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CREM基因在mir-199b-5p敲除小鼠精液和睾丸中的表达研究

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中华男科学杂志 2024年第2期30卷 111-117页

作者：袁秀秀王煜内蒙古医科大学附属医院生殖医学中心内蒙古呼市浩特010000 大同市第三人民医院生殖医学科山西大同037000

目的:探讨mir-199b-5p基因敲除对雄性小鼠精液和睾丸中CREM表达水平的影响。方法:选mir-199b-5p基因敲除(KO)雄性小鼠和野生型(WT)雄性C57bL/6小鼠。观察2组小鼠体重和睾丸指数。HE染色观察睾丸结构变化。显微镜下观察精子形态及计数精... 详细信息

目的:探讨mir-199b-5p基因敲除对雄性小鼠精液和睾丸中CREM表达水平的影响。方法:选mir-199b-5p基因敲除(KO)雄性小鼠和野生型(WT)雄性C57bL/6小鼠。观察2组小鼠体重和睾丸指数。HE染色观察睾丸结构变化。显微镜下观察精子形态及计数精子浓度。数据库预测CREM与mir-199b-5p的靶向关系。RT-qpCR和Western印迹法分别检测2组小鼠睾丸中CREM mRNA和蛋白表达水平变化。结果:两组之间小鼠体重和睾丸指数无明显变化;与WT组比较,KO组小鼠精液精子计数稍下降,但无统计学差异(p>0.05);精液涂片示KO组精子浓度较WT组稀疏,但无统计学差异(p>0.05);睾丸病理示:与WT组比较,KO组睾丸体积较小,睾丸组织正常,生精小管可见各级生精细胞和支持细胞,生精小管界膜、管径无明显异常;数据库预测CREM基因是mir-199b-5p的靶基因;RT-qpCR结果示:与WT组比较,KO组雄鼠精液和睾丸组织中CREM mRNA表达水平均明显下降(p5),差异有统计学意义。Western印迹结果显示:与WT组比较,KO组雄鼠睾丸组织中CREM蛋白表达水平明显下降(p5),差异有统计学意义。随访半年,统计两组雄性小鼠出生数,发现KO组雄鼠的出生数较WT组明显下降(p5)。结论:mir-199b-5p敲除小鼠精液和睾丸中CREM基因表达下调,推测mir-199b-5p可能靶向作用于CREM基因进而影响雄性小鼠的生育功能。

关键词： mir-199b-5p CREM基因精液睾丸

mir-199b-5p在糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化中作用机制

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生物技术 2024年第2期34卷 227-231,260页

作者：张冬李宗英高原肖娜沧州市中心医院肾内一科河北沧州061000

[目的]探索mir-199b-5p在糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化中的作用机制。[方法]选择92只雄性大鼠,随机分为空白对照组、DN组、慢病毒对照组、mir-199b-5p敲低组,造模结束后第12 w处死大鼠。对比上述4组大鼠在肾组织病理学、肾功能指标,Klotho... 详细信息

[目的]探索mir-199b-5p在糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化中的作用机制。[方法]选择92只雄性大鼠,随机分为空白对照组、DN组、慢病毒对照组、mir-199b-5p敲低组,造模结束后第12 w处死大鼠。对比上述4组大鼠在肾组织病理学、肾功能指标,Klotho、Wnt、β-catenin等相关蛋白表达差异。[结果] DN组、慢病毒对照组的mir-199b-5p表达高于空白对照组和mir-199b-5p敲低组,mir-199b-5p敲低组高于空白对照组(1.08±0.24、3.27±0.12、3.22±0.53、1.62±0.15;pbUN、β-catenin、α-SMA、MMp-7均显著高于空白对照组和mir-199b-5p敲低组,mir-199b-5p敲低组高于空白对照组(78.66±2.12 vs 61.14±3.78;14.04±1.09 vs 9.26±1.73;32.33±2.57 vs 27.23±1.78;0.97±0.02 vs 0.34±0.35;3.49±0.28 vs 1.43±0.23;pmir-199b-5p敲低组,mir-199b-5p敲低组低于空白对照组(23.18±3.12 vs 31.99±3.09;pmir-199b-5p表达可以上调糖尿病肾纤维化Klotho表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路从而让α-SMA和MMp-7表达下降,进而延缓肾脏纤维化,改善肾功能指标,因此该通路可能是临床上治疗糖尿病肾纤维化的新靶点。

关键词：糖尿病肾病肾脏纤维化大鼠 mir-199b-5p Klotho Wnt β-catenin

lncRNA LUCAT1通过mir-199b-5p/AKAp1信号轴促进肝癌进展的机制

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中国肝脏病杂志（电子版） 2024年第2期16卷 61-72页

作者：金璞谷从阳陈涛成都市新都区人民医院病理科四川成都610500 内江市第一人民医院病理科四川内江641000 成都市新都区人民医院检验科四川成都610500

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺癌相关转录物1(lung cancer associated transcript 1,LUCAT1)通过mir-199b-5p/A激酶锚定蛋白1(A-kinase anchoring protein 1,AKAp1)信号轴促进肝癌转移的机制。方法收集2020年1月至2021年10月在成都市新都区人民医院进行手术治疗的80例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的肝癌及癌旁组织标本,采用RT-qpCR检测LUCAT1、mir-199b-5p、AKAp1 mRNA水平。将Huh7、HepG2细胞进行不同转染,pHRi-si-NC、pHRi-si-LUCAT1分别转染至Huh7、HepG2细胞,pHRi-si-LUCAT1和pHRi-anti-mir-NC、pHRi-si-LUCAT1和pHRi-anti-mir-199b-5p、pHRi-si-LUCAT1和pHRi-NC、pHRi-si-LUCAT1和pHRi-AKAp1分别共转染至Huh7、HepG2细胞。双荧光素酶报告验证LUCAT1对mir-199b-5p、mir-199b-5p对AKAp1的调控关系;EdU染色、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qpCR检测细胞LUCAT1、mir-199b-5p和AKAp1 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMp)-2、MMp-9水平。向20只裸鼠皮下注射已转染pHRi-si-LUCAT1的Huh7细胞悬液,30 d后测定移植瘤体积、质量、LUCAT1、mir-199b-5p、AKAp1 mRNA、Ki67、MMp-2、MMp-9水平。结果①与癌旁组织相比,HCC组织LUCAT1(1.51±0.53比1.13±0.72;t=3.802,pp1 mRNA(3.73±0.97比1.28±0.76;t=17.783,pmir-199b-5p(1.21±0.53比3.56±1.02;t=18.286,ppHRi-si-LUCAT1后,mir-199b-5p水平显著升高(Huh7:3.71±0.28比1.00±0.10,t=15.787,p=0.004;HepG2:3.49±0.25比1.00±0.11,t=15.790,p=0.004),LUCAT1(Huh7:0.34±0.05比1.00±0.06,t=14.637,p=0.005;HepG2:0.41±0.06比1.00±0.07,t=11.084,p=0.008)和AKAp1 mRNA水平显著降低(Huh7:0.52±0.05比1.00±0.09,t=8.075,p=0.015;HepG2:0.55±0.06比1.00±0.13,t=5.444,p=0.032);细胞EdU阳性率、划痕愈合率和细胞侵袭数均显著降低(p均5);Ki67(Huh7:0.24±0.03比0.92±0.06,t=17.558,p=0.003;HepG2:0.10±0.03比0.51±0.03,t=16.738,p=0.004)、MMp-2(Huh7:0.20±0.03比0.90±0.05,t=20.793,p=0.002;HepG2:0.05±0.02比0.21±0.02,t=9.798,p=0.010)、MMp-9(Huh7:0.25±0.04比0.75±0.05,t=13.525,p=0.005;HepG2:0.15±0.03比0.59±0.04,t=15.242,p=0.004)表达水平显著降低;共转染pHRi-si-LUCAT1和pHRi-anti-mir-199b-5p后,mir-199b-5p水平显著降低(Huh7:1.42±0.11比3.65±0.25,t=14.142,p=0.005;HepG2:1.30±0.05比3.71±0.20,t=20.248,p=0.002),LUCAT1(Huh7:0.85±0.10比0.40±0.06,t=6.683,p=0.022;HepG2:0.90±0.08比0.45±0.04,t=8.714,p=0.013)和AKAp1 mRNA水平显著升高(Huh7:0.80±0.07比0.55±0.04,t=5.371,p=0.033;HepG2:0.85±0.08比0.51±0.04,t=6.584,p=0.022);细胞EdU阳性率、划痕愈合率和细胞侵袭数均显著升高(p均5);Ki67(Huh7:0.91±0.06比0.25±0.0

关键词：肺癌相关转录物1 mir-199b-5p A激酶锚定蛋白1 肝细胞癌转移

H12、RS13和RL6在mir-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达研究

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中国生育健康杂志 2024年第1期35卷 48-53页

作者：袁秀秀王煜内蒙古医科大学第一临床医学院妇产科呼和浩特010000 内蒙古医科大学附属医院生殖医学中心

目的探讨组蛋白H1变体(H12)、核糖体蛋白S13(RS13)和核糖体蛋白L6(RL6)在mir-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达变化。方法(1)自行繁育mir-199b-5p敲除(Knockout,KO)和野生型(Wild-type,WT)C57bL/6小鼠,分别记录两组雌鼠产仔情况(2)基因型鉴定验证分组,取性成熟期小鼠(鼠周龄为11~13周)卵巢用于验证实验。(3)用实时荧光定量pCR(qpCR)检测每组小鼠(n=10)卵巢组织中H12、RS13和RL6的mRNA表达水平变化。(4)用蛋白免疫印迹法(Wb)检测每组小鼠(n=3)卵巢组织中H12、RS13和RL6的蛋白表达水平变化。结果(1)共统计半年内两组雌鼠产仔情况:WT组生产27窝,平均每窝产仔数为(8.15±0.41)只;KO组生产28窝,平均每窝产仔数为6.43±0.32只,与WT组比较,KO组雌鼠产仔数显著下降(p=0.004),差异有统计学意义。(2)qpCR结果示:与WT组比较,KO组卵巢组织中H12(p=0.038)、RS13(p=0.011)和RL6(p=0.009)的mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义。(3)Wb结果示:与WT组比较,KO组小鼠卵巢组织中H12(p=0.014)蛋白表达水平显著升高,而RS13(p=0.005)和RL6(p=0.009)蛋白表达水平显著下降,差异均有统计学意义。结论敲除mir-199b-5p可能影响H12、RL6和RS13基因的表达使小鼠卵巢储备能力下降。

关键词： mir-199b-5p 基因敲除卵巢小鼠

mir-199b-5p在头颈癌细胞中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

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上海口腔医学 2018年第3期27卷 265-269页

作者：王茜李光辉郭嘉孙强郑州大学第一附属医院口腔医学中心河南郑州450052

目的:明确mi R-199b-5p差异表达在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)发生、发展中的作用并探讨其生物学功能。方法:检测128例HNSCC组织中mi R-199b-5p的表达,通过Kaplan-Meier生存分析,分析临床病理参数与mi R-199b-5p表达水平之间的关系。通过mi... 详细信息

目的:明确mi R-199b-5p差异表达在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)发生、发展中的作用并探讨其生物学功能。方法:检测128例HNSCC组织中mi R-199b-5p的表达,通过Kaplan-Meier生存分析,分析临床病理参数与mi R-199b-5p表达水平之间的关系。通过mi RNA异常表达对HNSCC细胞生长、侵袭和迁移能力以及克隆形成的影响,检测HNSCC细胞中mi RNA的功能。采用SpSSl9.0软件包对数据进行t检验。结果:在79例淋巴结转移的HNSCC组织中,mi R-199b-5p的表达水平为1.68±0.21;在49例非淋巴结转移的HNSCC组织中,其表达水平为2.64±0.24,差异显著(p=0.001)。在HNSCC患者中,高表达mi R-199b-5p的患者总体存活率显著增高(p=0.01),且高表达水平的mi R-199b-5p可以显著抑制头颈鳞癌细胞的侵袭和转移。结论:作为抑癌基因,mi R-199b-5p在HNSCC的发生、发展中起着关键作用。

关键词： mir-199b-5p 头颈鳞癌转移侵袭

mir-199b-5p调控C1GALT1对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

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医学研究生学报 2022年第3期35卷 257-266页

作者：夏童向婷谢海龙佘兰南华大学衡阳医学院/湖南省重点实验室/肿瘤研究所衡阳421001 湖南环境生物职业技术学院护理学院衡阳421001

目的 C1GALT1已被报道在多种癌症中呈现高表达,mir-199b-5p对肿瘤的发生有抑制作用,但在胃癌中的作用机制尚不明确。文章旨在探讨mir-199b-5p通过调控C1GALT1对胃癌bGC-823细胞增殖、迁移和侵袭影响。方法利用生物信息学分析C1GALT1在... 详细信息

目的 C1GALT1已被报道在多种癌症中呈现高表达,mir-199b-5p对肿瘤的发生有抑制作用,但在胃癌中的作用机制尚不明确。文章旨在探讨mir-199b-5p通过调控C1GALT1对胃癌bGC-823细胞增殖、迁移和侵袭影响。方法利用生物信息学分析C1GALT1在胃癌中的表达情况。细胞进行分组(1)SiRNA转染:空白对照组1、Si-NC组、Si组(3、5、8μM);(2)双荧光素酶实验分组:MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-mu组、MI+h-C1GALT1-3UTR-mu组;(3)mirNA转染:MI组、 MI-NC组、空白对照组2;IN组、IN-NC组,空白对照组3;(4)共转染:空载体组、Si-C1GALT1组、Si-C1GALT1+mir-199b-5p inhibitor。Western blot检测SiRNA抑制C1GALT1的表达,CCK8法、细胞划痕和Transwell实验分别检测SiRNA干扰C1GALT1对胃癌bGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力。预测能与其存在负向调控的mirNAs,双荧光素酶报告基因实验验证C1GALT1与mir-199b-5p之间的靶向关系。转染mir-199b-5pmimics/inhibitor后用Western blot检测转染后C1GALT1的表达情况,CCK8法、细胞划痕和Transwell实验分别检测mir-199b-5p对胃癌bGC823细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过Si-C1GALT1和mir-199b-5p inhibitor共转染检测其对胃癌bGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力影响。结果生物信息学提示C1GALT1在胃癌中存在高表达,通过SiRNA抑制C1GALT1表达后,发现C1GALT1低表达会使胃癌bGC-823细胞增殖、迁移和侵袭能力[(0.270±0.005)%、(534.0±24.1)个、(156.0±42.5)个]低于空白对照组1[(0.519±0.012)%、(783.0±12.8)个、(460.0±19.4)个]与Si-NC组[(0.523±0.001)%、(744.0±8.6)个、(477.0±26.9)个],差异具有统计学意义(p5)。双荧光素报告显示,mir-199b-5p能靶向结合C1GALT1。mir-199b-5p mimics降低bGC-823细胞中C1GALT1表达水平(pmir-199b-5p inhibitor提高bGC-823细胞中C1GALT1表达水平(p5)。mir-199b-5p mimics组bGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭能力[(0.256±0.002)%、(145±5.7)个、(368±57.6)个]与空白对照组2[(0.529±0.003)%、(651.0±35.7)个、(668.0±21.5)个]和mir-199b-5p mimic NC组[(0.514±0.004)%、(641.0±17.3)个、(662.0±36.1)个]相比均降低(p5);mir-199b-5p inhibitor组bGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭能力[(0.984±0.001)%、(1 089.0±114.4)个、(894.0±15.4)个]与空白对照组3[(0.529±0.003)%、(651.0±35.7)个、(668.0±21.5)个]和mir-199b-5p inhibitor NC[(0.532±0.011)%、(630.0±17.7)个、(672.0±48.5)个]相比均提高(p5)。Si-C1GALT1和mir-199b-5p inhibitor共转染可部分逆转Si-C1GALT1对胃癌bGC-823细胞增殖、迁移和侵袭抑制作用。结论 mir-199b-5p可能通过调控C1GALT1抑制胃癌bGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭。

关键词：胃癌 bGC-823细胞 mir-199b-5p C1GALT1 增殖侵袭迁移

姜黄素通过mir-199b-5p抑制结肠癌SW1116细胞的增殖、迁移和侵袭

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中国药理学通报 2020年第7期36卷 957-964页

作者：凌元亮徐磊吴辰杭州市拱墅区中西医结合医院中医外科浙江杭州310010 浙江省新华医院(浙江中医药大学附属第二医院)消化内科浙江杭州310005 杭州市拱墅区中西医结合医院消化(肿瘤)内科浙江杭州310010

目的探索姜黄素通过mir-199b-5p调控结肠癌SW1116细胞的增殖、迁移和侵袭的生物学作用及其相关机制。方法采用0、5、10、15和20μmol·L^-1的姜黄素处理SW1116细胞24 h,使用EDU染色和Transwell分别测定增殖、迁移和侵袭;RT-qpCR法检测mi... 详细信息

目的探索姜黄素通过mir-199b-5p调控结肠癌SW1116细胞的增殖、迁移和侵袭的生物学作用及其相关机制。方法采用0、5、10、15和20μmol·L^-1的姜黄素处理SW1116细胞24 h,使用EDU染色和Transwell分别测定增殖、迁移和侵袭;RT-qpCR法检测mir-199b-5p的表达;Western blot检测pAK4、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表达。采用mir-199b-5p抑制剂转染SW1116细胞后,再用20μmol·L^-1的姜黄素处理24 h,使用EDU染色和Transwell分别测定增殖、迁移和侵袭的影响。使用双荧光素酶报告基因测定法确定mir-199b-5p是否靶向pAK4编码基因的3′-非翻译区(3′-UTR)。结果姜黄素浓度依赖性抑制SW1116细胞的增殖、迁移和侵袭,且在此过程中伴随的mir-199b-5p表达升高,pAK4、p-MEK/MEK和p-ERK/ERK的表达降低。敲减mir-199b-5p能部分逆转姜黄素对SW1116细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。pAK4是mir-199b-5p的靶基因,且mir-199b-5p负调节pAK4的表达。结论姜黄素通过mir-199b-5p/pAK4/MEK/ERK轴抑制结肠癌SW1116细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：姜黄素 mir-199b-5p 结肠癌 pAK4 增殖细胞迁移细胞侵袭

mir-199b-5p靶向调控DDR1在肺腺癌中的作用机制研究

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miR-199b-5p靶向调控DDR1在肺腺癌中的作用机制研究

作者：王书廷昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]研究选择H1299肺腺癌细胞株当作实验对象,查阅文献得知mir-199b-5p在肺腺癌H1299细胞中低表达,通过转染慢病毒载体在H1299细胞株中过表达mir-199b-5p,观察mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭等生物学行为的... 详细信息

[目的]研究选择H1299肺腺癌细胞株当作实验对象,查阅文献得知mir-199b-5p在肺腺癌H1299细胞中低表达,通过转染慢病毒载体在H1299细胞株中过表达mir-199b-5p,观察mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭等生物学行为的影响;其次,初步讨论mir-199b-5p与DDR1的彼此作用的关系;最后,通过裸鼠成瘤实验探讨mir-199b-5p在体内对肺腺癌生长的调节作用。旨在为临床上肺腺癌的诊治提供新的生物标志物和潜在靶点。[方法]1、以mir-199b-5p为作用靶点合成过表达载体并转染肺腺癌H1299细胞,同时设立NC组作为阴性对照组。2、采用荧光定量逆转录pCR及荧光显微镜检测转染效率,筛选稳定转染细胞株。3、细胞划痕实验研究过表达mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞迁移能力的作用。4、Transwell实验研究过表达mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞迁移及侵袭能力的作用。5、CCK8实验研究过表达mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞增殖能力的作用。6、平板克隆形成实验探究过表达mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞克隆形成能力的影响。7、运用荧光素酶报告基因实验检测并验证DDR1是mir-199b-5p的直接靶基因。8、蛋白质印迹实验检测过表达mir-199b-5p对肺腺癌H1299细胞中DDR1蛋白表达水平的作用。9、通过裸鼠成瘤实验探究过表达mir-199b-5p后对肺腺癌H1299细胞裸鼠皮下成瘤能力的影响。[结果]1、通过qRT-pCR检测显示mir-199b-5p-OE能明显提高H1299肺腺癌细胞株中 mir-199b-5p 表达水平(p5)。2、CCK8检测显示mir-199b-5p-OE转染H1299细胞后细胞增殖受到显著抑制(p5)。3、克隆形成实验检测显示mir-199b-5p-OE转染H1299细胞后细胞克隆形成能力受到明显抑制(p5)。4、细胞划痕、Transwell实验显示经mir-199b-5p-OE转染H1299细胞后迁移速度和侵袭能力明显下降(p5)。5、荧光素酶报告基因实验表明过表达组中,DDR1 3'UTR-luc-WT的荧光素酶活性明显减少,并通过qRT-pCR验证发现过表达细胞株中DDR1 mRNA表达水平显著降低(p5)。6、Western blotting结果显示:经mir-199b-5p-OE转染后,DDR1蛋白表达降低(p5)。7、裸鼠成瘤实验结果显示:经mir-199b-5p-OE转染后,裸鼠皮下成瘤能力明显受到抑制,免疫组化检测DDR1含量明显减少(p5)。[结论]1、过表达mir-199b-5p可明显抑制肺腺癌细胞株H1299的增殖和侵袭,降低其迁移速度,减弱其克隆形成能力。2、mir-199b-5p过表达组中,DDR1 3'UTR-luc-WT的荧光素酶活性明显减少,DDR1 mRNA表达水平显著降低,DDR1表达含量明显降低。3、过表达mir-199b-5p可使肺腺癌细胞株H1299裸鼠皮下成瘤能力受到明显抑制,免疫组化检测DDR1含量明显减少。4、mir-199b-5p可能通过靶向DDR1在肺腺癌中起抑癌作用,是临床上肺腺癌诊断及治疗的潜在靶点。

关键词： mir-199b-5p 肺腺癌 DDR1

mir-199b-5p在胃癌发生中的作用及机制研究

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miR-199b-5p在胃癌发生中的作用及机制研究

作者：陈松达广西医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:胃癌(Gastric cancer,GC)是最常见的恶性肿瘤之一,胃癌患者死亡率居高不下,导致胃癌患者预后不良的主要原因是早期胃癌患者检出率低。传统的胃癌检查手段主要有组织病理、影像学等,但患者确诊后往往处于进展期。因此迫切需... 详细信息

背景与目的:胃癌(Gastric cancer,GC)是最常见的恶性肿瘤之一,胃癌患者死亡率居高不下,导致胃癌患者预后不良的主要原因是早期胃癌患者检出率低。传统的胃癌检查手段主要有组织病理、影像学等,但患者确诊后往往处于进展期。因此迫切需要找出新的检测手段提高早期胃癌患者检出率,而液体活检最具社会价值的应用是肿瘤早期筛查。越来越多的证据支持微小RNA(mirNA)在肿瘤发生发展中发挥重要作用,然而mirNA在人类胃癌中的作用在很大程度上仍是未知。因此本研究旨在通过生物信息学筛出与胃癌发生相关的潜在风险mirNA,寻找可作为胃癌患者血浆潜在的诊断标志物,并初步探索其在胃癌发生中的作用及作用机制。方法:(1)通过公开的胃癌表达谱数据,结合生物信息学分析,筛选出在胃癌进程中潜在的风险mirNAs,RT-pCR检测其在胃癌患者和正常人血浆中的表达差异。(2)RT-pCR检测mir-199b-5p在胃癌细胞(SGC7901、MGC803和AGS)中的表达水平。同时在SGC7901、MGC803细胞中建立稳定转染的mir-199b-5p-mimic和mir-199b-5p-inhibitor细胞模型,检测过表达/抑制mir-199b-5p对SGC7901、MGC803细胞mir-199b-5p m RNA表达水平的影响。(3)通过Ed U细胞增殖实验、集落形成实验、Transwell迁移实验、细胞划痕实验和Western blot检测EMT相关蛋白证明mir-199b-5p在体外对胃癌细胞生物学作用的影响。(4)构建裸鼠皮下移植瘤模型及肺转移瘤模型研究mir-199b-5p在体内对胃癌细胞的生物学作用。(5)生物信息学预测mir-199b-5p的候选靶基因,RT-pCR和免疫组化检测潜在靶基因HHIp在胃癌细胞和组织的表达水平。(6)双荧光素酶实验验证mir-199b-5p与其潜在靶基因HHIp的相互作用,RT-pCR和细胞免疫荧光检测mir-199b-5p表达水平的改变对HHIp的影响。(7)在SGC7901、MGC803细胞中建立稳定转染的mir-NC+lv-NC、mir-199b-5p-mimic+lv-NC、mir-NC+lvHHIp、mir-199b-5p-mimic+lv-HHIp的细胞模型,RT-pCR检测HHIp表达水平。(8)通过一系列细胞功能实验进行恢复实验,进一步探讨mir-199b-5p在胃癌细胞的作用机制。结果:(1)通过生物信息学分析,我们筛选出在胃癌组织显著上调并与胃癌患者不良预后相关的风险mir-199b-5p,RT-pCR结果显示mir-199b-5p在胃癌患者血浆中显著高表达(p5)。(2)RT-pCR结果显示,与正常胃粘膜上皮细胞GES1相比,mir-199b-5p在胃癌细胞SGC7901和MGC803均显著上调(pp>0.05);与mir-NC组相比,SGC7901和MGC803细胞中mir-199b-5p-mimic组的mir-199b-5p表达均升高(pmir-199b-5p-inhibitor表达均降低(p5)。(3)与mir-NC组相比,过表达mir-199b-5p可以显著促进SGC7901和MGC803细胞增殖(p5)、迁移(p5)和EMT进程,敲低mir-199b-5p表达后则显著抑制SGC7901和MGC803细胞增殖(p5)、迁移(p5)和EMT能力。(4)裸鼠皮下移植瘤模型及肺转移瘤模型结果显示:与mir-NC组相比,mir-199b-5p-mimic组明显促进SGC7901细胞在裸鼠体内增殖(p5)和肺转移能力(p5),mir-199b-5p-inhibitor组显著抑制SGC7901细胞在裸鼠体内增殖(p5)和肺转移能力(p5)生物信息学预测mir-199b-5p的潜在靶基因为HHIp;RT-pCR结果显示,与GES1相比,HHIp m RNA水平在SGC7901、MGC803和AGS中均显著低表达(pp主要表达于细胞胞浆,并且在胃癌组织阳性反应较弱。(6)双荧光素酶实验结果显示mir-199b-5p能直接结合HHIp;RT-pCR结果显示,与mir-NC组相比,SGC7901和MGC803细胞的mir-199b-5p-mimic组HHIp表达水平下调(p5),mir-199b-5p-inhibitor组HHIp表达水平上调(p5);细胞免疫荧光结果显示:与mir-NC组相比,SGC7901和MGC803细胞的mir-199b-5p-mimic组HHIp蛋白表达强度受抑制,mir-1

关键词： mir-199b-5p HHIp 胃癌生物信息学