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牛脂肪细胞成脂分化过程基因-代谢产物的调控网络构建及fads2调控不饱和脂肪酸生成的机制研究

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牛脂肪细胞成脂分化过程基因-代谢产物的调控网络构建及FADS2调控...

作者：李凡华中农业大学

学位级别：硕士

在高档牛肉生产过程中,长时间的育肥导致肉牛皮下和腹腔等部位的廉价脂肪过度积累,降低饲料报酬和饲养经济效益。提高廉价脂肪的经济价值是解决此问题的有效手段。牛脂肪组织中含有大量饱和脂肪酸容易导致人心脑血管疾病的发生。不饱和... 详细信息

在高档牛肉生产过程中,长时间的育肥导致肉牛皮下和腹腔等部位的廉价脂肪过度积累,降低饲料报酬和饲养经济效益。提高廉价脂肪的经济价值是解决此问题的有效手段。牛脂肪组织中含有大量饱和脂肪酸容易导致人心脑血管疾病的发生。不饱和脂肪酸则能够降低心脑血管疾病的发生率、预防炎症和癌症、参与免疫调节。因此,可通过提高脂肪组织中的不饱和脂肪酸的含量来改善廉价脂肪的经济价值,而培育出具有此优良特性的肉牛新品种可以从根本上解决高档牛肉生产过程中的资源浪费问题。但目前牛脂肪组织的代谢产物形成机制还不清楚,控制不饱和脂肪酸的候选基因不够明确。针对此问题,本研究以牛前体脂肪细胞为研究材料,利用超高效液相色谱-串联质谱技术(UPLC-MS/MS)解析了其成脂分化过程中不同代谢产物的变化规律;同时从转录组水平构建了此过程中基因的表达图谱;并整合代谢组和转录组数据,建立了基因表达对代谢产物的调控网络,筛选并获得调控不饱和脂肪酸含量的主要候选基因fads2;最后以慢病毒为载体构建了稳定超表达fads2的细胞模型,揭示了fads2调控牛脂肪细胞不饱和脂肪酸生成的机制。具体研究结果如下:(1)牛前体脂肪细胞成脂分化过程中不同代谢物的变化规律对诱导0天、2天、4天、8天的牛前体脂肪细胞进行油红O染色,显微镜下观察发现脂滴随时间推移从无到有,由少到多,诱导第8天的脂滴最多最大。收集此四个阶段的细胞,通过广泛靶向代谢组测序分析,共检测到962个代谢物,被分成22类物质,其中氨基酸及其代谢物占比27%,脂肪酰类、甘油脂类和甘油磷脂类占比14%,层次聚类分析结果显示,氨基酸类和脂肪酸类代谢物随时间推移而不断积累。四个阶段两两比较的六个比较组中筛选得到397个差异代谢物,差异代谢物时序表达分析的结果显示,与脂滴表型变化趋势一致的代谢物主要是氨基酸类,脂肪酰类、甘油脂类和甘油磷脂类物质,它们主要显著富集在不饱和脂肪酸生物合成、氨基酸的生物合成和花生四烯酸代谢通路。(2)牛前体脂肪细胞成脂分化过程中基因的表达图谱构建收集成脂分化不同阶段(0天、2天、4天、8天)牛前体脂肪细胞,提取RNA后进行转录组测序分析,共检测到20125个基因,进一步筛选后,六个比较组中共得到6714个差异表达基因,各个比较组的差异表达基因GO注释结果显示,在细胞成脂分化的前4天,生物过程主要是细胞分裂、有丝分裂的细胞周期和胆固醇的生物合成,成脂分化后4天生物过程主要是RNA聚合酶II启动子的转录。此外,KEGG结果显示六个比较组的差异表达基因主要显著共富集在PPAR信号通路、MAPK信号通路、不饱和脂肪酸的生物合成、氨基酸的生物合成和胰岛素信号传导通路。此外,利用RT-q PCR技术对8个差异基因的表达进行验证,与转录组测序结果一致。(3)牛前体脂肪细胞成脂分化过程代谢产物的基因调控网络构建本研究通过基因和代谢物相关性分析,发现随着时间的推移,差异基因和差异代谢物的相关性越来越显著,主要表现为正相关性。进一步结合基因和代谢物的变化倍数进行表达趋势分析,在相关性绝对值大于0.8的基因和代谢物中,表达上调的基因和代谢物相关性的数量显著高于表达下调的基因和代谢物相关性的数量。接下来,通过KEGG通路共富集分析发现,6714个差异基因和397个差异代谢物显著共富集在不饱和脂肪酸生物合成、氨基酸的生物合成、丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢通路。(4)牛前体脂肪细胞成脂分化过程调控不饱和脂肪酸含量的候选基因挖掘通过典型相关性分析(CCA)开展对调控不饱和脂肪酸含量的候选基因挖掘,发现fads2、ACOT7、ACOT2(ENSBTAG00000046814)是影响不饱和脂肪酸含量的候选基因,其中fads2与花生四烯酸、二十碳五烯酸、亚油酸和油酸关联性最高,在后续研究中被重点关注。(5)候选基因fads2对不饱和脂肪酸影响验证及其调控机制研究通过构建超表达fads2三质粒慢病毒包装体系,成功包装超表达fads2的慢病毒。利用上述慢病毒对C3H10 T1/2细胞系进行感染,fads2的C3H10 T1/2细胞系阳性率达到96.5%,并且基因表达量较对照组超表达2607倍以上(Pfads2间充质干细胞模型,油红O染色结果表明,超表达fads2间充质干细胞的脂肪沉积能力较对照组明显提高。利用RT-q PCR技术研究超表达fads2后对脂肪沉积关键基因表达的影响,结果显示:脂肪沉积关键基因ACC1、FABP4、FASN、GPDH、LPL、PPARG、SCD1和不饱和脂肪酸生物合成通路基因HACD2在超表达fads2间充质干细胞中表达显著上调。此外,通过气相色谱仪检测到油酸、亚油酸和棕榈油酸,发现fads2组的油酸和棕榈油酸含量相较于对照组分别提高了18%和25.3%,亚油酸在fads2组能够被检测到,在对照组可能由于其含量未达到检出阈值而未被检测到。综上所述,本研究基于代谢组学和转录组学的研究分析,发现F

关键词：牛代谢组转录组 fads2 不饱和脂肪酸

鲤复制fads2和elvol5基因多态性与不饱和脂肪酸合成的关联研究

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鲤复制fads2和elvol5基因多态性与不饱和脂肪酸合成的关联研究

作者：李青松上海海洋大学

学位级别：硕士

鱼类是人体获取n-3 PUFAs的主要食物来源,提高鱼体自身合成n-3 PUFAs能力,对于提高鱼类品质具有重要意义。去饱和酶基因(fads2)和延长酶基因(elovl5)是鱼类控制PUFAs合成的关键酶基因,其酶的催化效率和表达水平直接影响PUFA合成能力。... 详细信息

鱼类是人体获取n-3 PUFAs的主要食物来源,提高鱼体自身合成n-3 PUFAs能力,对于提高鱼类品质具有重要意义。去饱和酶基因(fads2)和延长酶基因(elovl5)是鱼类控制PUFAs合成的关键酶基因,其酶的催化效率和表达水平直接影响PUFA合成能力。本项目前期研究鉴定出四倍体鲤鲤鱼种,fads2和elovl5基因均有两个复制fads2a/2b和elovl5a/5b,并发现不同品种鲤鱼PUFA含量差异显著。为阐明鲤合成PUFA的遗传机理,本课题开展了不同品种鲤鱼fads2和elovl5基因多态性与PUFA含量关联分析,用来鉴定相关遗传位点对fads2和elovl5表达调控的影响。本项目将从三个鲤鱼群体的fads2和elovl5基因的编码区(CDS)和启动子(promoter)序列的多态性,明确PUFA合成能力差异的遗传基础和分子机制,为提高鲤的PUFA含量和培育鲤鱼新品种提供分子依据。本论文首先对三个鲤鱼群体PUFA含量进行测定,获取12种PUFAs性状数据;然后对fads2a/2b和elovl5a/5b基因的CDS区域和启动子区域分别进行测序、基因分型,获取其基因的SNP位点;最后对SNPs和12种PUFAs性状进行关联分析,找到了影响PUFA合成的关键位点。具体实验结果如下:1、福瑞鲤、黄河鲤和建鲤肌肉中PUFAs含量测定和分析选择鲤鱼PUFA含量差异较大的3个群体,福瑞鲤、黄河鲤和建鲤,共269尾鲤鱼。通过脂肪酸甲酯化实验以及气相色谱方法进行了鲤鱼肌肉脂肪酸含量的测定,实验结果表明,三个鲤鱼群体的PUFA含量分布没有显著差异,黄河鲤的数据分布更为弥散,但三个群体鲤鱼大部分数据分布仍然重合,因此我们将三个群体视为一个群体进行分析。整体来看,在鲤鱼体内,n-6 PUFAs含量占比显著高于n-3 PUFA。其中C18:2n-6含量最高为25.24±10.13%,且随着LC-PUFA合成通路呈递减趋势。2、鲤3个群体fads2a/2b和elovl5a/5b基因的CDS区域和启动子区域SNP检测和分析对鲤fads2a、fads2b、elovl5a和elovl5b共4个基因的CDS片段和promoter片段进行扩增和测序,序列经blast确认分析后,进行SNP分型。在4个基因的CDS区域共发现34个c SNP位点,分别为5个fads2a c SNPs、11个fads2b c SNPs、10个elovl5a c SNPs、8个elovl5b c SNPs。其中11个c SNPs为非同义突变,fads2a包括1个非同义突变(F2a.502),fads2b包括6个非同义突变(F2b.128、F2b.168、F2b.288、F2b.291、F2b.552和F2b.751),elovl5a包括1个非同义突变(E5a.29),elovl5b包括3个非同义突变(E5b.172、E5b.174和E5b.182)。在4个基因的promoter区域共检测到19个有效SNPs位点,其中10个SNPs属于fads2b基因启动子,表明fads2b相对其它三个基因,具有更高的遗传多样性。为了提高关联分析的准确性,利用这4个基因的SNPs对三个鲤鱼的群体结构进行分析,发现该三个鲤鱼群体间的SNPs分布并没有显著差异,因此在后续的关联分析研究中,我们将3个群体视同为1个群体。3、鲤fads2a/2b和elovl5a/5b基因的SNP与PUFAs含量的关联分析对鲤fads2a、fads2b、elovl5a和elovl5b共4个基因的SNPs与PUFAs含量进行关联分析。为了提高分析的准确性,采取GLM、MLM和ANOVA共三种方法进行联合分析,在4个基因的CDS区域共检测到6个显著关联的位点(E5a.87、E5b.172、E5b.782、F2a.624、F2b.751、F2b.1197),其中E5b.172、E5b.782、F2b.751、F2b.1197均与多个PUFAs显著相关,且杂合子的PUFA含量高于纯合子;而E5a.87和F2a.624均只与一种PUFA显著关联,且变异类型为同义突变,表明elovl5b和fads2b是调控PUFA合成的关键基因。在4个基因的核心启动子区域共检测到3个显著位点(E5b.-932、F2b.-397和F2b.-664),但这些位点只与部分PUFA有关联。我们推测,脂肪酸合成过程中,CDS蛋白编码区域是起主导作用,启动子区域起到协同调控的作用。4、鲤fads2b和elovl5b基因的c SNP聚合分析基于fads2b和elovl5b是调控鲤鱼合成PUFA的主效基因,因此我们对E5b.172、E5b.782、F2b.751、F2b.1197四个显著关联位点进行了聚合分析。在关联分析中,单个位点对于PUFA含量的遗传效应小于10%,但是在聚合分析中,4个基因的可解释程度显著提高,其中C18:2n-6达54.95%。综上所

关键词：鲤鱼 fads2 elovl5 SNP PUFA 关联分析

中国荷斯坦牛fads2基因3′端SNP突变对乳中脂肪酸组成的影响

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中国农业科学 2016年第11期49卷 2194-2202页

作者：徐晨希王梦琦朱小瑞张玉锋夏海磊刘贤慧王小龙张慧敏杨章平毛永江扬州大学动物科学与技术学院

【目的】fads2是多不饱和脂肪酸合成中关键的限速酶之一,可催化食物中亚油酸（LNA,C18:2n6）合成γ-亚麻酸（GLA,C18:3n6）、二十碳五烯酸（EPA,C20:5n3）、二十二碳六烯酸（DHA,C22:6n3）等长链脂肪酸。试验旨在探讨中国荷斯坦牛fads2... 详细信息

【目的】fads2是多不饱和脂肪酸合成中关键的限速酶之一,可催化食物中亚油酸（LNA,C18:2n6）合成γ-亚麻酸（GLA,C18:3n6）、二十碳五烯酸（EPA,C20:5n3）、二十二碳六烯酸（DHA,C22:6n3）等长链脂肪酸。试验旨在探讨中国荷斯坦牛fads2基因3′端非编码区SNP突变对乳中脂肪酸含量的影响。【方法】随机选择20头无亲缘关系的中国荷斯坦牛样本,用直接测序列法检测fads2基因3′端非编码区SNP突变位点。再以江苏某大型奶牛场551头中国荷斯坦牛为材料,用飞行时间质谱法对前期发现的2个SNP位点进行检测,同时利用最小二乘模型分析了SNP突变及其单倍型对乳中脂肪酸含量及其不饱和指数的影响。【结果】中国荷斯坦牛fads2基因3′端非编码区存在3个SNP突变位点:c.1571 A>G、c.2743 A>G、c.2776 A>G。c.1571 A>G位点GG型为优势基因型,基因型频率为0.800,G为优势等位基因,基因频率为0.887。c.2776 A>G位点AA为优势基因型,基因型频率为0.673,A为优势等位基因,基因频率为0.819。χ;检验表明:c.2776 A>G位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）,而c.1571 A>G位点基因型分布均偏离Hardy-Weinberg平衡（Pfads2基因c.1571 A>G位点与c.2776 A>G位点间连锁不平衡系数r2为0.028,未达到显著水平（P>0.05）。c.1571A>G位点与c.2776 A>G位点有3种单倍型,GA、GG和AA频率分别为0.705、0.181和0.114。多因素方差分析表明:fads2-1571对C14:1含量、C14和C18不饱和指数的影响达到极显著水平（Pfads2-2776位点对C16:1含量、C16和C20不饱和指数的影响达到极显著水平（P20不饱和指数显著高于AG型和AA型（P2-1571-2776单倍型对C16:1含量和C20不饱和指数的影响达到显著水平（P20不饱和指数显著高于GA型和AA型（Pfads2基因3′端非编码区SNP突变对中国荷斯坦牛乳中脂肪酸组成有重要影响。在进一步验证其功能情况下,可作为影响中国荷斯坦奶牛乳脂肪酸组成的主效基因加以利用。

关键词：中国荷斯坦牛 fads2 SNPs 脂肪酸组成

不同脂肪源饲料对斑马鱼elovl5、elovl2和fads2在高度不饱和脂肪酸合成中的作用影响

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华中农业大学学报 2021年第5期40卷 138-145页

作者：王玉梅任天应高坚华中农业大学水产学院武汉430070 农业动物遗传育种与繁育教育部重点实验室武汉430070

为探究延长酶5(elovl5)、延长酶2(elovl2)和去饱和酶2(fads2)基因在淡水鱼高度不饱和脂肪酸(HUFA)合成中的相互作用,利用CRISPR/Cas9技术,成功构建出斑马鱼elovl5^(-/-)(以下简称E5^(-/-)组)、elovl2^(-/-)×elovl5^(-/-)(以下简称E2^(-/-)×E5^(-/-)组)、elovl5^(-/-)×fads2^(-/-)(以下简称E5^(-/-)×F2^(-/-)组)、elovl2^(-/-)×elovl5^(-/-)×fads2^(-/-)(以下简称E2^(-/-)×E5^(-/-)×F2^(-/-)组)4种突变体模型,并对4种突变体进行大豆油饲料(SO)和亚麻芥油饲料(CO)的投喂试验,研究斑马鱼elovl5、elovl2和fads2在HUFA合成过程中对饲料不同脂肪源的响应。结果显示,在E5^(-/-)组和E2^(-/-)×E5^(-/-)组中,C18PUFA未出现明显累积,而E5^(-/-)×F2^(-/-)组和E2^(-/-)×E5^(-/-)×F2^(-/-)组中的C18:3n-3(ALA)和C18:2n-6(LNA)呈现显著的累积。elovl2、elovl5和fads2缺失后,肝脏elovl4a和elovl4b表达明显上升。不同脂肪源饲料投喂试验结果显示,SO饲料投喂后的E5^(-/-)组DHA含量与野生型(WT)无显著差异,E5^(-/-)×F2^(-/-)组较WT组DHA含量显著降低。然而,CO饲料投喂后的E5^(-/-)组DHA含量较WT组呈现显著升高,E5^(-/-)×F2^(-/-)组与WT无显著差异。fads2缺失斑马鱼去饱和作用受到显著影响,表明,fads2是HUFA合成过程中的必需酶。而elovl2和elovl5缺失的表型可能会被其他HUFA合成途径所弥补。以上结果表明,elovl2和elovl5在HUFA合成中存在基因间相互作用,fads2作为去饱和酶在HUFA合成中必不可少。

关键词： elovl5 elovl2 fads2 HUFA 相互作用斑马鱼不同脂肪源饲料

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皖西白鹅育肥期肌肉脂肪酸组成及肝PPARα、fads2和ME1基因表达规律的研究

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畜牧兽医学报 2017年第10期48卷 1912-1919页

作者：陈兴勇赵宁张燕耿照玉安徽农业大学动物科技学院合肥230036

旨在探明皖西白鹅育肥期肌肉脂肪酸组成及肝脂肪酸合成相关基因的表达规律。本研究选取同批出雏的70日龄时体重相近的皖西白鹅60只,分为3个重复,每个重复20只,育肥至100日龄。育肥期每10d(70~100日龄)从各重复取5只屠宰,分离胸肌、腿肌... 详细信息

旨在探明皖西白鹅育肥期肌肉脂肪酸组成及肝脂肪酸合成相关基因的表达规律。本研究选取同批出雏的70日龄时体重相近的皖西白鹅60只,分为3个重复,每个重复20只,育肥至100日龄。育肥期每10d(70~100日龄)从各重复取5只屠宰,分离胸肌、腿肌和肝。气相色谱法检测肌肉脂肪酸组成,RT-PCR分析肝PPARα、fads2和ME1基因相对表达量。结果表明:1)胸肌饱和脂肪酸含量高于腿肌(P2含量随育肥时间增加,C18∶0含量随育肥时间下降。2)PPARα在育肥20d高表达,育肥30d低表达(Pfads2育肥10d时表达量最高(P=0.009);ME1育肥30d表达量最低(P=0.010)。3)PPARα表达量上升伴随C16∶1、C18∶3、UFA/SFA含量上升,同时SFA含量下降;fads2表达量上升伴随C16∶1、C18∶1、C18∶3、MUFA和UFA/SFA含量上升,SFA、PUFA含量下降。ME1基因的表达量上升则C16∶1、C18∶1、C18∶3、MUFA和UFA/SFA上升,同时C18∶0、C20∶3和SFA含量下降。皖西白鹅PPARα、fads2和ME1基因相对表达量均和脂肪酸组成显著相关,可作为脂肪酸性状选育的候选基因。

关键词：皖西白鹅脂肪酸组成 PPARα fads2 ME1

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fads2在人颗粒细胞孕酮合成中的作用研究

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FADS2在人颗粒细胞孕酮合成中的作用研究

作者：王国杰天津医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨fads2对人颗粒细胞孕酮合成的影响。方法:采用永生化人颗粒细胞瘤细胞系(KGN),通过重组慢病毒过表达技术,上调fads2的表达。Forskolin刺激细胞后,收取细胞上清,用电化学发光法检测孕酮水平。同时收集细胞,提取RNA和蛋白,采用q ... 详细信息

目的:探讨fads2对人颗粒细胞孕酮合成的影响。方法:采用永生化人颗粒细胞瘤细胞系(KGN),通过重组慢病毒过表达技术,上调fads2的表达。Forskolin刺激细胞后,收取细胞上清,用电化学发光法检测孕酮水平。同时收集细胞,提取RNA和蛋白,采用q RT-PCR和Western Blot检测孕酮合成关键酶基因St AR、CYP11A1、HSD3B2以及类固醇激素合成相关转录因子SF-1、LRH-1的m RNA丰度和蛋白水平的改变。通过si RNA干扰技术,下调fads2的表达。Forskolin刺激细胞后,收取细胞上清,用电化学发光法检测孕酮水平。同时收集细胞,提取RNA和蛋白,采用q RT-PCR和Western Blot检测孕酮合成关键酶基因St AR、CYP11A1、HSD3B2以及类固醇激素合成相关转录因子SF-1、LRH-1的m RNA丰度和蛋白水平的改变。结果:1、上调fads2后,KGN细胞上清中的孕酮水平显著升高,相比于对照组升高1.4倍;下调fads2后,KGN细胞上清中的孕酮水平显著降低,相比于对照组降低30%。2、KGN细胞系中,相比于对照组,上调fads2后,孕酮合成关键酶基因St AR、CYP11A1、HSD3B2的m RNA相对表达水平和蛋白水平均显著升高。KGN细胞系中,相比于对照组,下调fads2后,孕酮合成关键酶基因St AR、CYP11A1的m RNA相对表达水平和蛋白水平均显著升高,HSD3B2的m RNA相对表达水平和蛋白水平均显著降低。3、KGN细胞系中,相比于对照组,上调和下调fads2后,转录因子SF-1的m RNA相对表达水平和蛋白水平均无明显改变。上调fads2后,转录因子LRH-1的m RNA相对表达水平和蛋白水平明显升高。下调fads2后,转录因子LRH-1的m RNA相对表达水平和蛋白水平明显降低。结论:1、fads2影响人颗粒细胞孕酮的合成。2、fads2可以通过孕酮合成关键酶HSD3B2调节孕酮的水平。3、fads2参与类固醇激素合成相关转录因子LRH-1的调控,进而影响孕酮合成关键酶HSD3B2和孕酮的水平。

关键词：多囊卵巢综合征 fads2 颗粒细胞孕酮转录因子

fads2基因在食管鳞状细胞癌中的表达及其生物学功能的初步探究

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FADS2基因在食管鳞状细胞癌中的表达及其生物学功能的初步探究

作者：王玲玲郑州大学

学位级别：硕士

研究背景和目的食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤之一,死亡率在所有肿瘤中排名第四[1],病理类型分为鳞癌和腺癌,在我国食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是最主要的病理类型,其发病率具有明显的地区差异和家族... 详细信息

研究背景和目的食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤之一,死亡率在所有肿瘤中排名第四[1],病理类型分为鳞癌和腺癌,在我国食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是最主要的病理类型,其发病率具有明显的地区差异和家族聚集现象,其高发区位于东亚以及中国东部地区,特别是河南的林州、安阳、辉县和大别山区等地。当前的肿瘤分子生物学研究资料表明,环境、遗传和精神心理等因素通过协同或序贯的方式引起DNA损伤,使抑癌基因失活或者使原癌基因激活,加上凋亡调节基因或者DNA修复基因的异常改变,促使正常的食管粘膜经过一个多因素、多基因、多阶段的恶性演化过程,由此发展为食管癌[2],据此,从DNA修复基因、原癌基因、抑癌基因、代谢酶基因的遗传多态性入手研究易感基因及肿瘤标志物可以为食管癌的早期诊断、治疗及预后提供更多的理论依据[3]。有研究发现在乳腺癌组织中脂肪酸去饱和酶基因2(Fatty Acid Desaturase 2,fads2)表达水平增高,促进亚油酸(linoleic acid,LA)转化成二十碳四烯酸(arachidonic acid,AA),同时其代谢产物前列腺素E2(Prostagland E2,PGE2)增多,在乳腺癌的发生发展中起到一定的促进的作用[4],在食管鳞癌中该基因表达水平显著上调,其机制尚不清楚。本文通过相关实验,检测fads2基因在ESCC及癌旁正常黏膜组织中mRNA及蛋白的表达情况,分析其与患者临床病理特征和预后的关系;通过慢病毒转染系统构建稳定表达fads2的细胞克隆,进行体外细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验、平板克隆形成实验、细胞迁移和侵袭实验初步探讨其生物学功能。研究方法1.临床标本的收集从河南省林州市人民医院收集手术切除的ESCC新鲜组织标本,每例标本包含食管鳞癌组织及癌旁组织,共70对,储存于液氮中,用于提取组织RNA,检测fads2 mRNA的表达。另外,本课题组调取了河南省林州市人民医院299例ESCC根治切除术的石蜡包埋组织样本,整理临床病理和随访资料,制作ESCC的组织芯片。2.方法通过QPCR方法检测fads2 mRNA在70例ESCC及癌旁相对正常粘膜组织标本中的表达情况;通过免疫组织化学方法检测fads2蛋白在299对ESCC组织芯片中的表达水平,并分析fads2的表达与ESCC患者临床病理特征和预后的相关性。通过慢病毒包装系统将fads2表达质粒分别转染到食管癌细胞株KYSE30和KYSE510中,筛选出稳定表达fads2的细胞,并用QPCR、Western blot鉴定。通过体外的细胞增殖实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、迁移实验和侵袭实验研究fads2对细胞生长、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。研究结果1.QPCR方法检测fads2在食ESCC及其相对应的癌旁正常粘膜组织中的表达,统计学结果显示fads2 m RNA在ESCC组织中呈现高表达现象,而在癌旁组织中呈现相对低表达现象,且在ESCC组织和癌旁组织中的表达水平差异具有统计学意义(p2.IHC结果提示在有效的208例检测样本中,在癌组织中112例fads2蛋白阳性表达(53.8%),96例fads2蛋白阴性表达(46.2%);208例相对应的癌旁正常组织中,63例fads2蛋白阳性表达(30.3%),145例fads2蛋白阴性表达(69.7%),fads2的阳性表达率之间差异有统计学意义(pfads2高表达与患者淋巴结转移和临床分期有关(P0.05)。Kaplan-Meier分析结果表明,fads2高表达组(n=79)与正常表达组(n=129)的生存曲线有显著差异,fads2高表达患者的中位生存时间18个月,fads2正常表达患者的中位生存时间27个月,二者差异有统计学意义(Pfads2基因的食管癌细胞系KYSE30和KYSE510的增殖、非锚定克隆形成能力增强;同时,细胞迁移实验和侵袭实验显示fads2能够促进细胞的迁移和侵袭。结论1.fads2在食管鳞癌组织中呈现阳性表达,且在癌组织中的表达量高于相对应的癌旁组织,其高表达与患者的淋巴结转移及临床分期有关,是预后不良的重要因素。2.fads2的高表达会导致肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和非锚定克隆形成能力增强。

关键词：食管鳞癌 fads2 预后慢病毒转染侵袭和转移

优质鸡不同饲养方式下fads1、fads2基因的表达及其对脂肪酸组成的影响

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优质鸡不同饲养方式下FADS1、FADS2基因的表达及其对脂肪酸组成的...

作者：梅秀丽四川农业大学

学位级别：硕士

脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成途径的关键酶,包括脂肪酸脱氢酶1(fads1)、脂肪酸脱氢酶2(fads2)和脂肪酸脱氢酶3(fads3)。脂肪酸脱氢酶在生物体内对维持膜的正确结构、脂肪酸代谢和生物学功能方面起着重要作用。本研究以正在选育的... 详细信息

脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成途径的关键酶,包括脂肪酸脱氢酶1(fads1)、脂肪酸脱氢酶2(fads2)和脂肪酸脱氢酶3(fads3)。脂肪酸脱氢酶在生物体内对维持膜的正确结构、脂肪酸代谢和生物学功能方面起着重要作用。本研究以正在选育的新品种二郎山山地鸡为试验材料,对其胸肌中的部分脂肪酸含量进行测定发现：日龄、性别和饲养方式对胸肌脂肪酸的组成都有影响,但影响程度因脂肪酸不同而有所不同。日龄对C18：3n-6、C20：4和C20：5的含量有极显著影响(P0.05)。性别对胸肌脂肪酸C22：6的含量有极显著影响(P0.05)。饲养方式对胸肌脂肪酸C20：4、C20：5和C22：6含量有极显著影响(P0.05)。日龄、性别和饲养方式之间的互作作用对脂肪酸的含量也有不同程度的影响。本研究采用SYBR green I荧光定量PCR分析了二郎山山地鸡在1d、14d、28d、42d、56d、70d和91日龄七个时间点fads1和fads2基因的组织表达差异、同一组织在不同时间点的发育性变化和不同饲养方式下的表达差异变化,探讨了fads1和fads2基因表达量同脂肪酸含量、血液生化指标的关系。结果发现：fads1和fads2基因在二郎山山地鸡出生后的各个阶段都有表达,并且肝和脑是fads1和fads2基因的优势表达组织。日龄、性别和饲养方式对fads1和fads2基因不同组织的表达量均有影响,影响程度因组织不同而有所不同。饲养方式对肝、腿肌、皮脂、腹脂和性腺的fads1基因表达量均有极显著影响(Pfads2基因表达量有极显著影响(Pfads2基因表达量有极显著影响(Pfads1和fads2基因不同组织的表达量均有一定的影响,但影响程度因不同组织而有所不同。fads1基因胸肌表达量与C20：4含量呈显著正相关(Pfads2基因胸肌表达量与C20：5含量呈显著正相关(Pfads1基因胸肌表达量呈显著正相关(Pfads1基因肝表达量呈显著负相关(Pfads2基因胸肌表达量呈显著正相关(Pfads2基因腹脂表达量呈极显著负相关(Pfads2基因胸肌表达量呈显著负相关(Pfads1和fads2基因的表达量造成影响,进而可能对合成脂肪酸造成影响,最终对鸡肉的肉质风味造成影响。

关键词：二郎山山地鸡饲养方式 fads1 fads2 不饱和脂肪酸

皖西白鹅育肥期肌肉脂肪酸组成及PPARα，fads2和ME1基因表达规律研究

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皖西白鹅育肥期肌肉脂肪酸组成及PPARα，FADS2和ME1基因表达规律...

作者：赵宁安徽农业大学

学位级别：硕士

肌肉脂肪含量及其脂肪酸组成是肉质评价的重要指标之一,也是重要经济性状。本研究旨在探讨皖西白鹅肌肉和肝脏脂肪酸组成及PPARα,fads2和ME1 mRNA表达规律及其关联性。同批出雏的鹅苗饲养至70日龄开始育肥,育肥期30天,试验一选择体重... 详细信息

肌肉脂肪含量及其脂肪酸组成是肉质评价的重要指标之一,也是重要经济性状。本研究旨在探讨皖西白鹅肌肉和肝脏脂肪酸组成及PPARα,fads2和ME1 mRNA表达规律及其关联性。同批出雏的鹅苗饲养至70日龄开始育肥,育肥期30天,试验一选择体重相近、健康状况良好的60只鹅,共三个重复,每个重复20只,试验二选择体重相近、健康状况良好的240只鹅分成四组,每组三个重复,每个重复20只,分别添加0%、15%、30%、45%的青粗饲料。在育肥期0、10、20、30 d于每个重复取5只屠宰取样,分离胸肌、腿肌和肝脏,气相色谱法检测肌内脂肪酸组成,qPCR分析各组织PPARα,fads2和ME1 mRNA的相对表达量。1、皖西白鹅育肥期胸肌肌内脂肪含量为2.04%,显著高于腿肌(1.39%)(P2、皖西白鹅育肥期胸肌C16:0相对含量(22.04%)高于腿肌(P2相对含量(18.28%)低于腿肌(P26%和25.38%,显著低于腿肌(P=0.043,P=0.051),胸肌SFA相对含量为39.43%,显著高于腿肌(P26.65%、和30.84%,均显著低于腿肌(P20:3相对含量在胸肌和腿肌间无显著差异。3、皖西白鹅肌肉C16:1、C18:2和UFA/SFA相对含量随育肥时间增加;C18:0和SFA相对含量随育肥时间下降,C16:0、C18:1、C18:3、C20:3、MUFA和PUFA相对含量在育肥期间无显著变化。4、皖西白鹅肝脏中PPARαmRNA在育肥20 d相对表达量为1.45,30 d时相对表达量为0.38;fads2 mRNA的相对表达量在育肥10 d时达3.27;ME1 mRNA在育肥前期高表达,育肥后期低表达(P=0.010)。皖西白鹅腿肌中PPARαmRNA在育肥20d高表达,30d低表达(P=0.040),fads2和ME1 mRNA在腿肌中稳定表达。皖西白鹅胸肌中PPARα、fads2和ME1 mRNA相对表达量差异不显著。5、PPARαmRNA的相对表达量上升伴随C16:1、C18:3、UFA/SFA含量上升(P=0.004,P=0.036,P=0.021),同时SFA含量下降(P=0.016);fads2基因的表达量上升伴随C16:1、C18:1、C18:3、MUFA和UFA/SFA含量上升(P2,P=0.009,P=0.030),SFA和PUFA含量下降(P=0.046,P=0.040)。ME1基因的表达量上升则C16:1、C18:1、C18:3、MUFA和UFA/SFA上升(P2,P=0.001,P=0.001,P20:3和SFA的含量下降(P=0.007,P=0.046,Pfads2和ME1受青饲料影响(P=0.025,P=0.001),15%、30%、45%组的肝脏fads2和ME1基因表达量显著低于0%组。PPARα、fads2和ME1基因的相对表达量均和脂肪酸组成显著相关,可作为鹅脂肪酸性状选育的候选基因。

关键词：皖西白鹅脂肪酸组成 PPARα fads2 ME1