FADS2基因在食管鳞状细胞癌中的表达及其生物学功能的初步探究
作者单位：郑州大学
学位级别：硕士
导师姓名：秦艳茹
授予年度：2017年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
摘 要：研究背景和目的食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤之一,死亡率在所有肿瘤中排名第四[1],病理类型分为鳞癌和腺癌,在我国食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是最主要的病理类型,其发病率具有明显的地区差异和家族聚集现象,其高发区位于东亚以及中国东部地区,特别是河南的林州、安阳、辉县和大别山区等地。当前的肿瘤分子生物学研究资料表明,环境、遗传和精神心理等因素通过协同或序贯的方式引起DNA损伤,使抑癌基因失活或者使原癌基因激活,加上凋亡调节基因或者DNA修复基因的异常改变,促使正常的食管粘膜经过一个多因素、多基因、多阶段的恶性演化过程,由此发展为食管癌[2],据此,从DNA修复基因、原癌基因、抑癌基因、代谢酶基因的遗传多态性入手研究易感基因及肿瘤标志物可以为食管癌的早期诊断、治疗及预后提供更多的理论依据[3]。有研究发现在乳腺癌组织中脂肪酸去饱和酶基因2(Fatty Acid Desaturase 2,FADS2)表达水平增高,促进亚油酸(linoleic acid,LA)转化成二十碳四烯酸(arachidonic acid,AA),同时其代谢产物前列腺素E2(Prostagland E2,PGE2)增多,在乳腺癌的发生发展中起到一定的促进的作用[4],在食管鳞癌中该基因表达水平显著上调,其机制尚不清楚。本文通过相关实验,检测FADS2基因在ESCC及癌旁正常黏膜组织中mRNA及蛋白的表达情况,分析其与患者临床病理特征和预后的关系;通过慢病毒转染系统构建稳定表达FADS2的细胞克隆,进行体外细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验、平板克隆形成实验、细胞迁移和侵袭实验初步探讨其生物学功能。研究方法1.临床标本的收集从河南省林州市人民医院收集手术切除的ESCC新鲜组织标本,每例标本包含食管鳞癌组织及癌旁组织,共70对,储存于液氮中,用于提取组织RNA,检测FADS2 mRNA的表达。另外,本课题组调取了河南省林州市人民医院299例ESCC根治切除术的石蜡包埋组织样本,整理临床病理和随访资料,制作ESCC的组织芯片。2.方法通过QPCR方法检测FADS2 mRNA在70例ESCC及癌旁相对正常粘膜组织标本中的表达情况;通过免疫组织化学方法检测FADS2蛋白在299对ESCC组织芯片中的表达水平,并分析FADS2的表达与ESCC患者临床病理特征和预后的相关性。通过慢病毒包装系统将FADS2表达质粒分别转染到食管癌细胞株KYSE30和KYSE510中,筛选出稳定表达FADS2的细胞,并用QPCR、Western blot鉴定。通过体外的细胞增殖实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、迁移实验和侵袭实验研究FADS2对细胞生长、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。研究结果***方法检测FADS2在食ESCC及其相对应的癌旁正常粘膜组织中的表达,统计学结果显示FADS2 m RNA在ESCC组织中呈现高表达现象,而在癌旁组织中呈现相对低表达现象,且在ESCC组织和癌旁组织中的表达水平差异具有统计学意义(p0.05)。Kaplan-Meier分析结果表明,FADS2高表达组(n=79)与正常表达组(n=129)的生存曲线有显著差异,FADS2高表达患者的中位生存时间18个月,FADS2正常表达患者的中位生存时间27个月,二者差异有统计学意义(P0.05)。3.通过体外细胞功能实验,我们发现过表达FADS2基因的食管癌细胞系KYSE30和KYSE510的增殖、非锚定克隆形成能力增强;同时,细胞迁移实验和侵袭实验显示FADS2能够促进细胞的迁移和侵袭。结论***2在食管鳞癌组织中呈现阳性表达,且在癌组织中的表达量高于相对应的癌旁组织,其高表达与患者的淋巴结转移及临床分期有关,是预后不良的重要因素。***2的高表达会导致肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和非锚定克隆形成能力增强。
同方学位论文库