Hsc70乙酰化介导的分子伴侣自噬调控山羊卵巢颗粒细胞功能的研究

作     者：王钰锟 

作者单位：西南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵中权;徐德军

授予年度：2023年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：颗粒细胞 分子伴侣自噬 Hsc70 乙酰化 凋亡 

摘      要：羊的繁殖效率低与卵巢颗粒细胞(Granulosa cells,GC)凋亡引起的卵泡闭锁有关,而卵泡闭锁受到多种生理和环境因素的调节,是一个复杂的生物学过程,调控卵泡闭锁确切的机制仍不清楚。伴侣介导的自噬(Chaperone-mediated autophagy,CMA)对卵泡闭锁及颗粒细胞衰老过程作用日益受到关注。研究表明热休克同源蛋白70(Heat shock cognate protein 70,Hsc70)乙酰化修饰很可能参与分子伴侣自噬的活性,但具体作用机制还有待于研究。本文采用大足黑山羊卵巢颗粒细胞作为研究对象,通过免疫组化、免疫荧光、q RT-PCR、Western Blot、腺病毒转染、免疫沉淀、质谱分析、流式细胞术等方法,探究Hsc70乙酰化介导的分子伴侣自噬对卵巢颗粒细胞功能的影响。得到以下结果:***对卵巢颗粒细胞分子伴侣自噬的影响提取不同年龄的大足黑山羊卵巢总蛋白和总RNA分别利用Western Blot、q RT-PCR检测不同年龄卵巢中CMA活性。结果发现,衰老卵巢组织中Hsc70 m RNA的相对表达量极显著降低(P0.05)。流式细胞凋亡分析显示Hsc70去乙酰化可导致卵巢颗粒细胞凋亡增加;双氧水诱导衰老后,过表达Hsc70降低细胞衰老;Hsc70突变体促进细胞衰老。上述结果表明Hsc70去乙酰化抑制卵巢颗粒细胞增殖,促进衰老和凋亡。综合以上结果:(1)衰老卵巢组织中CMA活性低于正常组织;(2)经HO处理后的颗粒细胞会诱导衰老并抑制CMA过程;(3)Hsc70在赖氨酸第512位点发生乙酰化修饰,去乙酰化酶Sirt2抑制Hsc70乙酰化;(4)Hsc70去乙酰化会抑制卵巢颗粒细胞增殖、促进凋亡和衰老。本文结果为解析Hsc70乙酰化修饰介导的分子伴侣自噬对颗粒细胞的凋亡机制提供了基础。