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mir-452-5p靶向SOX7促进食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭及EMT

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第4期29卷 294-300页

作者：尹情韩俊淑董稚明郭炜沈素朋梁佳路军涛郭艳丽河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所河北石家庄050011

目的:检测mir-452-5p在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨其异常表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响及其分子机制。方法:收集2012年3月至2015年12月在河北医科大学第四医院就诊的86名ESCC患者的癌组织样本和对... 详细信息

目的:检测mir-452-5p在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨其异常表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响及其分子机制。方法:收集2012年3月至2015年12月在河北医科大学第四医院就诊的86名ESCC患者的癌组织样本和对应的癌旁组织,用qpCR法检测mir-452-5p及其他相关基因在ESCC组织和细胞中的表达;向KYSE-150细胞中分别转染mir-452-5p mimic或pcDNA3.1-SOX7构建过表达的细胞株。分析mir-452-5p表达与ESCC病理特征和患者5年OS的关系。用MTS、Tanswell法检测mir-452-5p过表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响;用双荧光素酶报告基因实验及TOp/FOp报告基因系统检测mir-452-5p与SRY盒转录因子(SOX7)3’UTR区的结合作用及对Wnt/β-catenin通路活化水平的影响。结果:mir-452-5p在ESCC组织中呈明显高表达(p5年OS密切相关(均pmir-452-5p过表达明显促进食管癌KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程(p5或pmir-452-5p的直接靶基因,mir-452-5p通过对SOX7的负向调控影响了Wnt通路活化水平(p5或pmir-452-5p表达也受Wnt通路活化水平的影响(p5或pmir-452-5p通过mir-452-5p/SOX7/Wnt/mir-452-5p正反馈环路提高Wnt/β-catenin通路活化水平,进而促进ESCC KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程,mir-452-5p有望成为ESCC患者靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。

关键词：食管鳞状细胞癌 KYSE-150细胞 mir-452-5p SRY盒转录因子7 Wnt/β-catenin信号通路

环状RNA ATp2B1靶向mir-452-5p降低胃癌细胞系的增殖和侵袭

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基础医学与临床 2023年第6期43卷 882-888页

作者：郑彬彬林淑莹李德隆陈杰黄子成福建医科大学附属泉州第一医院胃肠消化内科福建泉州476100 复旦大学附属金山医院消化内科上海200540

目的探讨环状RNA circATp2B1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法收集2018年7月至2021年2月福建医科大学附属泉州第一医院胃肠肝胆外科行手术切除并病理学诊断的44例胃癌组织标本及癌旁组织标本。选取4株胃癌细胞系(SGC... 详细信息

目的探讨环状RNA circATp2B1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法收集2018年7月至2021年2月福建医科大学附属泉州第一医院胃肠肝胆外科行手术切除并病理学诊断的44例胃癌组织标本及癌旁组织标本。选取4株胃癌细胞系(SGC7901、HS-746T、MGC803、BGC823)和正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1)。RT-qpCR检测胃癌组织和细胞系中circATp2B1表达。将circATp2B1表达最低的胃癌细胞分为对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染circATp2B1过表达质粒)。分别采用MTT法和Transwell小室法检测各组胃癌细胞的增殖活性和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析circATp2B1可能的作用机制,RT-qpCR和Western blot检测circATp2B1下游基因的表达。结果胃癌组织circATp2B1表达量显著低于癌旁组织(0.92±0.08 vs 3.62±0.23,pp2B1表达量均显著低于GES-1细胞(ppp5),侵袭能力显著下降(pp2B1可靶向结合mir-452-5p(pmir-452-5p可靶向结合原钙黏附蛋白9(pCDH9)(pmir-452-5p表达显著下降(1.00±0.04 vs 0.24±0.05,ppCDH9基因表达显著上升(pp2B1在胃癌组织和细胞系中低表达,circATp2B1通过靶向结合mir-452-5p正调控pCDH9基因表达,进而降低胃癌HS-746T细胞增殖和侵袭能力。

关键词：胃癌环状RNA circATp2B1 mir-452-5p 原钙黏附蛋白9

mir-452-5p调控YTHDF2肝细胞癌细胞凋亡和铁死亡的机制研究

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河北医药 2022年第23期44卷 3544-3548,3553页

作者：王雪梅河西学院附属张掖人民医院甘肃省张掖市734000

目的探究mir-452-5p、YTH结构域家族成员2(YTH domain family,member 2,YTHDF2)调控肝细胞癌细胞凋亡、铁死亡的作用及其机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qpCR)法检测L02、SMMC-7721、HepG2、Huh7、Hep3B细胞中mir-452-5p、YTHDF2的表达;脂质体法将anti-mir-con组(转染anti-mir-con)、anti-mir-452-5p组(转染anti-mir-452-5p)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-YTHDF2组(转染pcDNA-YTHDF2)、anti-mir-452-5p+si-con组(转染anti-mir-452-5p+si-con)、anti-mir-452-5p+si-YTHDF2组(转染anti-mir-452-5p+si-YTHDF2)转染HepG2细胞;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(pI)双染法检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK8)法检测细胞活性;蛋白免疫印迹(western blotting,WB)实验检测细胞中YTHDF2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GpX4)和铁蛋白重链(FTH1)的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与正常肝细胞比较,肝细胞癌细胞(SMMC-7721、HepG2、Huh7、Hep3B)中mir-452-5p显著升高,YTHDF2显著降低(p5);抑制mir-452-5p明显抑制HepG2细胞活性,促进凋亡,促进ROS、SLC7A11、GpX4和FTH1表达(p5)。过表达YTHDF2具有与抑制mir-452-5p相类似的HepG2细胞调控作用。mir-452-5p显著抑制野生型YTHDF2细胞的荧光活性,并负向调控YTHDF2表达。敲减YTHDF2部分逆转抑制mir-452-5p对HepG2细胞凋亡、铁死亡的调控作用。结论mir-452-5p在肝细胞癌细胞中高表达,抑制mir-452-5p促进癌细胞凋亡、铁死亡,其机制与靶向YTHDF2有关。

关键词： mir-452-5p 肝细胞癌 YTHDF2 凋亡铁死亡

LINC01140通过mir-452-5p/Wnt/β-catenin轴调控食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖与侵袭

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中国肿瘤生物治疗杂志 2021年第9期28卷 900-907页

作者：郭艳丽尹情韩俊淑郭炜沈素朋梁佳董稚明河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所河北石家庄050011

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01140在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法:选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第四医院收治的13... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01140在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法:选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第四医院收治的133例ESCC患者的临床资料和GEpIA数据库中收集的182例ESCC组织及286例食管正常黏膜组织的LINC01140表达数据,以及ESCC细胞系Kyse150、Eca109和TE13。用qpCR法检测癌组织和细胞中LINC01140的表达水平,分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。分别将pcDNA3.1-LINC01140、阴性对照(pcDNA3.1-NC)或mir-452-5p mimic及阴性对照(mir-NC)转染到Eca109细胞,MTS、Transwell实验分别检测细胞的增殖与侵袭能力。用双荧光报告基因实验及TOp/FOp报告基因系统检测LINC01140与mir-452-5p的靶向结合作用及LINC01140对Wnt/β-catenin通路活化水平的影响。结果:LINC01140在ESCC组织和细胞中表达均显著下调(均pp5)。LINC01140过表达明显抑制Eca109细胞的增殖及侵袭能力(均pmir-452-5p影响Wnt/β-catenin信号通路的活化水平继而调控Eca109细胞的恶性生物学行为。结论:LINC01140通过靶向mir-452-5p/Wnt/β-catenin轴促进ESCC细胞的增殖与侵袭能力,其有望成为ESCC患者靶向治疗的潜在靶点及预后评估的标志物。

关键词：食管鳞状细胞癌 Eca109细胞 LINC01140 mir-452-5p Wnt/β-catenin信号通路增殖侵袭

mir-452-5p在非小细胞肺癌中的临床意义及潜在靶向机制研究

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miR-452-5p在非小细胞肺癌中的临床意义及潜在靶向机制研究

作者：甘晓宁广西医科大学

学位级别：硕士

肺癌长年位居全世界恶性肿瘤中发病率及死亡率的首位,至今也未能得到有效的控制和改善。肺癌最常见的病理组织学类型主要为肺腺癌与肺鳞癌。MicroRNA通过其靶向调控功能在肿瘤发生发展中起重要作用,但mir-452-5p在肺癌中的作用及机制尚... 详细信息

肺癌长年位居全世界恶性肿瘤中发病率及死亡率的首位,至今也未能得到有效的控制和改善。肺癌最常见的病理组织学类型主要为肺腺癌与肺鳞癌。MicroRNA通过其靶向调控功能在肿瘤发生发展中起重要作用,但mir-452-5p在肺癌中的作用及机制尚不清楚,对其系统深入地研究将对肺癌的诊断与治疗有重要意义。目的1.证明mir-452-5p在肺腺癌中的表达水平与临床意义2.证明mir-452-5p在肺鳞癌中的表达水平与临床意义3.探索说明mir-452-5p的潜在靶向作用机制材料与方法1.本研究采用实时定量pCR(real time RT-qpCR,quantitative real time polymerase chain reaction)检测101例肺腺癌患者的石蜡组织标本中mir-452-5p的表达水平,分析mir-452-5p表达与肺腺癌患者诊断、预后及临床病理特征间的关系。并通过The Cancer Genome Atlas(TCGA)与GeneExpression Omnibus(GEO)公共数据库进一步确证mir-452-5p在肺腺癌中的表达水平。2.利用TCGA实验数据分析mir-452-5p的表达及其与肺鳞癌患者诊断、预后及临床病理特征间的关系。通过TCGA与GEO公共数据库进一步确证mir-452-5p在肺鳞癌中的表达水平。3.应用14个在线预测工具(mirWalk,Target Scan,miranda,pictar2,RNAhybrid,mirDB,RNA22-HAS,Targetminer,EMBL-EBI,DIANA-microT,mirbridge,mirMap,mirNAMap及pITA)来预测mir-452-5p的靶基因。结合DAVID和GSEA在线软件,对mir-452-5p的靶基因进行GO和KEGG通路富集分析,以探明其在非小细胞肺癌生物学进程中可能的分子作用机制。通过STRING在mir-452-5p的潜在靶基因中,筛选出在蛋白分子相互作用网络(protein-protein interaction,ppI)中起关键作用的核心基因(hub gene)。通过分析TCGA测序数据来验证mir-452-5p与hub gene之间的表达相关性。之后,通过荧光素酶报告基因实验,进一步证实mir-452-5p与核心基因CDKN1B的靶向关系。结果1.肺腺癌中mir-452-5p的表达情况及其临床意义检测发现mir-452-5p在肺腺癌组织中表达明显低于相应癌旁组织(2.2952±1.4518 vs.5.3319±3.0569,p55[95%confidence interval(CI):0.805.906,p5.1%,特异性76.2%,诊断界值为2.80。mir-452-5p表达水平与肺腺癌患者的肿瘤大小(r=-0.243,p=0.014),淋巴结转移(r=-0.214,p=0.032)及TNM分期(r=-0.209,p=0.036)呈显著负相关。TCGA数据分析结果显示mir-452-5p在肺腺癌组织中相对癌旁肺组织低表达(8.3539±1.40738 vs.8.7608±2.06101,p5%CI:0.587.769,pmir-452-5p在肺腺癌中低表达[平均标准偏差(standard mean deviations,SMD)=-0.393,95%CI:-0.7740.011,p=0.044]。2.肺鳞癌中mir-452-5p的表达情况及其临床意义分析TCGA数据,发现mir-452-5p在肺鳞癌组织中相对癌旁肺组织高表达(7.1525±1.39063 vs.6.0885±0.35298,p5%CI:0.734.821,pmir-452-5p表达水平与肺鳞癌患者的年龄(r=-0.187,p=0.001)和TNM分期(r=-0.119,p=0.028)呈显著负相关。联合GEO数据库结果,通过meta分析进一步得出mir-452-5p在肺鳞癌中高表达(SMD=0.372,95%CI:0.020.724,p=0.038)。3.mir-452-5p的潜在功能与机制通过14个在线预测软件,对mir-452-5p共预测得到17094个候选靶基因。选取同时有7个在线预测工具阳性结果和在pubmed中检索文献得到的已通过实验验证的mir-452-5p的靶基因,共筛选出249个mir-452-5p靶基因进行GO及pathway分析。GO功能富集分析结果表明在17条显著富集于生物学过程(biological process,Bp)的通路中(pmir-45

关键词： mir-452-5p 非小细胞肺癌(NSCLC) 肺腺癌(LUAD) 肺鳞癌(LUSC) 临床病理参数 CDKN1B

血浆外泌体mir-452作为胃癌诊断的生物标志物

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胃肠病学和肝病学杂志 2019年第9期28卷 1023-1029页

作者：杨佳佳党旖旎彭磊金多晨桑怀鸣陈梅红张国新南京医科大学第一附属医院消化内科

目的筛选胃癌血浆外泌体中差异表达的mirNA,分析其对胃癌诊断的敏感性与特异性及与胃癌患者的疾病特点之间的相关性。方法收集南京医科大学第一附属医院消化内科病理确诊为胃癌的住院患者与消化内科及体检中心的无癌健康对照人群的血液... 详细信息

目的筛选胃癌血浆外泌体中差异表达的mirNA,分析其对胃癌诊断的敏感性与特异性及与胃癌患者的疾病特点之间的相关性。方法收集南京医科大学第一附属医院消化内科病理确诊为胃癌的住院患者与消化内科及体检中心的无癌健康对照人群的血液样本,离心后试剂盒抽提血浆外泌体及其RNA,通过透射电子显微镜观察、蛋白质印迹分析(Western blotting)鉴定标志蛋白及纳米粒径分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)对血浆外泌体进行鉴定,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-pCR)鉴定与胃癌发病相关的mirNA。结果共纳入胃癌患者80例和健康对照80名。成功对2例血浆外泌体(GC1和NC1)进行鉴定以证实其相关特性。在初始筛选阶段,对12例胃癌和12名健康对照者的血浆外泌体RNA进行qRT-pCR验证并依据其各自的2^-△Ct值,分析受试者的诊断ROC曲线下面积(AUC)。与健康对照者相比,胃癌的血浆外泌体mir-452-5p表达量显著升高(p=0.002),mir-452-5p的AUC值为0.798(95%CI:0.552~0.883)。而后纳入新的68对样本对筛选结果进一步验证,mir-452-5p的表达趋势与初始筛选一致,且诊断AUC值为0.733(95%CI:0.647~0.818)。分析已验证的mir-452-5p表达水平与胃癌病理特征无相关性(p>0.05)。结论血浆外泌mir-452-5p可能为检测胃癌的新型潜在生物标志物,然而其对疾病的病理特性的影响仍需更大样本量的实验进一步研究。

关键词：胃癌外泌体 mir-452-5p 标志物