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miR-139-5p、mir-27a-3p和SLC7A11表达与胶质瘤临床病理因素间的相关性研究

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miR-139-5p、miR-27a-3p和SLC7A11表达与胶质瘤临床病理因素间的...

作者：孔春禹兰州大学

学位级别：硕士

目的:探讨miR-139-5p、mir-27a-3p和SLC7A11表达与胶质瘤临床病理因素间的相关性,评价其在脑胶质瘤诊断、疗效预测及预后判断中的价值。方法:基于CGGA数据库探讨不同级别(2、3、4级)胶质瘤miR-139-5p、mir-27a-3p和SLC7A11的表达水平,... 详细信息

目的:探讨miR-139-5p、mir-27a-3p和SLC7A11表达与胶质瘤临床病理因素间的相关性,评价其在脑胶质瘤诊断、疗效预测及预后判断中的价值。方法:基于CGGA数据库探讨不同级别(2、3、4级)胶质瘤miR-139-5p、mir-27a-3p和SLC7A11的表达水平,评估其对胶质瘤生存的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)和定量实时聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q-pCR)分别检测胶质瘤组织、正常对照脑组织SLC7A11和miR-139-5p、mir-27a-3p、SLC7A11 mRNA的表达水平,评价miR-139-5p、mir-27a-3p和SLC7A11 mRNA与脑胶质瘤临床病理因素和预后间的相关性,并验证生物信息学结果。数据统计分析采用SpSS 22.0、image J和Graph pad prism 9.0软件。结果:1.生物信息学分析显示SLC7A11在低级别胶质瘤和胶质母细胞瘤中的表达显著高于正常对照脑组织(pmiR-139-5p在2级、3级及4级胶质瘤中的表达差异显著(pmir-27a-3p在低级别胶质瘤中的表达低于高级别胶质瘤(pmiR-139-5p高表达胶质瘤的生存期显著高于低表达胶质瘤(pmir-27a-3p低表达胶质瘤的生存期显著高于高表达胶质瘤(ppp5),且低级别胶质瘤中SLC7A11 mRNA表达低于高级别胶质瘤(p5);2级与4级胶质瘤间SLC7A11 mRNA表达差异显著(p5),而2级与3级、3级与4级胶质瘤间SLC7A11 mRNA表达无统计学差异(p>0.05);SLC7A11蛋白在正常脑组织表达低于胶质瘤,且高级别胶质瘤的表达更高。3.高级别胶质瘤(3级胶质瘤+4级胶质瘤)miR-139-5p表达显著低于非高级别胶质瘤(正常对照脑组织+2级胶质瘤)(p5);mir-27a-3p在正常对照脑组织和胶质瘤组织中的表达无统计学差异(p>0.05),且mir-27a-3p表达与胶质瘤分级间无相关性(p>0.05)。4.胶质瘤miR-139-5p表达与MGMT甲基化状态和WHO分级间具有相关性(p5),且MGMT甲基化阳性、低分级胶质瘤表达升高;SLC7A11 mRNA表达与Ki67、p53突变状态、MGMT甲基化状态及WHO分级显著相关(p5),且高Ki-67(>20%)、p53突变型、MGMT甲基化阴性、及高分级胶质瘤表达升高;mir-27a-3p表达与Ki67、p53突变状态、MGMT甲基化状态及WHO分级间无相关性(p>0.05)。5.miR-139-5p高表达胶质瘤的生存期显著高于低表达胶质瘤(p5),而mir-27a-3p表达水平与脑胶质瘤生存期间无统计学差异(p>0.05);SLC7A11mRNA低表达胶质瘤生存期显著高于高表达胶质瘤(p5);Cox单因素分析显示miR-139-5p、SLC7A11 mRNA表达水平、肿瘤部位、WHO分级及Ki-67与胶质瘤预后相关(p5),且miR-139-5p低表达,SLC7A11 mRNA高表达,颞部,高级别与高Ki-67(>20%)的胶质瘤患者预后较差。而Cox多因素分析未发现胶质瘤患者预后的独立预后危险因素(p>0.05)。6.胶质瘤miR-139-5p与SLC7A11 mRNA表达间呈显著呈负相关(r=-0.407,p5),而mir-27a-3p与SLC7A11 mRNA表达间无相关性(rs=0.196,p>0.05);ROC曲线分析显示miR-139-5p和SLC7A11 mRNA对高级别胶质瘤具有较高的诊断效能(AUC=0.8429,p5;AUC=0.8786,p5),而mir-27a-3p的诊断效能低(AUC=0.5607,p>0.05)。结论:1.高级别胶质瘤SLC7A11 mRNA表达高于低级别胶质瘤、miR-139-5p表达低于低级别胶质瘤,而mir-27a-3p表达与胶质瘤分级间无相关性,因此miR-139-5p、SLC7A11 mRNA表达对胶质瘤WHO分级有一定的预测价值;2.胶质瘤miR-139-5p和SLC7A11mRNA表达与WHO分级、MGMT甲基化状态间存在相关性,而SLC7A11 mRNA表达与Ki67增殖指数、p53突变状态间亦具有相关性,提示miR-139-5p、SLC7A11 mRNA表达与胶质瘤预后间存在相关性;3.胶质瘤mi

关键词： miR-139-5p mir-27a-3p SLC7A11 神经胶质瘤预后

circ_0001429靶向miR-139-5p/TGIF1分子轴调控膀胱癌T24细胞恶行生物学行为

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中国肿瘤生物治疗杂志 2020年第5期27卷 515-521页

作者：陈洪波郑府胡晓晖朱圣亮向小龙郭紫成恩施土家族苗族自治州中心医院泌尿外科湖北恩施445000

目的:探究circ0001429通过调控miR-139-5p/转录生长因子影响因子1(TGF-interacting factor 1,TGIF1)分子轴对膀胱癌T24细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用q pCR实验检测circ0001429在膀胱癌细胞系SW780、T24、5637和人膀胱上皮永生化... 详细信息

目的:探究circ0001429通过调控miR-139-5p/转录生长因子影响因子1(TGF-interacting factor 1,TGIF1)分子轴对膀胱癌T24细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用q pCR实验检测circ0001429在膀胱癌细胞系SW780、T24、5637和人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p、circ0001429与TGIF1之间的靶向调控关系;将T24细胞分为NC组、sh-circ0001429组、miR-139-5p mimics组、sh-TGIF1组、pcDNA-circ0001429+sh-TGIF1组、miR-139-5p mimics+pcDNA-TGIF1组以及sh-circ0001429+miR-139-5p inhibitor组,Western blotting检测各组细胞中TGIF1的表达水平,CCK-8法、Transwell实验和流式细胞术分别检测circ0001429、miR-139-5p和TGIF1对T24细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果:circ0001429在3珠膀胱癌细胞系中呈高表达(均pp5或pmiR-139-5p、miR-139-5p与TGIF1存在靶向关系;过表达miR-139-5p显著抑制T24细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡(均pmiR-139-5p促进T24细胞增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡(均pmiR-139-5p促进膀胱癌细胞T24的增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡。

关键词：膀胱癌 circ0001429 miR-139-5p 转录生长因子影响因子1 增殖侵袭迁移凋亡

miR-139-5p靶向调控DNMT1抑制胶质母细胞瘤的生长和转移

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西安交通大学学报（医学版） 2021年第2期42卷 238-244页

作者：李传坤王伟姜海涛何雅玲西安交通大学第一附属医院神经外科陕西西安710061 西安交通大学能源与动力工程学院陕西西安710049

目的考察miR-139-5p在胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)中的表达及生物学作用,以及miR-139-5p对DNA甲基转移酶1(DNMT1)的调控作用。方法通过qRT-pCR检测GBM肿瘤组织、配对癌旁组织、人正常神经胶质细胞系HEB和人神经胶质瘤细胞系U251中m... 详细信息

目的考察miR-139-5p在胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)中的表达及生物学作用,以及miR-139-5p对DNA甲基转移酶1(DNMT1)的调控作用。方法通过qRT-pCR检测GBM肿瘤组织、配对癌旁组织、人正常神经胶质细胞系HEB和人神经胶质瘤细胞系U251中miR-139-5p的表达。通过转染miR-139-5p模拟物来上调U251细胞中miR-139-5p的表达,通过转染靶向DNMT1的siRNA(DNMT1-siRNA)来下调DNMT1的表达。qRT-pCR、Western blotting、免疫组织化学和免疫荧光检测组织和细胞中DNMT1和2型神经纤维瘤病(NF2)的表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术和Matrigel Transwell评估U251细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。结果与癌旁组织或HEB细胞相比,GBM组织和U251细胞中的miR-139-5p表达被抑制(p5)。与对照细胞相比,转染miR-139-5p模拟物明显下调了DNMT1的表达并上调了NF2的表达(p5)。与对照细胞相比,转染DNMT1-siRNA明显促进了NF2的表达(p5)。转染miR-139-5p模拟物或DNMT1-siRNA均可诱导U251细胞凋亡并抑制细胞侵袭(p5)。结论 miR-139-5p在GBM中发挥抗癌作用,miR-139-5p通过靶向负调控DNMT1来抑制肿瘤的增殖和转移。

关键词： miR-139-5p 胶质母细胞瘤 DNA甲基转移酶1 2型神经纤维瘤病(NF2)基因细胞增殖细胞侵袭

miR-139-5p通过调节Wnt/β-catenin信号通路在卵巢癌中发挥抑癌作用

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现代肿瘤医学 2022年第11期30卷 1920-1924页

作者：高俊彦长治医学院山西长治046000

目的:探讨miR-139-5p表达的改变对卵巢癌的影响,并进一步探索其中的信号通路。方法:通过RT-pCR(real time-polymerase chain reaction)测量卵巢癌组织样品中miR-139-5p的表达水平。通过细胞实验,包括CCK-8(cell counting kit-8)、集落... 详细信息

目的:探讨miR-139-5p表达的改变对卵巢癌的影响,并进一步探索其中的信号通路。方法:通过RT-pCR(real time-polymerase chain reaction)测量卵巢癌组织样品中miR-139-5p的表达水平。通过细胞实验,包括CCK-8(cell counting kit-8)、集落形成和Transwell测定,探索miR-139-5p对卵巢癌细胞功能的影响。通过荧光素酶基因测定确认miR-139-5p的靶基因,并通过质粒转染检验miR-139-5p对Wnt/β-catenin信号通路的作用。结果:miR-139-5p在卵巢癌组织及卵巢癌细胞中表达明显降低。miR-139-5p过表达可明显抑制卵巢癌细胞的活性、增殖和迁移能力,并且在裸鼠体内可明显抑制卵巢癌的体积和质量。miR-139-5p过表达可抑制β-catenin蛋白的表达,从而抑制卵巢癌的增长。结论:miR-139-5p的过表达可通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展,其可能是一种抑制卵巢癌进展的肿瘤抑制因子。

关键词： miR-139-5p 卵巢癌 Wnt/β-catenin

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miR-139-5p的研究进展

中国胸心血管外科临床杂志 2023年第1期30卷 149-153页

作者：方韶韩朱晓雷张潇文冯义辉李宁耿国军厦门大学附属第一医院胸外科福建厦门360000 厦门大学福建厦门361003 福建医科大学福州350122

MicroRNA是一类非编码且在进化上高度保守的小分子RNA,通过与信使RNA(mRNA)的特异性结合,从而调控基因的表达。目前,关于microRNA的研究已引起全世界的高度重视,其中miR-139-5p表达在癌症的变化发展过程中起着重要作用。在相当一部分癌... 详细信息

MicroRNA是一类非编码且在进化上高度保守的小分子RNA,通过与信使RNA(mRNA)的特异性结合,从而调控基因的表达。目前,关于microRNA的研究已引起全世界的高度重视,其中miR-139-5p表达在癌症的变化发展过程中起着重要作用。在相当一部分癌症中,如肺癌、食管癌、乳腺癌、口腔舌鳞状细胞癌、肝癌,具有抑制癌细胞增殖、转移、侵袭的作用。在癌症治疗中,miR-139-5p可联合部分抗癌药物,延缓抗癌药物的耐药性,以及增强肿瘤对放疗的敏感性,对癌症预后有积极的影响;且其在其它疾病的组织、细胞研究领域中分别起着不同作用,如神经细胞、炎症组织。本文对miR-139-5p的研究现状展开分析。

关键词： miR-139-5p 癌症放化疗炎症综述

CircRNF13通过miR-139-5p/IGF1R轴促进胰腺癌增殖、侵袭及迁移的机制研究

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CircRNF13通过miR-139-5p/IGF1R轴促进胰腺癌增殖、侵袭及迁移的...

作者：刘欣原贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:由于胰腺癌恶性程度高,早期易转移且缺乏良好的诊治标记物,导致患者生存率低且预后不好,现有临床诊断分子标记物不能良好满足临床需求,因此筛选新的高效的胰腺癌诊治靶标尤为关键。本研究验证了circRNF13在胰腺癌中的差异表达,并... 详细信息

目的:由于胰腺癌恶性程度高,早期易转移且缺乏良好的诊治标记物,导致患者生存率低且预后不好,现有临床诊断分子标记物不能良好满足临床需求,因此筛选新的高效的胰腺癌诊治靶标尤为关键。本研究验证了circRNF13在胰腺癌中的差异表达,并探讨了circRNF13对胰腺癌增殖、侵袭及迁移能力的影响及相应分子机制,以期为胰腺癌临床诊治提供新的思路与潜在靶标。方法:本研究经sanger测序鉴定了胰腺癌细胞中circRNF13的环状结构,确认其反向剪接位点。使用实时定量逆转录pCR(Real-time quantitative reverse transcription pCR,RT-q pCR)检测胰腺癌组织与细胞系中circRNF13的表达量。使用RNase R保护实验验证胰腺癌细胞中circRNF13环形结构的稳定性,通过RNA核浆分离实验与荧光原位杂交实验(Fluorescence in situ hybridization,FISH)确认circRNF13在胰腺癌中的亚细胞定位。后续在胰腺癌细胞中转染circRNF13小干扰RNA以敲降circRNF13的表达,通过CCK-8,平板克隆及Ed U实验验证circRNF13对胰腺癌细胞增殖能力的影响,通过流式细胞周期检测验证circRNF13对胰腺癌细胞周期的调控作用,通过划痕愈合实验及Transwell实验验证circRNF13对胰腺癌细胞侵袭与迁移能力的影响,进一步通过体内实验验证circRNF13对胰腺癌肿瘤生长的影响并使用免疫组化(IHC)检测瘤体组织中增殖相关标志物Ki67与pCNA的阳性率。利用CSCD,circinteractome,mi RDB,mi RTarbase,Target Scan等数据库预测circRNF13潜在结合的mi RNA及mi RNA的靶m RNA。通过基因本体论(Go Ontology,GO)与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析筛选胰腺癌中circRNF13可能涉及到的细胞功能与信号通路。通过双荧光素酶报告基因实验筛选与circRNF13结合的具体mi RNA,进一步通过回复实验验证靶mi RNA mi R-139-5p对circRNF13功能的影响。结合生物信息学分析,pCR与双荧光素酶报告基因实验筛选mi R-139-5p靶m RNA分子,通过功能实验验证靶m RNA IGF1R对mi RNA的回复作用。通过Western-blot实验验证circRNF13对IGF1R及其下游分子表达量的影响,结合pCR与Western-blot实验验证circRNF13与mi R-139-5p调控IGF1R及下游分子表达量的方式。进一步功能功能实验验证circRNF13/mi R-139-5p/IGF1R轴对胰腺癌增殖,侵袭,迁移与细胞周期的调控作用。结果:Sanger测序及pCR结果显示胰腺癌细胞中circRNF13有环形结构且在RNase R存在的环境中具有较高稳定性,RNA核浆分离及FISH实验显示circRNF13主要定位于胰腺癌细胞质中。功能实验结果显示circRNF13促进了胰腺癌细胞周期由G1向S期的转变及胰腺癌细胞的增殖,侵袭与迁移。体内实验结果显示circRNF13敲降后抑制了胰腺癌肿瘤生长。双荧光素酶报告基因结果显示circRNF13与mi R-139-5p相互结合,mi R-139-5p可以抑制circRNF13对胰腺癌细胞增殖,侵袭,迁移能力的影响及circRNF13对胰腺癌细胞周期的调控作用。pCR结果与双荧光素酶报告基因结果显示mi R-139-5p结合IGF1R m RNA并抑制其表达,功能实验结果显示IGF1R可回复mi R-139-5p在胰腺癌中的效应。Western-blot及pCR实验结果显示circRNF13可通过mi R-139-5p促进IGF1R及其下游分子的表达,后续功能实验结果显示circRNF13/mi R-139-5p/IGF1R轴增强了胰腺癌细胞增殖,侵袭与迁移能力,并促进了胰腺癌细胞周期由G1向S期的转变。结论:1.胰腺癌中circRNF13具有环形结构,且在胰腺癌组织中及细胞系中circRNF13表达均高于正常胰腺组织与细胞。2.circRNF13促进了胰腺癌细胞的增殖,侵袭,迁移及细胞周期由G1向S期的转变,在体内促进胰腺癌肿瘤生长。3.circRNF13通过mi R-139-5p/IGF1R轴增强胰腺癌细胞增殖,侵袭与迁移能力并参与胰腺癌细胞周期的调节。

关键词：胰腺癌 circRNF13 增殖侵袭细胞周期 miR-139-5p IGF1R

miR-139-5p通过靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖与侵袭

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中国肿瘤生物治疗杂志 2020年第1期27卷 19-24页

作者：姜平杨喜科王秋宇邵兰云王松朋方建瑞付鹏晓郭盈盈南阳市中心医院妇科河南南阳473000

目的:探讨miR-139-5p靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:选取2018年1月至2018年12月在河南省南阳市中心医院妇科手术切除的24例EOC患者的癌和相应的癌旁组织标本,以及人卵巢癌... 详细信息

目的:探讨miR-139-5p靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:选取2018年1月至2018年12月在河南省南阳市中心医院妇科手术切除的24例EOC患者的癌和相应的癌旁组织标本,以及人卵巢癌细胞系SKOV3、ES2、HEY-T30和人卵巢上皮细胞株IOSE80,用qpCR检测EOC组织和细胞系中miR-139-5p和Notch1 mRNA的表达。将过表达miR-139-5p载体、重组质粒pLV-Notch1转染至SKOV3细胞,并设置空白对照组(Ctrl组)和阴性对照组(NC组),用双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与Notch13’-UTR靶向关系,用CCK-8、Transwell、划痕愈合实验分别检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力,用Western blotting检测细胞中增殖和迁移相关蛋白的表达。结果:与癌旁组织和IOSE80细胞比较,EOC组织和细胞系中miR-139-5p表达显著降低、Notch1 m RNA表达显著升高(均pmiR-139-5p的靶基因。与NC组比较,miR-139-5p mimic组3 d时SKOV3细胞的增殖、侵袭、迁移能力和Notch1、NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin及N-cadherin表达水平均明显降低(均ppmiR-139-5p抑制SKOV3细胞增殖、侵袭与迁移的作用。结论:miR-139-5p可靶向Notch1抑制EOC细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能与其下调NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin、N-cadherin而上调E-cadherin的表达水平有关。

关键词：上皮性卵巢癌 SKOV3细胞 miR-139-5p Notch1 增殖侵袭迁移

miR-139-5p对子痫前期滋养层细胞的增殖和侵袭的调控作用

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基因组学与应用生物学 2021年

作者：梅莉张宁芝闻柳刘勇阜阳人民医院产科阜阳人民医院产前诊断中心阜阳师范大学生物与食品工程学院

胎盘滋养细胞的生物学功能在子痫前期(pE)及其并发症中至关重要。本研究旨在揭示mi R-139-5p对子痫前期滋养层细胞的增殖和侵袭的调控作用。采用RT-pCR方法检测了pE患者和健康产妇的胎盘组织中转化生长因子β诱导因子1 (TGIF1)和mir-139... 详细信息

胎盘滋养细胞的生物学功能在子痫前期(pE)及其并发症中至关重要。本研究旨在揭示mi R-139-5p对子痫前期滋养层细胞的增殖和侵袭的调控作用。采用RT-pCR方法检测了pE患者和健康产妇的胎盘组织中转化生长因子β诱导因子1 (TGIF1)和miR-139-5p的表达。通过双重荧光素酶报告基因检测确定TGIF1和miR-139-5p之间的关系。通过CCK-8分析和Transwell分析评估人绒毛膜滋养层细胞系HTR8/SVneo细胞的增殖和侵袭。通过Western blot检测HTR8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶-2(MMp-2)、MMp-9和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMp-1)的表达。结果显示，与健康对照组相比，pE患者胎盘中TGIF1的mRNA水平显著升高，而miR-139-5p的水平显著降低。当TGIF1-WT与miR-139-5p mimic共转染时，荧光素酶活性显著下降。miR-139-5p的过表达促进了细胞增殖和侵袭。miR-139-5p mimic的转染显著上调了细胞中MMp-2和MMp-9的蛋白表达，但下调了TIMp-1的蛋白表达。TGIF1的过表达逆转了miR-139-5p对细胞增殖和侵袭的促进作用。本研究证明pE患者胎盘中miR-139-5p的表达下调，而TGIF1的表达上调。此外，miR-139-5p直接靶向TGIF1来促进滋养层细胞的增殖和侵袭。

关键词：子痫前期滋养层细胞 miR-139-5p TGIF1 增殖侵袭

基于miR-139-5p/FoxO1/Keap1/Nrf2通路探讨人参皂苷Rd对脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡的影响及机制

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基于miR-139-5p/FoxO1/Keap1/Nrf2通路探讨人参皂苷Rd对脑缺血再...

作者：姚懿芹新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:缺血性脑卒中是以脑循环血流量减少为特征的脑血管疾病,以其发病率高、致残率高及病死率高已成为威胁人类健康的“三大杀手”之一。近年来研究表明,脑缺血再灌注损伤可能与神经元发生细胞焦亡有关。人参皂苷Rd能够保护神经元免受... 详细信息

目的:缺血性脑卒中是以脑循环血流量减少为特征的脑血管疾病,以其发病率高、致残率高及病死率高已成为威胁人类健康的“三大杀手”之一。近年来研究表明,脑缺血再灌注损伤可能与神经元发生细胞焦亡有关。人参皂苷Rd能够保护神经元免受脑缺血后再灌注损伤,但其具体的保护机制较为复杂,目前尚未完全阐释清楚。因此,本研究以细胞焦亡为切入点,从体内和体外两个层面探讨人参皂苷Rd对脑缺血再灌注损伤的作用机理,为把人参皂苷Rd开发成有效的抗脑缺血神经保护剂提供科学理论依据。方法:1、体内实验:取6-8周龄SpF级雄性C57BL/6小鼠随机分为7组:假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(MCAO/R)、人参皂苷Rd低剂量组(10mg/kg)、人参皂苷Rd中剂量组(20 mg/kg)、人参皂苷Rd高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rd(40 mg/kg)+Nrf2抑制剂(ML385)组、人参皂苷Rd(40 mg/kg)+mi R-139-5p拮抗剂(mi R-139-5p antagomir)组,每组96只。除Sham组外,其余各组采用线栓法建立小鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型。人参皂苷Rd干预组分别在造模前30 min腹腔注射低、中、高剂量人参皂苷Rd。人参皂苷Rd+Nrf2抑制剂组在给予40 mg/kg人参皂苷Rd干预的基础上造模前90 min经腹腔注射30 mg/kg ML385。人参皂苷Rd(40 mg/kg)+mi R-139-5p拮抗剂组在给予40 mg/kg人参皂苷Rd干预的基础上在造模前3天经侧脑室内注射mi R-139-5p antagomir。再灌注24 h后,采用Longa神经评分系统对小鼠神经功能缺陷进行评分,TTC染色测定脑梗死百分比,计重法测定脑含水量,Nissl染色测定脑皮层组织神经元的形态学变化,免疫荧光法测定脑皮层组织细胞焦亡的情况,DCFH-DA荧光探针法检测脑皮层组织内ROS的含量,免疫荧光法检测脑皮层组织内NLRp3与TXNIp的共定位情况,RT-pCR检测脑皮层组织内mi R-139-5p、Fox O1、Keap1、NLRp3、ASC、Caspase-1 m RNA表达水平,Western blot检测脑皮层组织内Fox O1、Keap1、总Nrf2、核内Nrf2、HO-1、NQO1、Trx1、NLRp3、ASC、Caspase-1、GSDMD的蛋白表达水平,ELISA法检测脑组织内炎症因子IL-18和IL-1β的分泌水平。2、体外实验:无菌条件下,从怀孕18天的C57BL/6孕鼠胚胎中提取原代皮层神经元,正常培养1周后将神经元随机分为10组:对照组(Control)、模型组(OGD/R)、人参皂苷Rd低剂量组(5μM)、人参皂苷Rd中剂量组(10μM)、人参皂苷Rd高剂量组(20μM)、人参皂苷Rd(20μM)+Fox O1过表达质粒(pc DNA3.1-Fox O1)转染组、pc DNA3.1-Fox O1转染组、Fox O1-sh RNA慢病毒载体转染组、mi R-139-5p模拟物(mi R-139-5p mimic)转染组、mi R-139-5p抑制物(mi R-139-5p inhibitor)转染组。采用MTT法检测细胞活力,LDH法检测细胞损伤,流式细胞术检测神经元焦亡水平,DCFH-DA荧光探针法检测神经元内ROS的含量,免疫共沉淀法(Co-Ip)检测神经元内NLRp3与TXNIp的相互作用,RTpCR检测神经元内mi R-139-5p、Fox O1、Keap1、NLRp3、ASC、Caspase-1 m RNA表达水平,Western blot检测神经元内Fox O1、Keap1、总Nrf2、核内Nrf2、HO-1、NQO1、Trx1、NLRp3、ASC、Caspase-1、GSDMD的蛋白表达水平,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子IL-18和IL-1β的分泌水平,双荧光素酶报告基因验证mi R-139-5p靶向负调控Fox O1,染色质免疫共沉淀法(Ch Ip)检测Fox O1与Keap1基因启动子区域的结合水平。结果:体内实验:1、不同剂量(10、20、40 mg/kg)人参皂苷Rd干预后可显著改善小鼠神经功能缺陷,明显降低脑梗死体积和脑水肿比例,并改善脑组织皮层神经元的损伤情况,使其形态恢复与假手术组近似。其中,40 mg/kg人参皂苷Rd效果最佳。2、不同剂量(10、20、40 mg/kg)人参皂苷Rd干预后可显著降低小鼠脑组织内神经元焦亡比例、焦亡相关蛋白NLRp3、ASC、Caspase-1 p20、GSDMDN的蛋白表达水平、IL-18和IL-1β的分泌水平、细胞内ROS的含量以及TXNIp与NLRp3的共定位水平。其中,40 mg/kg人参皂苷Rd效果最佳。3、不同剂量(10、20、40 mg/kg)人参皂苷Rd干预后可明显下调小鼠脑组织内Keap1的

关键词：人参皂苷Rd 脑缺血再灌注损伤细胞焦亡 miR-139-5p NLRp3炎症小体