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现代肿瘤医学 2024年第10期32卷 1773-1780页

作者：吴巍芸陈晓玲何焕金谭文凯叶石才李爱婷周柱良广东医科大学附属医院消化系统疾病研究室广东湛江524001 广东医科大学附属医院消化内科广东湛江524001

目的:探讨lncrna draic对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬、增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:使用GEPIA 2.0数据库分析draic在CRC组织中的表达及预后价值。受试者工作特征(ROC)曲线评估draic在CRC中的诊断价值。利用UALCA... 详细信息

目的:探讨lncrna draic对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬、增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:使用GEPIA 2.0数据库分析draic在CRC组织中的表达及预后价值。受试者工作特征(ROC)曲线评估draic在CRC中的诊断价值。利用UALCAN在线数据库分析draic的表达与CRC临床病理指标的关系。在CRC细胞系HCT-116和HT-29中转染draic过表达质粒(OE-draic)以过表达draic,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞技术和TUNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和AKT/mTOR通路蛋白的表达。转染OE-draic并加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后,再采用同上方法分别检测CRC细胞的增殖、凋亡情况,以及LC3B、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达。结果:draic在CRC组织中表达显著下调,ROC曲线下面积(AUC)为0.781。低表达draic的CRC患者总生存率较差。draic低表达与肿瘤分期、组织学分型、体重等临床病理指标相关。过表达draic后,CRC细胞增殖能力减弱,凋亡率增加,Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、LC3B-II/LC3B-I蛋白表达上调,p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达量下调(Pdraic组相比,OE-draic+3-MA组HCT-116和HT-29细胞的增殖能力增强,凋亡率下降(Pdraic在CRC组织中低表达,并与CRC患者较差的预后相关,draic通过增强CRC细胞自噬,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。

关键词：结直肠癌 lncrna draic 自噬增殖凋亡

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长链非编码RNA draic在肺腺癌细胞中的作用及机制研究

长链非编码RNA DRAIC在肺腺癌细胞中的作用及机制研究

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作者：刘宝林华北理工大学

学位级别：硕士

目的通过对TCGA数据库和GEO数据库的分析,发现了长链非编码RNA draic(lncrna draic)在肺腺癌中的高表达,并通过在肺腺癌组织和细胞中进行验证,探究lncrna draic对肺腺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡等恶性表型的影响,并进而对其发挥作用的... 详细信息

目的通过对TCGA数据库和GEO数据库的分析,发现了长链非编码RNA draic(lncrna draic)在肺腺癌中的高表达,并通过在肺腺癌组织和细胞中进行验证,探究lncrna draic对肺腺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡等恶性表型的影响,并进而对其发挥作用的机制展开深入研究,以期为肺腺癌的治疗带来全新的依据和方向。方法1采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time fluorescene polymerase chain reaction,q RT-PCR)的实验测定了肺腺癌细胞系与人肺正常上皮细胞中的lncrna draic与microRNA let-7i-5p的表达差异。2采用转染si RNA的方法对A549和H1299细胞中lncrna draic进行敲减,通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot实验检测敲减lncrna draic对细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。3通过原位杂交实验检测lncrna draic的亚细胞定位,通过生物信息学网站预测lncrna draic的靶基因,并用双荧光素酶报告实验和q RT-PCR实验分析lncrna draic对靶基因的调控作用。4采用转染let-7i-5p mimics的方法对A549和H1299细胞中microRNA let-7i-5p进行过表达,通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot实验检测过表达microRNA let-7i-5p对细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。5在A549和H1299细胞中共转染si RNA-draic和let-7i-5p inhibitor,通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot实验检测共转染si RNA-draic和let-7i-5p inhibitor对细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果1 lncrna draic在肺腺癌组织中的表达高于癌旁组织,在细胞系中的表达高于肺正常上皮细胞,转染si RNA后lncrna draic表达明显下降。2与对照组相比,CCK-8和集落形成实验表明敲减lncrna draic组细胞的增殖能力下降,划痕实验和Transwell实验表明敲减lncrna draic组细胞的迁移和侵袭能力下降,流式细胞术表明敲减lncrna draic组的细胞凋亡率升高,Western blot实验发现敲减lncrna draic组细胞中的Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白增加,Bcl-2蛋白减少,表明敲减lncrna draic促进细胞凋亡蛋白的表达。3原位杂交实验证明lncrna主要位于细胞质。双荧光素酶报告实验表明,let-7i-5p mimics与draicWT共转染细胞后,荧光强度较mi R-NC与draic-WT共转染组明显降低,而let-7i-5p mimics与draic-MUT共转染后,荧光强度较mi R-NC与draic-MUT共转染组无统计学意义。Micro RNA let-7i-5p在肺腺癌细胞系中的表达低于肺正常上皮细胞。4转染let-7i-5p mimics后microRNA let-7i-5p的表达明显增加,与对照组相比,CCK-8和集落形成实验表明过表达microRNA let-7i-5p组细胞的增殖能力下降,划痕实验和Transwell实验表明过表达microRNA let-7i-5p组细胞的迁移和侵袭能力下降,流式细胞术表明过表达microRNA let-7i-5p组的细胞凋亡率升高,Western blot实验发现过表达microRNA let-7i-5p组细胞中的Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白增加,Bcl-2蛋白减少,表明过表达microRNA let-7i-5p促进细胞凋亡蛋白的表达。5挽救实验表明,抑制microRNA let-7i-5p的表达后可逆转敲减lncrna draic对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制,逆转敲减lncrna draic对细胞凋亡的促进。结论1 lncrna draic在肺腺癌组织和细胞系中高表达,敲减lncrna draic可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞的凋亡。2 Micro RNA let-7i-5p在肺腺癌细胞系中低表达,过表达microRNA let-7i-5p可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞的凋亡。3 lncrna draic通过靶向上调microRNA let-7i-5p抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移侵袭能力,促进细胞凋亡。图 31 幅;表 2 个;参 139 篇。

关键词： lncrna draic 肺腺癌增殖凋亡 microRNA let-7i-5p

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