p和rno-mi R-542-5p是本实验室首次鉴定的参与有氧运动干预慢性心衰进程的两个micro RNA。它们在压力负荷致慢性心衰大鼠的心室肌中低表达,以有氧运动为干预手段,可以使它们的表达量显著升高,同时伴有线粒体功能的增强及心衰进程的延缓。本研究的目的是鉴定rno-mi R-10a-5p和rnomi R-542-5p在心肌细胞中的可能靶蛋白,通过靶蛋白的功能研究探讨有氧运动干预心力衰竭的mi RNA机制,为慢性心衰的干预寻找突破口。方法:1、RIp免疫共沉淀与靶基因的筛选:在H9C2大鼠心肌细胞中过表达rno-mi R-10a-5p或rno-mi R-542-5p,通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding protein Immunoprecipitation,RIp)技术,用特异性Argonaute2(Ago2)蛋白抗体对过表达mi RNA的细胞中的RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)进行免疫共沉淀,并提取其中富集的m RNA。通过基因芯片法检测富集的m RNA的种类,然后进行聚类分析。初步筛选候选基因,通过mi RBase、Target Scan、RNAhybrid数据库进行计算预测。了解候选基因的主要生理功能,来进行靶基因的进一步筛选。2、引物设计:利用Oligo primer Analysis Software 7对候选靶基因进行RTq pCR引物的设计。合成后用SYBR Green定量pCR来验证引物是否能够扩增出片段以及是否会出现二聚体的情况,对pCR产物进行琼脂糖凝胶电泳的验证。3、SYBR Green实时定量pCR:分别从离体水平和在体水平检验候选基因的表达情况。离体水平上,在H9C2大鼠心肌细胞中,过表达mi R-10a-5p或者mi R-542-5p,提取细胞总RNA,进行RT-q pCR;在体水平上,分别取假手术安静组(SC)、假手术运动组(ST)、手术安静组(AC)、手术运动组(AT)四组的大鼠左心室组织,进行组织RNA的提取,通过RT-q pCR检测基因表达水平。结果:1、通过对基因芯片的GO富集情况分析,发现大多数基因是与心脏的形态,血管的发生、线粒体的形态以及细胞凋亡和炎症相关,这与我们实验的最初构想是一致的,也为之后进一步探究有氧运动对早期心衰大鼠的干预机制奠定基础。2、通过筛选和验证,mi R-10a-5p的靶基因可能为Fat4;mi R-542-5p的靶基因可能为Tfrc和Vav2。RT-q pCR结果显示,在H9C2大鼠心肌细胞中过表达mi R-10a-5p,钙黏蛋白Fat4与转染空载体相比增加明显;在H9C2大鼠心肌细胞中过表达mi R-542-5p后,Vav2基因与转染空载体相比表达增加。在造模动物组织中也进行了相应的验证,转铁蛋白受体Tfrc在早期心衰模型中表达明显上调,在心衰后运动组中表达恢复正常水平,表明转铁蛋白受体在这一生理活动中发挥着重要的作用。Vav2在早期心衰大鼠的左心室表达明显降低,经过为期8周的有氧训练,大鼠的心功能得到了很大恢复,Vav2的表达情况较早期心衰组有明显的提高,说明Vav2在维持心血管的稳态方面发挥着重要的作用。在早期心衰大鼠中Fat4表达明显下调,但早期心衰后进行有氧运动虽表达量有所增加,但AC组和AT组并没有显著差异。研究表明在早期心衰大鼠的左心室组织中,COXⅣ的表达明显低于假手术安静组,经过为期8周的有氧运动,COXⅣ的表达与心衰安静组相比有所增加。结论:通过基因芯片的分析和进行细胞、组织层面的实时定量荧光pCR的验证,我们发现,在有氧运动干预心力衰竭的过程中,Fat4作为mi R-10a-5p的可能靶基因,Tfrc和Vav2作为mi R-542-5p的可能靶基因,起到了调节的作用。其中,Fat4与细胞增殖有关,转铁蛋白受体Tfrc与心脏线粒体的氧化磷酸化功能和自噬有关,Vav2与心血管的稳态有关。因此,这三个基因在有氧运动干预心衰中可能起到了关键的作用。其具体信号通路有待于进一步研究。

关键词： mir-10a-5p mir-542-5p 靶基因

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胃癌相关mirNAs的筛选和鉴定

胃癌相关miRNAs的筛选和鉴定

作者：摇豪谧浙江大学

学位级别：硕士

MicoRNAs(mirNAs)是一类内源性表达的长约22个核苷酸的非编码单链RNA,在哺乳动物细胞中,mirNAs以非完全互补的方式与靶mRNA的3’非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)配对结合,从而引起翻译抑制或靶mRNA降解。当前研究表明mirNAs... 详细信息

MicoRNAs(mirNAs)是一类内源性表达的长约22个核苷酸的非编码单链RNA,在哺乳动物细胞中,mirNAs以非完全互补的方式与靶mRNA的3’非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)配对结合,从而引起翻译抑制或靶mRNA降解。当前研究表明mirNAs参与调节生物体各种生命活动,包括细胞增殖,分化,凋亡和迁移等[1]。正是因为mirNA几乎参与调节生命体全部的生理病理过程,近年的研究多集中于mirNA的异常表达与人类肿瘤发生发展的关系。大量实验结果显示人类肿瘤通常显示特征性的mirNA表达谱,表达异常的mirNA(升高或减低)在肿瘤的发生发展过程分别扮演致癌基因或抑癌基因的角色。尽管已有实验显示某些mirNAs与人类消化系统肿瘤相关,包括肝癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌和胆管癌等[2,3],但这方面研究尚留有很大空白,特别是胃癌中异常表达的mirNAs。而中国恰恰是胃癌发病率最高的几个国家之一,因此我们选用胃癌作为研究对象,以期揭示胃癌中异常表达的mirNAs,并初步研究其功能。通过传统的生物芯片技术我们对胃癌中异常表达的mirNA进行筛选,芯片结果提示hsa-mir-542-5(mir-542-5p)在胃癌组织中高表达,进而采用Real-time pCR法对胃癌组织和正常远端胃组织中mir-542-5p的表达水平进行检测验证,从而确定mir-542-5p的高表达是否在胃癌中普遍存在。然后,我们采用Mann-Whitney Test和Kruskal-Wallis Test分析mir-542-5p表达水平与年龄、性别、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、病理分型(Lauren、组织类型)的相关性。最后,我们综合计算机法(miranda,pictar,Targetscan)预测可能与胃癌有关的mir-542-5p的潜在靶基因。一、材料和方法: 所有胃癌组织及配对正常远端组织均来源于胃癌手术病人,并进行病理确证。为了全面了解胃癌组织及其正常远端组织中mirNAs的表达情况,我们采用了含677个人类成熟mirNAs探针的芯片来检测胃癌组织及其正常远端组织中mirNAs的表达水平,并比较其差异。对mirNAs芯片结果进行分析筛选,选取上调最明显的目标mirNA在20对胃癌组织及其正常远端组织中用Real-time pCR进行验证。采用miranda,pictar,Targetscan预测mir-542-5p靶基因,并对这些潜在的靶基因做进一步分析。二、结果对生物芯片结果进行分析后发现,与远端正常胃组织相比,胃癌组织中mirNAs表达水平上调超过两倍的有6个,mir-542-5p,-125b,-199a,-10a,-199a,-594,下调超过两倍的有11个,mir-182,-143,-194,-765,-200c,-192,-200b,-148a,-141,-215,-200a,其中上调最明显的是mir-542-5p,故我们选择mir-542-5p作为我们的研究对象。用Real-time pCR的方法在20例胃癌样本中检测mir-542-5p的表达水平,结果发现mir-542-5p在9例样本中上调,11例样本中下调。用SpSS13.0软件包对这20例胃癌样本中mir-542-5p表达水平和临床病理的相关性进行分析后发现,虽然mir-542-5p表达水平与病人的性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度、Lauren分型无关,但mir-542-5p表达水平的改变与淋巴结转移(p=0.048,Mann-Whitney Test),临床TNM分期(p=0.048,Mann-Whitney Test)和组织类型(p=0.018,Mann-Whitney Test)有关。有淋巴结转移胃癌组织与无淋巴结转移胃癌组织比较而言,前者的mir-542-5p表达水平上调;TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期的胃癌组织与TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期的胃癌组织比较而言,前者的mir-542-5p表达水平上调;此外,印戒细胞癌患者的胃癌组织中mir-542-5p表达水平与非印戒细胞癌患者的胃癌组织mir-542-5p表达水平相比,后者的mir-542-5p表达水平上调。对mir-542-5p潜在靶基因进行生物信息学分析,我们发现其中一些可能的靶基因与肿瘤的生长和转移有关,提示mir-542-5p可能参与胃癌的发生发展过程。三、结论尽管对20对胃癌样本的验证结果显示胃癌组织及其正常远端组织的mir-542-5p的表达水平无明显差异,但是结合各病例的具体情况,我们还是发现在一定的病理条件下,mir-542-5p的高表达还是与胃癌存在一定联系。就发生淋巴结转移的胃癌组织与无淋巴结转移胃癌组织比较而言,前者的mir-542-5p表达水平上调;TNM分

关键词：胃癌 mirNA mir-542-5p 筛选鉴定