检索结果-南通市图书馆

中国畜牧兽医 2012年第10期39卷 73-75页

作者：吴春涛李艳梅东营职业学院生物与生态工程学院山东东营257091

本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gb、ge基因片段,将其克隆到pgeM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBac... 详细信息

本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gb、ge基因片段,将其克隆到pgeM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHTb连接,得到了重组质粒pFBHgb、pFBHge。经酶切和测序鉴定后,将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性、蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到了含gb、ge基因的重组穿梭载体。

关键词：牛疱疹病毒Ⅰ型 gb、ge基因杆状病毒表达系统载体构建

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪伪狂犬病病毒BJC变异株分离鉴定及gb和ge基因序列分析

引用

动物医学进展 2024年第9期45卷 20-26页

作者：娄昆鹏李阳项伟徐博朱国强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 浙江美保龙生物技术有限公司浙江金华321016

为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gb、ge基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件geneious Prime... 详细信息

为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gb、ge基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件geneious Prime对gb、ge基因进行遗传进化和同源性分析。结果显示,该分离株为PRV强毒株。该病毒在ST细胞生长良好,纯化后的病毒经测定半数组织培养感染量为10^(8.5)TCID_(50)/mL,对6周龄昆明小鼠的LD_(50)为10^(5.8)TCID_(50)。测序结果与预期的PRV gb、ge基因片段相符。遗传进化分析可知与国内代表PRV变异毒株如JS2012、HN1201、ZJ01等处于同一分支,与欧美分离株如Bartha、Kaplan、Becker等亲缘关系较远,处于不同的大分支。氨基酸序列分析表明,BJC株与国外经典毒株和国内早期分离毒株存在多个特征性位点替换,符合国内流行变异毒株特征,BJC株为PRV变异毒株。

关键词：伪狂犬病毒病分离鉴定 BJC株 gb、ge基因序列分析

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

IBRV双重荧光定量PCR检测方法的建立

IBRV双重荧光定量PCR检测方法的建立

引用

作者：徐娜内蒙古农业大学

学位级别：硕士

本研究根据genBank中登录的IBRV ge和gb基因序列,设计2对特异性引物及Taqman探针,建立了牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重荧光定量PCR检测方法并进行了敏感性、特异性及临床样本的检测。结果表明,该方法敏感性高,最低可检测约2拷贝/μL... 详细信息

本研究根据genBank中登录的IBRV ge和gb基因序列,设计2对特异性引物及Taqman探针,建立了牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重荧光定量PCR检测方法并进行了敏感性、特异性及临床样本的检测。结果表明,该方法敏感性高,最低可检测约2拷贝/μL;特异性强,对牛支原体、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、巴氏杆菌、牛、羊布鲁氏菌的检测结果均为阴性。重复性试验中,组内和组间变异系数均小于2%。利用建立的方法对54份牛肺和18份牛鼻拭子样品进行检测,结果54份牛肺中IBRV阳性17份,其中双阳性12份,gb阳性而ge阴性5份,双阴性37份;18份鼻拭子中IBRVgb阳性而ge阴性1份,双阴性17份。研究表明所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于IBRV的检测。此外,本试验根据genBank发表的IBRVgb和ge基因序列,设计合成2对带有酶切位点的引物,构建了用于真核表达的载体。结果表明,本试验成功扩增出目的片段,并将其克隆到pMD-19Tsimple载体。将鉴定成功的pMD-19Tsimple-gb、pMD-19Tsimple-ge重组质粒经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,连接到表达载体pFastBacl,得到了重组质粒pFBgb、pFBge。经一系列的鉴定,得到了含gb、ge基因的重组杆粒,为转染昆虫细胞(Sf9/Sf21)奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎 gb、ge基因双重荧光定量PCR 载体构建

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

牛疱疹病毒Ⅰ型重组抗原的制备及间接ELISA方法的建立

牛疱疹病毒Ⅰ型重组抗原的制备及间接ELISA方法的建立

引用

作者：吴春涛山东农业大学

学位级别：硕士

牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)又名牛疱疹病毒Ⅰ型(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)感染症,是一种急性、热性、接触性传染病,给全球养牛业造成了巨大的经济损失,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疾病,属我国进... 详细信息

牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)又名牛疱疹病毒Ⅰ型(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)感染症,是一种急性、热性、接触性传染病,给全球养牛业造成了巨大的经济损失,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疾病,属我国进境动物和国际动物贸易重点检疫的对象。迄今为止,国内外已建立了多种用于IBR检测的方法,国际贸易中OIE推荐使用ELISA和中和试验方法。为了满足出入境检疫的需要及IBR的监控,本研究克隆了BHV-1的gb、ge基因,构建了gb、ge的原核、真核表达载体,获得了gb的原核高效表达,建立了检测BHV-1的间接ELISA方法。首先,对BHV-1的gb、ge蛋白进行抗原性分析,根据其免疫原性和载体的要求设计多对引物。采用PCR方法,从牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞培养物中扩增gb、ge基因全长编码区序列并将其克隆至pgeM-Teasy载体。以重组质粒pgeM-T-gb、pgeM-T-ge为模板,PCR扩增gb、ge基因片段,将其分别插入原核表达载体pET-32a中,并构建了以BL21(DE3)为宿主菌株的原核表达系统。通过探索IPTG诱导浓度、诱导温度、菌体收获时间等条件,确定了编码gb 28～216 aa、gb 236～418 aa和gb 384～639 aa的DNA序列gbⅠ、gbⅡ和gbⅢ能在pET-32a/BL21(DE3)中表达,表达的重组蛋白主要为包涵体。采用磁化组氨酸蛋白纯化系统、电洗脱和超声波裂解配以曲通-尿素对包涵体进行洗涤三种方法纯化融合重组蛋白,取得较好的效果。Western-Blot和ELISA检测结果表明,纯化的pET-gbⅠ、pET-gbⅡ和pET-gbⅢ重组融合蛋白与BHV-1标准阳性血清呈现良好的反应性,重组蛋白pET-gbⅢ的反应原性最好。其次,为了得到可溶性的重组gb、ge蛋白,以重组质粒pgeM-T-gb和pgeM-T-ge为模板分别扩增gb、ge部分基因片段, PCR产物纯化后经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHTb连接,得到了重组质粒pFBHgb、pFBHge。经酶切和测序鉴定后,将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性、蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到了含gb、ge基因的

关键词：牛疱疹病毒Ⅰ型 gb、ge基因原核表达真核表达载体构建 ELISA

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：