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Cloning,sequencing and expression analysis of cDNA encoding a constitutive heat shock protein 70 (hsc70) in Fenneropenaeus chinensis

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Chinese Science Bulletin 2004年第22期49卷 2385-2393页

作者： JIAOChuanzhen WANGZaizhao LIFuhua ZHANGChengsong XlANGJianhai InstituteofOceanology ChineseAcademyofSciencesQingdao266071China//DepartmentofBiologyDezhouCollegeDezhou253023China//GraduateSchoolofChineseAcademyofSciencesBeijing100039China InstituteofOceanology ChineseAcademyofSciencesQingdao266071China

The cDNA encoding hsc70 of Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis was cloned from hepatopancreas by RT-PCR based on its EST sequence. The full length cDNA of 2090 bp contained an open reading frame of 1956 nucleotides and partial 5′- and 3′-untranslated region(5′- and 3′-UTR). PCR amplification and sequencing analysis showed the existence of introns in the region of 1-547 bp, but they did not exist in the region of 548-2090 bp of hsc70 cDNA. When the deduced 652 amino acid sequence of hsc70 was compared with the members of HSP70 family from other organisms, the results showed 85.9% similarity with hsc71 from Oncorhynchus mykiss and hsc70 from Homo sapiens. It also exhibited 85.8% similarity with HSP70 from Mus musculu and 85.4% with hsc70 from Manduca sexta. Ex- pression analysis showed that hsc70 mRNA was espressed constitutively in hepatopancreas, muscle, eyestalks, haemo- cytes, heart, ovary, intestine and gills in Fenneropenaeus chinensis. No difference could be detected on hsc70 mRNA level in muscle between heat-shocked and control animals.

关键词：无性繁殖 cDNA 表达方式编码热震动蛋白质70 hsc70 虾

HDAC6调控hsc70乙酰化水平对卵巢切除术后骨质疏松骨量丢失的影响

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中华内分泌外科杂志 2022年第2期16卷 190-195页

作者：李慧雷洁赟张丽李双雪雷垣生李峰山西医科大学附属人民医院妇产科太原030012 谢菲尔德大学英国S11WB 山西医科大学附属人民医院呼吸内科太原030012 山西医科大学第二临床医学院神经内科太原030001 太钢总医院普外科太原030003

目的探讨组蛋白乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)通过结合热休克蛋白70(heat-shock protein 70,hsc70)的启动子区域调控其乙酰化对卵巢切除术(oopherectomy,OOX)诱导的骨质疏松(osteoporosis,OP)骨量丢失的影响。方法采用OOX法建立小鼠OP模型。将小鼠分为假手术组、OOX组、OOX+shHDAC6组、OOX+shNC组和OOX+shHDAC6+shhsc70组。采用micro-CT系统和Western blot实验检测小鼠右股骨的骨微观参数及成骨细胞特异性转录因子蛋白表达水平。体外实验中,采用Westwen blot、碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S(ARS)染色实验测定HDAC6和hsc70对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。采用qRT-PCR检测HDAC6和hsc70在组织或细胞中的表达水平。HDAC6和hsc70间的关系采用ChIP实验进行分析。结果与Sham组比较,OOX组小鼠右股骨骨矿物质密度(bone mineral density,BMD)、骨小梁数(trabecular bone number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,***)和骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)表达降低,骨小梁分离度(trabecular bone separation,***)表达升高,Osterix(OSX)和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)的蛋白表达水平降低。此外,与Sham组比较(1±0.11),OOX组HDAC6表达(2.33±0.19)升高(t=10.56,Phsc70启动子区域的乙酰化水平(2.37±0.21)显著降低(t=9.72,Phsc70组细胞中OSX和RUNX2的表达升高,ALP活性和矿化的增加(均Phsc70组OSX和RUNX2的蛋白水平、BMD、Tb.N、***和BV/TV表达降低,***表达升高(均Phsc70的乙酰化水平进而影响OOX诱导的OP骨量丢失,抑制HDAC6能显著改善OP骨量丢失。

关键词： HDAC6 hsc70 乙酰化卵巢切除术骨质疏松骨量丢失

草地贪夜蛾热激蛋白hsc70基因克隆、表达谱及对不同环境胁迫的响应

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植物保护学报 2020年第4期47卷 797-806页

作者：姚梦霜孟建玉杨昌利张长禹贵州大学昆虫研究所贵州省山地农业病虫害重点实验室贵阳550025 贵州省烟草科学研究院贵阳550081

为探讨草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda hsc70基因对A区段紫外辐射(ultraviolet-A radiation,UV-A)及高、低温胁迫的响应,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆hsc70基因并对其进行序列分析,利用实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)技术分析不同龄期、不同组织及UV-A和高、低温胁迫下的表达量。结果显示,草地贪夜蛾hsc70基因(GenBank登录号:MT130717)开放阅读框为1 980 bp,编码659个氨基酸,蛋白质相对分子量为73.12 kD,等电点为5.23;其氨基酸末端序列为KDEL,属于内质网型热激蛋白。草地贪夜蛾hsc70基因与鳞翅目昆虫hsc70同源性高。草地贪夜蛾hsc70表达量在2龄幼虫发育阶段和复眼中表达量最高。UV-A、高、低温胁迫对草地贪夜蛾hsc70基因表达有明显的诱导作用,随着处理时间的延长,hsc70基因表达量呈先增加后降低的趋势;UV-A胁迫下,草地贪夜蛾雌、雄成虫hsc70基因表达量分别在120 min和60 min时达到峰值;36℃胁迫下,草地贪夜蛾雌、雄成虫hsc70基因表达量分别在120 min和90 min时达到峰值;4℃胁迫下,草地贪夜蛾雌、雄成虫hsc70基因表达量均在30 min时达到峰值。表明草地贪夜蛾hsc70基因在草地贪夜蛾适应环境胁迫中发挥着作用。

关键词：草地贪夜蛾 hsc70 基因克隆表达分析

尼罗罗非鱼hsc70的原核表达和多克隆抗体制备

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浙江农业学报 2019年第8期31卷 1272-1279页

作者：潘传燕林勇冯鹏霏张永德罗洪林广西水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室

通过原核表达系统表达尼罗罗非鱼热休克蛋白hsc70,纯化该蛋白并制备其多克隆抗体。对尼罗罗非鱼热休克蛋白进行生物信息学分析,设计特异性引物,扩增出hsc 70基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,并转入大肠埃希菌B21中通过诱... 详细信息

通过原核表达系统表达尼罗罗非鱼热休克蛋白hsc70,纯化该蛋白并制备其多克隆抗体。对尼罗罗非鱼热休克蛋白进行生物信息学分析,设计特异性引物,扩增出hsc 70基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,并转入大肠埃希菌B21中通过诱导剂IPTG进行原核诱导表达,表达产物用SDS-PAGE鉴定并用镍柱进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。结果表明,原核表达系统成功表达了尼罗罗非鱼热休克蛋白hsc70,重组蛋白分子量约为75 ku,主要以包涵体形式表达。经镍柱纯化得到高纯度的hsc70;该蛋白免疫日本大耳兔获得特异性多克隆抗体,效价为1∶2 048 000;Western blot检测到一条75 ku的特异性条带,表明该抗体能特异性地识别尼罗罗非鱼hsc70蛋白。尼罗罗非鱼hsc70蛋白在大肠埃希菌中成功表达,制备的重组蛋白和多克隆抗体为深入研究尼罗罗非鱼hsc70的功能提供了分子工具。

关键词：尼罗罗非鱼 hsc70 原核表达多克隆抗体

褐菖鲉肝hsc70基因的环介导等温扩增技术的建立及在石油污染剂量效应研究中的应用

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生态毒理学报 2014年第3期9卷 524-530页

作者：莫正平陈荣黄火清左正宏厦门大学环境与生态学院近海海洋环境科学国家重点实验室厦门361102 厦门大学生命科学学院厦门361102

从褐菖鲉肝脏中克隆了热休克蛋白hsc70基因,利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立hsc70基因的定量检测方法。为检测该方法的可行性,将褐菖鲉分别暴露于石油水溶性成分(water-soluble fraction,WSF... 详细信息

从褐菖鲉肝脏中克隆了热休克蛋白hsc70基因,利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立hsc70基因的定量检测方法。为检测该方法的可行性,将褐菖鲉分别暴露于石油水溶性成分(water-soluble fraction,WSF)20、60、180μg·L-11 d后,利用real-time PCR及LAMP技术同时测定褐菖鲉肝hsc70 mRNA表达量,两种方法测定结果基本一致,证实LAMP技术可用于褐菖鲉肝hsc70基因的定量。为更细致了解石油WSF影响褐菖鲉肝脏hsc70基因表达的剂量-效应关系,将褐菖鲉分别暴露于25、50、75、100、125、150、175μg·L-1WSF中,5 d后采样,用LAMP技术定量检测hsc70 mRNA。结果表明,hsc70 mRNA表达量在50μg·L-1浓度组即被显著诱导,在75μg·L-1浓度下达到最大值,这说明褐菖鲉肝hsc70基因对石油污染较敏感,有潜力作为海洋石油污染的生物标志物。

关键词：环介导等温扩增褐菖鲉 hsc70 石油水溶性成分实时荧光定量PCR

N-Substituted Matrinic Acid Derivatives:Anti-Heptitis C Virus Agents through down-regulating Host Heat-Stress Cognate Protein 70(hsc70) Expression

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N-Substituted Matrinic Acid Derivatives:Anti-Heptitis C Viru...

2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新

作者： Na-Na Du~+,Zong-Gen Peng~+,Yan-Xin Liu,Jian-Rui Li,Li-Mei Gao,Chong-Wen Bi,Yan-Xing Han,Yan-Xiang Wang,Zhou-Yi Wu,Jian-Dong Jiang,~* Dan-Qing Song~* Institute of Medicinal Biotechnology,Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College,NO.2 Nanwei Road,Xuanwu District,Beijing 100050,China.

Host heat shock cognate protein 70(hsc70) plays an important role in HCV replication, and it has been demonstrated to be a novel target against HCV.N-p-methoxybenzyl matrinic acid(1) was found to be an effective hsc70 down-regulator with good *** using 1 as the lead, twenty-two analogues were synthesized and evaluated for their anti-HCV activity in *** SAR analysis revealed that 1)the benzyl group at the 12-N atom was necessary for activity;2) introduction of electron-drawing substituents might significantly enhance the *** compounds were studied for their safe and pharmacokinetic studies in vivo,among which compounds 8c and 8m exhibited greater anti-HCV activity(SI>23) than that of *** addition,both of them showed good safety(LD>1000 mg/kg) and oral *** consider 8c and 8m to be promising anti-HCV drug candidates for further investigation.

关键词： hsc70 anti-HCV N-substituted matrinic acid

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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大螟hsc70基因克隆及表达模式分析

昆虫学报 2014年第7期57卷 787-797页

作者：孙猛陆明星汤小天杜予州扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009

【目的】近年来,大螟Sesamia inferens(Walker)对水稻的为害逐渐加重并成为水稻的重要害虫之一。随着全球气候变暖,大螟的分布区域也在逐渐向北延伸。HSP70家族作为分子伴侣参与生物生长发育并对外界刺激产生响应,对生物功能蛋白质的正... 详细信息

【目的】近年来,大螟Sesamia inferens(Walker)对水稻的为害逐渐加重并成为水稻的重要害虫之一。随着全球气候变暖,大螟的分布区域也在逐渐向北延伸。HSP70家族作为分子伴侣参与生物生长发育并对外界刺激产生响应,对生物功能蛋白质的正确折叠及其转运有着重要意义。本研究旨在明确HSP70家族hsc70基因在大螟不同组织、不同发育阶段以及低温胁迫下的表达差异,初步探讨大螟对环境适应的分子机理。【方法】应用RT-PCR及RACE技术从大螟5龄幼虫中克隆得到hsc70基因;进行基因组验证,得到其基因组序列,分析内含子的位置及大小;应用实时定量PCR技术分析大螟hsc70基因的表达模式。【结果】大螟hsc70基因长2 160 bp,命名为Sihsc70(GenBank登录号:KJ639908),开放阅读框长1 962 bp,编码653个氨基酸,推测分子量为71.6 kDa。其氨基酸序列中含有3个HSP70家族保守序列,在C-末端存在细胞质定位信号,说明大螟hsc70是细胞质热激蛋白家族成员。大螟hsc70基因组序列长度为3 522 bp(GenBank登录号:KJ639909),含有2个内含子,长度分别为685 bp(位于编码区上游)和803 bp(位于编码区内)。在大螟5龄幼虫的不同组织中Sihsc70表达量差异不显著(P>0.05),其中在中肠、后肠和体壁中的表达量较高,在唾腺中的表达量最低;在大螟不同发育阶段中,Sihsc70的表达量在雌成虫最低,较高的3个阶段依次为卵、2龄幼虫和5龄幼虫,分别为雌成虫表达量的6.33,3.21和1.86倍;相对于对照组(27℃),低温胁迫对大螟5龄幼虫hsc70基因表达的影响差异不显著(P>0.05)。【结论】结果说明,大螟hsc70基因在不同发育阶段和幼虫不同组织中具有不同的表达水平,而低温胁迫不能诱导该基因大量表达。

关键词：大螟 hsc70 克隆表达模式荧光定量PCR

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热应激致hsc70出入核与细胞凋亡的关系

畜牧兽医学报 2017年第12期48卷 2414-2420页

作者：陈洪博段滇宁鲍恩东龙岩学院生命科学学院龙岩364012 南京农业大学动物医学院南京210095

旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(constitutive or cognate HSPs,hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。以42℃作为热应激模型温度,通过转染hsc70siRNA抑制hsc70表达,Western blot检测细胞质和细胞核内hsc70表达,ELISA检测细胞培养液... 详细信息

旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(constitutive or cognate HSPs,hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。以42℃作为热应激模型温度,通过转染hsc70siRNA抑制hsc70表达,Western blot检测细胞质和细胞核内hsc70表达,ELISA检测细胞培养液LDH浓度,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果表明,正常H9c2心肌细胞质hsc70表达量较高,细胞核中表达量很低,细胞质和细胞核Hsp72表达量非常低。热应激后细胞质hsc70表达量无显著差异,而细胞核hsc70热应激30和100min后极显著升高(Phsc70抑制表达后,细胞质hsc70水平显著降低,热应激后hsc70入核明显减少,但仍然有入核现象;hsc70抑制表达对细胞质和细胞核Hsp72表达无显著影响。与热应激组相比,热应激+hsc70siRNA组LDH表达量呈升高趋势,热应激100min两组出现显著差异(Phsc70抑制表达后H9c2细胞在热应激后更容易发生凋亡,而且在热应激30和100min内,两组之间存在显著差异(Phsc70出入细胞核,hsc70抑制表达后热应激诱导hsc70入核显著降低,细胞损伤加重,细胞凋亡升高。

关键词：热应激 hsc70 出入核细胞凋亡

玉米细胞质hsc70的分离纯化及其抗体的制备

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植物生理学通讯 2003年第5期39卷 486-488页

作者：李冰刘宏涛李国良周人纲河北省农林科学院农业物理生理生化研究所河北师范大学生命科学学院石家庄050016

依据某些热激蛋白对ATP具有高度亲和性的特性 ,介绍了用ATP 琼脂糖亲和柱结合电洗脱分离纯化玉米幼苗细胞质hsc70及制备兔抗hsc70多抗的方法。先采用ATP 琼脂糖亲和柱初步分离几种能与ATP结合的热激蛋白 ,后用SDS PAGE ,切下分子量为 7... 详细信息

依据某些热激蛋白对ATP具有高度亲和性的特性 ,介绍了用ATP 琼脂糖亲和柱结合电洗脱分离纯化玉米幼苗细胞质hsc70及制备兔抗hsc70多抗的方法。先采用ATP 琼脂糖亲和柱初步分离几种能与ATP结合的热激蛋白 ,后用SDS PAGE ,切下分子量为 70kD的电泳谱带 ,电洗脱后用以免疫新西兰兔 ,以ELISA法和Westernblot检测抗体效价和特异性。

关键词：玉米 hsc70 分离纯化抗体