检索结果-南通市图书馆

Molecular Characterization, Expression Pattern and Transcriptional Regulation of figla During Gonad Development in Japanese Founder (Paralichthys olivaceus)

引用

Journal of Ocean University of China 2022年第4期21卷 1037-1050页

作者： QU Jiangbo LI Rui LIU Yuxiang SUN Minmin YAN Weijie LIU Jinxiang WANG Xubo ZHANG Quanqi MOE Key Laboratory of Marine Genetics and Breeding College of Marine Life SciencesOcean University of ChinaQingdao 266003China Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes Qingdao National Laboratory for MarineScience and TechnologyQingdao 266237China

The factor in the germline alpha(figla), as a member of the basic helix-loop-helix family, has been reported to be involved in ovary development in mammals and teleosts. However, the regulatory mechanisms of figla in teleosts remain unclear. Here,figla in P. olivaceus(Pofigla) was characterized with encoding a 202 amino acid protein that contains a conserved basic region and helix-loop-helix(HLH) domain. Amino acids alignment and synteny analysis revealed that Pofigla was conserved with the orthologous gene sequences in other vertebrates. The results of qRT-PCR showed Pofigla was maternally inherited during embryonic development. For tissue distribution, Pofigla showed a sexually dimorphic gene expression in the gonad of different genders, with a higher expression in ovary than in testis. In situ hybridization(ISH) results demonstrated Pofigla was specifically expressed in germ cells including oocytes, spermatogonia and spermatocytes. By screening and analyzing two proximal regions(-2966/-2126 and-772/-444) with high promoter activity, we found SOX5, LEF1, FOXP1 and GATA1 may play important roles in the transcriptional regulation of Pofigla. Furthermore, we observed the co-localization between figla and LEF1 in HEK 293T cells. And the significant up-regulation effect of the canonical Wnt signaling pathway on the expression of Pofigla was found in cultured ovarian cells. This study provided the first evidence that figla not only has an important function in ovary development, but also plays some potential roles in testis development and/or male germ cell differentiation during early testis development in P. olivaceus. The results provide valuable reference in exploring the regulatory network of figla in teleost.

关键词： figla transcriptional regulation Wnt signaling pathway gonad development Paralichthys olivaceus

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

figla在尼罗罗非鱼卵巢分化和维持过程中的作用

引用

水产学报 2016年第5期40卷 665-672页

作者：周林燕邱永秀西南大学淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室崇州市农村发展局

为了深入研究figla在卵巢分化早期的功能,实验通过转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALEN)介导的基因组靶向修饰技术在雌性尼罗罗非鱼体内成功敲除了figla基因。结果显示,TALEN能高效地对F... 详细信息

为了深入研究figla在卵巢分化早期的功能,实验通过转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALEN)介导的基因组靶向修饰技术在雌性尼罗罗非鱼体内成功敲除了figla基因。结果显示,TALEN能高效地对figla基因进行靶向性编辑,并通过测序筛选到不同碱基数目(4,8,20等)缺失的基因型个体。组织学观察发现figla基因敲除阳性XX个体在3月龄时出现卵巢发育异常,表现为卵母细胞和滤泡细胞大量或完全缺失,并伴随体细胞的大量增生。免疫组化结果显示,在figla基因敲除阳性个体的卵巢中检测到雄激素合成酶(Cyp11b2)的表达,但未检测到雌激素合成酶(Cyp19a1a)的表达。血清11-KT水平升高,而E2水平随之降低。研究认为figla在硬骨鱼类卵巢的分化和维持过程中发挥至关重要的作用。

关键词：尼罗罗非鱼 figla 卵巢分化和维持 TALEN

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

figla在尼罗罗非鱼卵巢分化过程中的作用及其机制研究

Figla在尼罗罗非鱼卵巢分化过程中的作用及其机制研究

引用

作者：邱永秀西南大学

学位级别：硕士

在哺乳动物中,性别决定和分化是由雄性和雌性特异基因之间的对抗和平衡来实现的。同时,滤泡和卵母细胞之间的协调作用对于卵巢分化也是不可或缺的。原始卵泡是生殖系统中最基本的单位,调控卵泡和胚胎形成的转录因子在卵泡生长和发育过... 详细信息

在哺乳动物中,性别决定和分化是由雄性和雌性特异基因之间的对抗和平衡来实现的。同时,滤泡和卵母细胞之间的协调作用对于卵巢分化也是不可或缺的。原始卵泡是生殖系统中最基本的单位,调控卵泡和胚胎形成的转录因子在卵泡生长和发育过程早期已经表达并发挥功能,其中figla是最早表达的生殖细胞特异的性转录因子之一,它对卵泡的早期发育有重要的调控作用。研究报道,小鼠的figla基因最早可以在13.5d的雌性胚胎的生殖嵴中表达,且持续表达于发育过程中的卵泡和生殖细胞簇中,figla可激活雌性生殖细胞特异基因的表达,调节卵泡的发育、Zp基因的表达以及透明带的形成过程。同时,哺乳动物figla能够抑制雄性生殖细胞特异基因的表达。众所周知,尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)是重要的世界性养殖鱼类,其单性鱼苗易于获得,因此罗非鱼是研究鱼类性别决定与分化不可或缺的良好实验模型。本研究中,我们通过基因组以及性腺转录组等生物信息学手段对罗非鱼figla基因进行了分离和鉴定,且做了大量的分析工作;实验采用real-time PCR和免疫组化等方法来分析罗非鱼figla/figla的表达模式;创新性地使用TALENs介导的基因敲除和转基因过表达两种方法,从正反两个方面来开展对figla基因功能方面的研究工作,以此来阐明figla在罗非鱼卵巢分化中的可能作用和分子机制。我们的主要研究结果如下：1)本研究成功地从尼罗罗非鱼卵巢cDNA中获取figla开放读码框(ORF, Open Reading Frame),其编码198个氨基酸。氨基酸同源性比对发现,罗非鱼figla基因编码了保守结构域：bHLH,且在鱼类进化过程中较为保守;系统进化分析结果表明,罗非鱼figla与其他硬骨鱼类的figla聚为一簇,而其他四足动物的figla单独聚为一簇;通过共线性分析我们发现,鱼类figla基因在其上下游都具有较为保守的基因座位,如：HK2, ADD2, SNRNP27, MXD1等基因。而在四足类和哺乳类对应染色体的相同部位我们也发现了同样的基因座位。2)我们分别运用real-time PCR和免疫组织化学等方法检测了figla组织分布和个体发生过程的时空表达模式。组织分布研究发现,罗非鱼figla在卵巢中的表达水平要明显高于其它组织。在个体发生过程中,figla的表达水平在孵化后30dab(days after hatching)出现显著的上升,3 mah (months after hatching)时达到最高(生殖细胞减数分裂启动的关键时期),4mah时开始下降。我们利用免疫组化来检测figla在罗非鱼性腺中的蛋白水平的表达情况,其检测结果与real-time PCR结果一致,figla蛋白表达于3月龄和5月龄罗非鱼卵巢的初级卵母细胞中,然而在精巢中却检测不到figla阳性信号。这些表达模式表明,figla可能在罗非鱼卵巢的分化和维持中起重要作用。3)利用TALENs靶向基因敲除技术对figla基因敲除结果发现,TALENs能高效(约52.5%)地对figla基因进行编辑,利用PCR和测序检测到包括删除不同碱基数目(4、8、20等)的突变类型。此外,3月龄XX的figla敲除个体出现卵巢发育异常,表现为卵母细胞大量或完全缺失,并伴随体细胞的大量增生。免疫组化结果显示,在figla基因敲除阳性个体的卵巢中检测到雄激素(11-KT)合成酶(Cypllb2)的表达,但几乎不能检测到雌激素(E2)合成酶(Cypl9ala)的表达。通过检测血清激素水平发现,血清11-KT水平升高,E2水平随之降低。结果表明像哺乳动物一样,在雌性个体中figla基因突变导致大量卵母细胞退化,同时,原始滤泡向雄性间质细胞转分化。4)同时,我们构建了转基因过表达载体pIRES-hrGFP-1 a-figla,在罗非鱼遗传全雄(XY)个体中过表达figla,分析其在雄性性腺发育过程中的可能作用。我们对figla过表达阳性个体性腺进行了常规的组织学观察,发现其精子发生过程受到了严重阻碍,具体表现为精巢中减数分裂的精母细胞和精子细胞受损。Sycp3 (synaptonemal complex protein 3)和prm (protamine)表达量急剧下降,也印证了这一事实。尽管figla过表达雄鱼的支持细胞(dmrt1)和间质细胞(star和cyp17a1)的标志基因的表达没有受到影响,但hsd3b1的表达量却出现明显上升。总的来说,在雄鱼中过表达figla可抑制精子发生相关基因的表达。综上所述,本研究从罗非鱼中分离出figla,序列比对和系统进化分析表明它在脊椎动物进化过程中较为保守。在XX个体中敲除figla导致卵巢退化,Cypllb2表达量明显增高,前滤泡细胞转分化为Leydig

关键词：卵巢分化 figla TALEN 过表达卵巢分化受阻精子发生过程紊乱

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

figla在小鼠胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化中的作用

Figla在小鼠胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化中的作用

引用

作者：胡玥西北农林科技大学

学位级别：硕士

干细胞和生殖细胞的发生、增殖、分化是生命科学研究的重要课题之一。本世纪以来，不孕不育症患者的比例显著增加，而目前对因卵母细胞的发生、成熟障碍引起不孕的患者还缺乏有效的治疗手段。同时，卵母细胞也是发育生物学中一个重要的... 详细信息

干细胞和生殖细胞的发生、增殖、分化是生命科学研究的重要课题之一。本世纪以来，不孕不育症患者的比例显著增加，而目前对因卵母细胞的发生、成熟障碍引起不孕的患者还缺乏有效的治疗手段。同时，卵母细胞也是发育生物学中一个重要的研究对象。然而，高等哺乳动物卵母细胞的发生、转移、分化完全在体内完成，因此很难动态实时地检测和研究其中的分子事件。近年来，已有研究报道干细胞可分化为生殖系细胞，甚至可能进一步分化为卵母细胞或精子。但目前干细胞向生殖细胞尤其向卵母细胞分化的效率较低，且重复性较差。figla（生殖系a因子）是最早表达的生殖细胞特异性转录因子之一，对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用。本研究PCR克隆了figla的动子，构建了pfigla-EGFP-1载体，转染小鼠胚胎干细胞（mESCs）筛选得到了携带pfigla-EGFP-1载体的ES细胞株，首次建立了mESCs向生殖细胞分化的监测和筛选系统;评估了维甲酸（RA）、卵泡液（PFF）、促卵泡激素（FSH）、与卵巢细胞共培养、体内移植和基因超表达对诱导mESCs向雌性生殖细胞分化的作用;研究了figla基因对生殖特异性基因表达的调控作用。1. pfigla-EGFP-1转染小鼠胚胎干细胞株的筛选纯化通过生物信息学方法分析预测出figla基因的启动子区，构建了pfigla-EGFP真核报告载体，将其导入mESCs，筛选出稳定携带pfigla-EGFP载体的小鼠ES细胞株。经检测，此株细胞维持胚胎干细胞的典型生物学特性：能稳定增殖，同时表达多能性标记，且具有体内、外的三胚层分化潜能。2.不同方法诱导mESCs向雌性生殖细胞分化通过悬浮法使mESCs形成类胚体(EBs)，向培养液中添加RA、卵泡液和FSH，或将EBs与卵巢细胞共培养，或将mESCs与卵巢细胞包埋后进行体内移植，诱导mESCs向卵母细胞分化。通过形态学结合RT-PCR、免疫荧光染色、流式细胞分选及雌二醇激素测定等，对分化得到的类生殖细胞进行检测。结果显示，部分EBs首先分化出原始生殖细胞，随后EBs分化形成卵巢样结构，在RA、卵泡液、FSH或与卵巢细胞共培养的条件下，可分化出表达生殖特异性基因的类卵母细胞。mESCs与卵巢细胞包埋入肾被膜后，在体内可以向生殖细胞分化，形成卵泡样结构。转染pfigla-EGFP载体的ES细胞株向生殖细胞分化后，绿色荧光蛋白（GFP）表达，同时表达生殖特异基因Vasa、Stra8、Scp3和Zp3，表明该细胞株可以作为ESCs向生殖细胞分化的监测和筛选系统。3. figla超表达对mESCs向雌性生殖细胞分化的作用通过PCR技术从小鼠卵巢cDNA中扩增了figla基因，构建出真核表达载体pDsRed1-N1-figla。用该载体转染mESCs，红色荧光蛋白(RFP)表达，生殖及卵母细胞标志基因的表达上调。表明超表达figla基因可以促进mESCs向生殖细胞分化，且figla对生殖特异性基因具有调控作用，可激活雌性生殖细胞基因表达。

关键词：胚胎干细胞雌性生殖细胞 figla 小鼠

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

figla基因真核表达载体的构建及其对生殖特异性基因表达调控的研究

FIGLA基因真核表达载体的构建及其对生殖特异性基因表达调控的研究

引用

“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：胡玥白耀富王龙于萌华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心

figla(生殖系a因子)是第一个生殖细胞特异表达的转录因子,对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用。figla基因异常会促使卵巢早衰的发生。本研究通过PCR方法从昆的小鼠基因组中扩增山figla基因,将其克隆到真核报告载体pD... 详细信息

figla(生殖系a因子)是第一个生殖细胞特异表达的转录因子,对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用。figla基因异常会促使卵巢早衰的发生。本研究通过PCR方法从昆的小鼠基因组中扩增山figla基因,将其克隆到真核报告载体pDsRedl-N1,构建了携带609 bp figla基因片段的重组载体pDsRed1-N1-figla。用该载体转染小鼠胚胎干细胞(mESCs),在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白(RFP)在细胞中的表达情况,同时检测转染细胞中figla基因及其它生殖细胞特异性基因的表达情况。结果显示,转染pDsRed1-N1-figla两天后,mESCs内的figla总表达量明显增加,且内源性表达量亦有所提高,即转入的外源性figla基因可以促进内源性figla的启动和表达。免疫荧光染色显示表达RFP的细胞同时表达生殖特异性基因Vasa,减数分裂特异性基因Stra8、Scp3以及卵母细胞标志基因Zp3。通过Q-RT-PCR检测发现,在转染2 d的细胞中,Vasa、Sox9、Stra8和Scp3的表达较对照组均有明显上调,多能性基因Oct4表达量下降:转染5 d后,细胞中Vasa、Sox9、Scp3和Zp的表达量进一步增加,而Stra8的转录水平较2 d时大幅下降。这些研究表明figla基因对生殖特异性基因具有调控作用,可以激活雌性生殖基因表达,为更清楚的了解figla基因在生殖细胞生长发育过程中的具体调控机制,以及发现该基因在细胞中的新功能奠定了基础。

关键词： figla 生殖特异性基因小鼠胚胎干细胞

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

羊栖菜多糖促进生育相关基因表达提高果蝇生育力的研究

引用

药物评价研究 2016年第6期39卷 925-931页

作者：张亚赵子慧张旭陈柳君吴明江陈培超温州大学生命与环境科学学院浙江温州325035 浙江省水环境与海洋生物资源保护重点实验室浙江温州325035

目的研究羊栖菜多糖(SFPS)对亲本果蝇生育能力的影响及其作用机制。方法采用85℃热水煮提、乙醇沉淀、氯化钙去除褐藻胶等多种工序提取SFPS;以黑腹果蝇为模式生物,分别以对照(0%)、低(0.033%)、中(0.167%)、高(0.500%)4个浓度持续喂食15... 详细信息

目的研究羊栖菜多糖(SFPS)对亲本果蝇生育能力的影响及其作用机制。方法采用85℃热水煮提、乙醇沉淀、氯化钙去除褐藻胶等多种工序提取SFPS;以黑腹果蝇为模式生物,分别以对照(0%)、低(0.033%)、中(0.167%)、高(0.500%)4个浓度持续喂食15 d,通过检测子代数量、体质量、每天羽化量评估不同浓度SFPS对果蝇生育能力的影响;荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测亲本果蝇生育和发育相关基因Vasa、Achi、figla和子代果蝇mTOR的表达。结果与对照组比较,喂食SFPS能显著性地提高雌蝇和雄蝇的生育力,并且对其子代果蝇体质量、羽化率和雌雄比例也有后续的促进作用,低和中浓度SFPS分别对母本和父本果蝇的生育力促进效果最优;持续喂食SFPS后,亲本果蝇生殖发育相关基因在m RNA水平上显著提高;亲本喂食低、高浓度SFPS后,子代果蝇mTOR表达水平普遍升高,子代雌蝇变化更为显著。结论 SFPS通过调控果蝇生育相关基因的表达,提高亲本果蝇的生育能力,对子代果蝇的生长发育也有显著促进作用。

关键词：羊栖菜多糖黑腹果蝇生育力荧光定量PCR Vasa Achi figla mTOR

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：