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环状RNA circsept9通过靶向miR-432-5p在胶质瘤放射抵抗中的作用研究

中华放射肿瘤学杂志 2024年第3期33卷 250-255页

作者：顾浩刘俊启王鑫樊锐太郑州大学第一附属医院放疗科郑州450052

目的探讨circsept9在胶质瘤放射抵抗中的作用及其分子机制。方法收集2019年1月—2022年1月在郑州大学第一附属医院接受手术及术后放疗的40例脑胶质瘤患者术后组织标本,分为放射敏感组和放射抵抗组,两组胶质瘤组织采用实时反转录PCR(RT-q... 详细信息

目的探讨circsept9在胶质瘤放射抵抗中的作用及其分子机制。方法收集2019年1月—2022年1月在郑州大学第一附属医院接受手术及术后放疗的40例脑胶质瘤患者术后组织标本,分为放射敏感组和放射抵抗组,两组胶质瘤组织采用实时反转录PCR(RT-qPCR)检测circsept9的表达。以人胶质瘤细胞U251为基础构建放射抵抗的胶质瘤细胞U251R,将U251R细胞分为阴性对照组(si-NC组)、circsept9敲低组(si-circsept9组)、阴性对照+照射组(si-NC+4 Gy组)、circsept9敲低+照射组(si-circsept9+4 Gy组)、circsept9敲低+抑制对照+照射组(si-circsept9+NC抑制剂+4 Gy组)、circsept9敲低+miR-432-5p抑制+照射组(si-circsept9+miR-432-5p抑制剂+4 Gy组)。双荧光素酶报告基因实验验证circsept9与miR-432-5p的靶向关系。克隆形成实验检测U251R细胞存活率,流式细胞术检测U251R细胞凋亡率,采用独立样本t检验比较两组患者胶质瘤组织circsept9的表达量,采用单因素方差分析比较各组细胞的存活率和凋亡率。结果circsept9在放射抵抗组患者胶质瘤组织中的表达量升高(1.00±0.18∶3.25±0.13,Pcircsept9组U251R细胞存活分数降低,细胞凋亡率显著升高(9.24±0.83∶19.36±2.13,Pcircsept9组细胞的存活分数显著降低(P均circsept9+4 Gy组细胞的凋亡率增加(18.83±1.94∶35.23±3.56,Pcircsept9可靶向并负调控miR-432-5p的表达。与si-circsept9+NC抑制剂+4 Gy组比较,si-circsept9+miR-432-5p抑制剂+4 Gy组U251R细胞存活分数显著升高(Pcircsept9通过靶向miR-432-5p促进细胞凋亡,从而增强胶质瘤细胞的放射敏感性。

关键词： circsept9 胶质瘤 miR-432-5p 放射抵抗凋亡

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盐酸石蒜碱通过调控circsept9/miR-654-5p影响结直肠癌SW620细胞增殖及凋亡的机制

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华中科技大学学报（医学版） 2022年第1期51卷 44-49页

作者：周晓华李合海南医学院第一附属医院普通外科海口570102

目的探讨盐酸石蒜碱(lycoline hydrochloride, LH)对人结直肠癌细胞SW620细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法不同剂量的LH处理SW620细胞(LH-L组、LH-M组、LH-H组),同时将正常培养的SW620细胞记为Con组;实验分组:si-NC组、si-... 详细信息

目的探讨盐酸石蒜碱(lycoline hydrochloride, LH)对人结直肠癌细胞SW620细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法不同剂量的LH处理SW620细胞(LH-L组、LH-M组、LH-H组),同时将正常培养的SW620细胞记为Con组;实验分组:si-NC组、si-circsept9组、LH+pcDNA-circsept9组、LH+anti-miR-654-5p组;利用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测circsept9、miR-654-5p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测circsept9与miR-654-5p的靶向关系;Western blot法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)蛋白表达量。结果与Con组比较,LH-L组、LH-M组、LH-H组细胞增殖抑制率、miR-654-5p的表达量、细胞凋亡率和cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白水平升高(均Pcircsept9的表达量降低(均Pcircsept9可靶向调控miR-654-5p的表达;与si-NC组比较,si-circsept9组miR-654-5p的表达量、细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白水平升高(均Pcircsept9组、LH+anti-miR-654-5p组miR-654-5p的表达量、细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白水平降低(均Pcircsept9/miR-654-5p表达而抑制结直肠癌细胞增殖、克隆形成及诱导细胞凋亡。

关键词：结直肠癌盐酸石蒜碱 circsept9 miR-654-5p 增殖凋亡

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E2F1及EIF4A3介导的环状RNA circsept9在三阴乳腺癌发生发展中的功能及分子机制研究

E2F1及EIF4A3介导的环状RNA circSEPT9在三阴乳腺癌发生发展中的...

引用

作者：郑夏颖重庆医科大学

学位级别：硕士

目的越来越多的研究提示,环状RNA跟许多癌症的发生和发展密切相关。本研究旨在探讨环状RNA circsept9在人三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中的表达、生物学功能以及分子机制,并分析其表达调控机制,为其作为TNBC临床诊... 详细信息

目的越来越多的研究提示,环状RNA跟许多癌症的发生和发展密切相关。本研究旨在探讨环状RNA circsept9在人三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中的表达、生物学功能以及分子机制,并分析其表达调控机制,为其作为TNBC临床诊断和治疗新的分子靶点提供科学依据。方法对4对TNBC组织和癌旁正常组织开展转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)分析,获得差异表达的circRNA表达谱。采用Sanger测序、PCR扩增、RNA酶R消化及放线菌素D处理等方法进行circsept9的鉴定。应用原位杂交技术(in situ hybridization,ISH)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测TNBC患者中circsept9的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系,进一步评价其预后。通过一系列体内外功能实验,探讨circsept9在TNBC发生发展中的作用。机制上,采用染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)、荧光素酶报告基因和RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)分析探讨E2F1和EIF4A3对circsept9生物发生的潜在调控作用。此外,应用生物信息学分析、荧光素酶报告基因、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、RNA pull-down、western blot和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)等实验研究circsept9能否通过与miR-637结合进而调控肿瘤相关的信号通路。结果circsept9在TNBC组织和细胞中的表达明显高于癌旁组织及正常乳腺上皮细胞,并且其表达水平与临床晚期及预后不良呈正相关。功能实验表明干扰circsept9可抑制体内外TNBC细胞的生长与转移,亦可诱导TNBC细胞凋亡及自噬。而上调circsept9则起到相反的作用。进一步的实验研究表明,circsept9可通过靶向miR-637调控白血病抑制因子(Leukemia inhibitory Factor,LIF)的表达,进而激活LIF/Stat3信号通路。此外,我们发现E2F1和EIF4A3可能促进circsept9的生物发生。结论E2F1和EIF4A3介导的circsept9可与miR-637结合促进LIF的表达及激活LIF/Stat3信号通路,从而促进三阴乳腺癌的发生与发展。因此,circsept9可作为潜在的TNBC生物标志物和治疗靶点。

关键词：三阴乳腺癌 circsept9 E2F1 EIF4A3 miR-637

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