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基于itraq的蛋白组学研究揭示银莱汤治疗高热量饮食合并肺炎小鼠的作用机制（英文）

Journal of Traditional Chinese Medical Sciences 2024年第1期 21-32+148页

作者：李倩倩刘铁钢白辰马雪颜刘慧郑子安万宇翔于河马玉玲谷晓红北京中医药大学中医学院北京中医药大学中医疫病研究院贵州中医药大学中医学院北京中医药大学第三附属医院牛津大学OCMRC Center

目的：通过蛋白组学探讨银莱汤治疗高热量饮食合并肺炎的潜在机制。方法:基于GEO数据库，选择GSE16377数据集中正常小鼠和高脂饮食小鼠肺组织样本作为测试队列，筛选差异表达基因，并进行生物信息学分析。动物实验部分，将小鼠随机分为... 详细信息

目的：通过蛋白组学探讨银莱汤治疗高热量饮食合并肺炎的潜在机制。方法:基于GEO数据库，选择GSE16377数据集中正常小鼠和高脂饮食小鼠肺组织样本作为测试队列，筛选差异表达基因，并进行生物信息学分析。动物实验部分，将小鼠随机分为正常对照组（N）、高热量饮食合并肺炎组（M）、银莱汤治疗组（Y）。M组在给予高热量饮食的基础上，进行脂多糖溶液雾化（0.5 mg/mL,30min/次，3天）。Y组予银莱汤灌胃（2mL/10g,2次/天，3天）进行干预。对肺组织进行病理学评估；通过定量蛋白质组学筛选肺组织差异表达蛋白，并进行生物信息学分析；通过AutodockVina及MGL Tools软件对肺组织核心差异蛋白与银莱汤有效活性成分进行分子对接，验证银莱汤与核心蛋白的“药-靶关系”；通过蛋白质印迹法验证差异蛋白。结果 :GEO数据挖掘结果显示，高脂饮食可影响小鼠肺组织氧化磷酸化代谢通路。银莱汤可以有效减轻高热量饮食合并肺炎小鼠的肺组织病理损伤。银莱汤干预后肺组织中明显变化的差异蛋白有47个。富集分析显示，差异蛋白与三羧酸循环、氧化磷酸化等能量代谢通路密切相关。PPI网络提示，Atp5a1、Pdha1、Sdha等是银莱汤发挥治疗作用的关键靶蛋白。分子对接结果提示，银莱汤中Brassinolide、Praeruptorin B、Chrysoeriol等成分与Atp5a1结合可能是银莱汤发挥疗效的核心机制。结论:银莱汤可能通过调节三羧酸循环、氧化磷酸化等途径减轻高热量饮食合并肺炎小鼠肺组织损伤。本研究强调了健康饮食对于肺炎患者的重要性，为饮食调摄防治疾病提供了科学依据。

关键词：银莱汤高热量饮食肺炎 itraq蛋白组学能量代谢

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口腔溃疡及其阴虚火旺、胃火炽盛证型的血浆蛋白质代谢特征研究

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中华中医药杂志 2021年第7期36卷 4202-4206页

作者：贺源方邓军胡长峰谢冠群范永升温成平陈娟浙江中医药大学基础医学院杭州310053 浙江省医学科学院安全性评价研究中心杭州310013

目的:采用蛋白组学技术研究口腔溃疡及其阴虚火旺、胃火炽盛证的血浆代谢特征。方法:经itraq-2D和LC-MS/MS分析,结合生物信息学分析获得差异蛋白质,利用脂质组学技术分析血浆脂质含量变化。结果:经蛋白组学分析,鉴定出口腔溃疡患者体内6... 详细信息

目的:采用蛋白组学技术研究口腔溃疡及其阴虚火旺、胃火炽盛证的血浆代谢特征。方法:经itraq-2D和LC-MS/MS分析,结合生物信息学分析获得差异蛋白质,利用脂质组学技术分析血浆脂质含量变化。结果:经蛋白组学分析,鉴定出口腔溃疡患者体内61种差异蛋白质,其中炎症因子C-反应蛋白(CRP)、血清沉淀样蛋白A(SAA)、载脂蛋白APOC2、APOM、APOL1和磷脂酰肌醇(PI)等上调,热休克蛋白HSP90、14-3-3和磷脂酰乙醇胺(PE)等下调,凝血因子Ⅻ(F12)在阴虚火旺型患者体内显著升高(P<0.05),补体C1q在胃火炽盛型患者体内显著升高(P<0.05)。结论:口腔溃疡患者体内凝血补体级联系统、糖代谢和脂质代谢等发生特异性变化,且阴虚火旺、胃火炽盛型患者在这些代谢途径中具有不同的代谢特征。

关键词：口腔溃疡 itraq蛋白组学脂质分析阴虚火旺胃火炽盛

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猪妊娠早期子宫腔液外泌体蛋白质组学分析

猪妊娠早期子宫腔液外泌体蛋白质组学分析

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作者：贺艳娟华南农业大学

学位级别：硕士

猪胚胎在附植期间,胚胎与母体之间有着密切的信号交流,很多调节因子在妊娠识别过程中发生复杂而协调的变化从而促进胚胎、子宫内膜和子宫腔微环境发生同步反应。胚胎与母体之间的信号交流需要子宫腔液中的相关因子进行信号传递。近年来... 详细信息

猪胚胎在附植期间,胚胎与母体之间有着密切的信号交流,很多调节因子在妊娠识别过程中发生复杂而协调的变化从而促进胚胎、子宫内膜和子宫腔微环境发生同步反应。胚胎与母体之间的信号交流需要子宫腔液中的相关因子进行信号传递。近年来,外泌体作为细胞间的交流媒介,在生殖系统的微环境中发挥着重要作用。但猪妊娠早期子宫腔液中是否存在外泌体及其蛋白的种类还未见报道。因此分析鉴定猪妊娠早期子宫腔液外泌体的成分及功能为发现调控猪胚胎附植的重要因子奠定基础,为提高胚胎附植成功率提供新的思路。本研究通过分离鉴定子宫腔液外泌体,并通过i TRAQ定量蛋白组学方法对纯种大白母猪发情9天、妊娠9天、妊娠12天和妊娠15天四个时期的子宫腔液外泌体蛋白进行定量和分析,得到以下结果:（1）本研究通过透射电镜结果表明子宫腔液外泌体为膜状囊泡,WB鉴定结果表明外泌体标志物CD9和CD63呈阳性表达,粒径分析子宫腔液来源的外泌体直径在100-150nm之间。（2）itraq蛋白质组学定量生物信息分析表明发情9天与妊娠9天的子宫腔液外泌体蛋白表达模式相近,妊娠12天和妊娠15天的子宫腔液外泌体蛋白表达模式相近。（3）Western Blot鉴定结果表明在四个时期子宫腔液外泌体中均含有ACP5和MEP1B蛋白质。四个时期的子宫内膜切片的免疫组化结果表明ACP5和MEP1B蛋白在猪子宫内膜和猪胚胎滋养层表面表达。（4）MEP1B蛋白在发情9天、妊娠9天、妊娠12天和妊娠15天的猪子宫内膜中均有表达并且随妊娠时间的增加而增加,并且MEP1B蛋白的干扰RNA对猪子宫内膜细胞和胚胎滋养层细胞的活性具有抑制作用。综上所述,猪子宫腔液中存在外泌体,并且外泌体蛋白在发情期与妊娠早期不同时间段的表达有差异,MEP1B蛋白很有可能与胚胎附植有关。

关键词：猪外泌体胚胎附植 itraq蛋白组学 MEP1B

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能量水平对阿勒泰羔羊脂肪代谢的影响

能量水平对阿勒泰羔羊脂肪代谢的影响

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作者：高良霜甘肃农业大学

学位级别：硕士

为满足人们对健康优质羊肉的需求,本试验旨在研究不同能量水平对阿勒泰羔羊血清脂质指标、脂肪沉积分布、脂肪细胞大小、脂肪代谢相关基因mRNA表达,进一步利用itraq蛋白组学技术筛选与脂肪代谢相关的蛋白及其通路,为脂肪代谢的调控提供... 详细信息

为满足人们对健康优质羊肉的需求,本试验旨在研究不同能量水平对阿勒泰羔羊血清脂质指标、脂肪沉积分布、脂肪细胞大小、脂肪代谢相关基因mRNA表达,进一步利用itraq蛋白组学技术筛选与脂肪代谢相关的蛋白及其通路,为脂肪代谢的调控提供数据参考。选取月龄相近(3.5月龄)、体重接近(19.16±0.54)kg、臀型一致、健康状况良好的阿勒泰母羔30只,随机分为3组,每组10只羊,自由采食60 d后,分别按照50%(0.25 MJ/W×)(50%代谢能组)、100%(0.5 MJ/W×d)(100%代谢能组)和150%(0.75 MJ/W×d)(150%代谢能组)的维持代谢能饲喂30 d。结果表明:(1)能量水平对阿勒泰羊的血清脂质指标具有显著影响。在不同能量水平条件下,50%代谢能组的血清葡萄糖、游离脂肪酸、低密度脂蛋白含量显著降低(P蛋白含量显著升高(P组的尾部脂肪、胃肠周围脂肪、大网膜脂肪和总脂肪与胴体重的比值显著低于100%代谢能组和150%代谢能组(P组之间差异不显著(P>0.05)。150%代谢能组的脂肪细胞的直径、周长、面积显著大于100%代谢能组和50%代谢能组(P组(P组的PPARγ、ACC和LPL基因mRNA表达显著低于150%代谢能组(P组的LEPR基因mRNA表达在尾部脂肪、皮下脂肪和大网膜脂肪中显著高于150%代谢能组(P组织中的表达(Pitraq蛋白组学分析筛选出1866个差异蛋白,其中,在GO注释结果中,205个蛋白与氧化还原过程有关,130个蛋白与代谢过程有关,在KEGG注释结果中,151个蛋白与脂肪代谢有关,104个蛋白与能量代谢有关。在差异蛋白分析中,50%代谢能组与150%代谢能组相比有380个差异蛋白。随后,通过GO和KEGG的富集分析,挑选出与脂肪代谢相关的部分差异蛋白进行互作分析,发现EHHADH、ACOX3和ACAA1参与了PPAR信号、脂肪酸代谢、过氧化物酶体三个通路,而SCP2参与PPAR信号和过氧化物酶体通路,ECI2参与脂肪酸代谢和过氧化物酶体通路。在脂肪酸代谢通路中,与其他蛋白互作较多的是HADHA、HADH、ACAA2、HADHB和ACADS蛋白,在过氧化物酶体通路中,HSD17β4、HACL1蛋白互作较多,在PPAR信号通路中,互作较多得是SCP2。本试验结果说明能量水平对阿勒泰羔羊的血清脂质指标、各部位脂肪沉积、脂肪代谢相关基因在转录水平和蛋白通路上具有显著影响,为研究能量水平调控脂肪沉积提供了数据支持,并为阿勒泰羔羊脂肪代谢相关基因的生物学功能研究和遗传进化研究提供分子依据。

关键词：能量水平阿勒泰羊血脂指标基因mRNA表达脂肪代谢 itraq蛋白组学

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