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hamscs凝胶复合物联合G-CSF修复大鼠子宫内膜损伤的实验研究

hAMSCs凝胶复合物联合G-CSF修复大鼠子宫内膜损伤的实验研究

引用

作者：周云凤遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:探究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hamscs)凝胶复合物联合粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor,G-CSF)对大鼠子宫内膜损伤的修复作用,为临床治疗中重度及重复IUA提供新思路。方法:(1)hamscs凝胶复合物的构建:利用酶消法从人羊膜中提取和纯化hamscs,传代并冻存获得P3代hamscs,并对P3代的hamscs进行细胞形态观察,同时采用细胞免疫荧光、流式细胞术对传代获得的hamscs进行鉴定。将hamscs与AHA-gel混合后进行培养,通过CCK-8法评估AHA-gel对hamscs的安全性。(2)大鼠子宫内膜损伤模型的建立与鉴定:选择12只8-9周龄且动情周期正常的雌性SD大鼠作为本实验的实验动物,利用宫腔注射95%乙醇来构建EI模型。将SD大鼠随机分为两组:对照组(n=6):仅行开关腹,不予任何处理;模型组(n=6):向宫腔注射95%乙醇90s。建模第7天处死大鼠收集子宫标本。观察子宫形态,进行HE染色观察子宫内膜形态学的变化,并进行子宫内膜厚度测量及腺体计数。进行Masson染色观察子宫内膜的纤维化程度,并分析两组大鼠子宫内模组织的纤维化面积比。从而评估大鼠子宫内膜损伤模型是否建立成功。(3)观察hamscs凝胶复合物联合G-CSF修复大鼠子宫内膜损伤的治疗效果:选择30只8-9周龄且动情周期正常的雌性SD大鼠作为本实验的实验动物,利用宫腔注射95%乙醇来构建EI模型,将大鼠随机地分为五组:对照组(n=6);模型组(n=6);G-CSF组(n=6);hamscs凝胶组(n=6);hamscs凝胶+G-CSF组(n=6)。建模第7天分别将G-CSF、hamscs凝胶及hamscs凝胶+G-CSF注入宫腔,移植治疗第14天,处死大鼠收集标本。通过HE染色观察各组子宫内膜形态学的改变,并进行子宫内膜厚度测量及腺体计数。通过Masson染色来观察各组大鼠子宫内膜的纤维化程度,并分析各组大鼠子宫内膜组织的纤维化面积比。通过免疫组化方法检测子宫内膜组织中CK-19、VEGF、整合素β3的蛋白表达。结果:(1)原代hamscs呈长梭形贴壁生长,传代3次后,hamscs细胞形态均一,大部分呈长梭形,呈现出漩涡状贴壁生长。免疫荧光检测显示hamscs的Vim表达阳性,CK-19表达阴性。流式细胞仪分析显示:P3代的hamscs中高表达CD29、CD44、CD105,低表达CD34、CD45及HLA。同时hamscs在AHA-gel中保持着良好的生存能力,按照细胞毒性分级分为1级。(2)大鼠子宫内膜损伤模型的建立与鉴定:子宫标本观察:对照组的子宫状态好,模型组右侧子宫近卵巢端膨大有宫腔积液,同时可观察到局部发白或有充血点。HE染色发现:与对照组相比,模型组的子宫腔失去正常结构,子宫内膜明显变薄(Phamscs凝胶复合物联合G-CSF修复大鼠子宫内膜损伤的治疗效果:HE染色发现:对照组子宫结构完整,其内膜层、肌层和浆膜层界限清楚,同时可见丰富的子宫内膜腺体。模型组子宫腔狭窄,子宫壁各层界限欠清楚,可见少许子宫内膜腺体。G-CSF组、hamscs凝胶组及hamscs凝胶+G-CSF组的大鼠子宫腔形态均得到部分改善,子宫腔粘连闭锁情况好转,同时子宫内膜腺体数量均有增加。子宫内膜厚度测量:各治疗组与模型组相比,G-CSF组的子宫内膜厚度稍增加(P>0.05);hamscs凝胶组(Phamscs凝胶+G-CSF组(Phamscs凝胶组(Phamscs凝胶+G-CSF组(Phamscs凝胶组(Phamscs凝胶+G-CSF组(Phamscs凝胶组(Phamscs凝胶+G-CSF组(Phamscs凝胶组(P<0.0

关键词：人羊膜间充质干细胞宫腔用交联透明质酸钠凝胶粒细胞集落刺激因子子宫内膜损伤 hamscs凝胶复合物

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