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caspase3和caspase7在胚胎停育绒毛组织中的表达研究

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Caspase3和Caspase7在胚胎停育绒毛组织中的表达研究

作者：申雷娜皖南医学院

学位级别：硕士

目的:通过对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,同时以标记分子caspase3、标记分子caspase7对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细... 详细信息

目的:通过对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,同时以标记分子caspase3、标记分子caspase7对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,探讨caspase3和caspase7蛋白在停育胚胎绒毛组织中的表达意义。方法:选取2017年02月至2019年01月于皖南医学院第一附属医院弋矶山医院及皖南医学院第二附属医院人流室收集的确诊为早期胚胎停育行人工流产术的胚胎绒毛组织21例,作为胚胎停育组;同时期正常早期妊娠要求行人工流产术终止妊娠的胚胎绒毛组织21例,作为正常妊娠组。运用HE染色法结合光学显微镜对两组绒毛组织进行镜下观察;TUNEL法对两组绒毛组织进行凋亡实验;免疫组织化学-SP法对caspase3和caspase7的表达进行定位;蛋白质免疫印迹法(Western blot)对两组绒毛组织的caspase3、caspase7的表达做定量分析。结果:1.两组妊娠妇女的年龄、月经周期、妊娠天数、孕次未发现统计学差异(P>0.05)。***染色:正常妊娠组的绒毛组织镜下结构清晰,易于辨认,细胞排列整齐。胚胎停育组绒毛组织镜下结构较清晰,细胞排列稍紊乱。***法:凋亡细胞分布于绒毛滋养层细胞间和/或间质内。正常妊娠组的绒毛内着色较少,分布于绒毛滋养层细胞间;胚胎停育组绒毛内成片着色,颜色较深,明显多于正常妊娠组,分布于绒毛滋养层细胞间和间质内。4.免疫组织化学-SP法:两组标本caspase3蛋白的表达:(正常妊娠组:0.29±0.05,胚胎停育组:0.59±0.07,Pcaspase7蛋白的表达也有统计学差异(正常妊娠组:0.22±0.04,胚胎停育组:0.32±0.08,Pcaspase3蛋白(0.033±0.003)及caspase7蛋白(0.023±0.004)的表达明显高于正常妊娠组caspase3蛋白(0.023±0.002)及caspase7蛋白(0.014±0.002)的表达,差异有统计学区别(P7可能通过凋亡路径参与了对早期胚胎停止发育的调控。***3和caspase7或可作为早期妊娠期间筛查胚胎停止发育病因的分子标记物。4.由于胚胎停止发育的病因复杂,有必要进一步研究以期为将来临床诊疗提供依据。

关键词：胚胎停育细胞凋亡 caspase3 caspase7

GPR12、caspase7在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

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GPR12、Caspase7在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

作者：李茹月承德医学院

学位级别：硕士

目的:探讨G蛋白偶联受体12(GPR12)、半胱氨酸蛋白酶7(caspase7)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达及其临床意义。方法:收集30例LSCC患者资料,使用qRT-PCR方法检测LSCC组织及癌旁正常喉黏膜组织中GPR12、caspase7的表达水平,研究二者与临床... 详细信息

目的:探讨G蛋白偶联受体12(GPR12)、半胱氨酸蛋白酶7(caspase7)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达及其临床意义。方法:收集30例LSCC患者资料,使用qRT-PCR方法检测LSCC组织及癌旁正常喉黏膜组织中GPR12、caspase7的表达水平,研究二者与临床病理特征之间的关系及二者之间的相关性,进而探讨GPR12及caspase7在LSCC的发生及进展过程中发挥的作用,分析其对LSCC的诊断价值。结果:1.与癌旁正常喉黏膜组织相比,LSCC组织中GPR12表达降低,差异有统计学意义(P0.05);2.基因水平上LSCC组织及癌旁正常喉黏膜组织中caspase7表达无明显差异(P>0.05),且LSCC组织中caspase7的表达水平与患者年龄大小、饮酒与否、肿瘤分型、TNM分期等无关,差异无统计学意义(P>0.05),但LSCC组织中caspase7的表达水平与患者肿瘤大小负相关,差异有统计学意义(r=-0.371,Pcaspase7的表达具有正相关性(Pcaspase7表达无明显差异,但L SCC组织中caspase7的表达水平与患者肿瘤大小负相关;LSCC组织中GPR12、caspase7的表达具有正相关性。提示GPR12、caspase7作为潜在的抑癌因子参与了LSCC的发生发展,GPR12、caspase7有望成为L SCC患者诊断及治疗潜在的肿瘤生物学标志物。

关键词： LSCC GPR12 caspase7 qRT-PCR 临床病理特征相关性

凋亡相关基因多态性及环境行为因素与噪声性听力损失的关联研究

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凋亡相关基因多态性及环境行为因素与噪声性听力损失的关联研究

作者：齐明键石河子大学

学位级别：硕士

目的:探讨环境行为因素、细胞凋亡通路相关基因多态性与中国汉族人群噪声性听力损失(noise-induced hearing loss,NIHL)易感性之间的关联,进而分析基因-环境、基因-基因间的交互作用。为中国汉族人群易感个体的筛检,进而减少NIHL的发生... 详细信息

目的:探讨环境行为因素、细胞凋亡通路相关基因多态性与中国汉族人群噪声性听力损失(noise-induced hearing loss,NIHL)易感性之间的关联,进而分析基因-环境、基因-基因间的交互作用。为中国汉族人群易感个体的筛检,进而减少NIHL的发生,保护接触噪声工人的健康提供理论依据。方法:研究对象来自2014年杭州市1549名噪声接触工人听力损失的横断面调查,采用1∶1配对病例对照研究,病例组为电测听双耳高频平均听阈﹥25 d B(A)的工人,对照组为性别、年龄、接噪工龄、工作岗位与病例匹配且双耳所有频段听阈均≤25 d B(A)的工人,共272对。PCR-LDR法检测21个SNP位点的基因型。利用SPSS20.0统计软件包对实验数据进行统计学处理,主要采用χ2检验、t检验、单因素、多因素条件logistic回归分析等,计算相对危险度(OR)及其95%可信区间。连锁不平衡和单体型分析采用SHEsis软件进行处理,采用叉生分析进行基因-环境、基因-基因间的交互作用分析。结果:(1)环境行为因素中,文化程度、入睡时间对于NIHL的发病风险呈保护性效应,文化程度在大专及本科者NIHL的患病风险是初中及以下的0.382倍(P=0.025);入睡时间在22:00—23:00和23:00者的0.477倍和0.182倍(P﹤0.001)。佩戴耳机、打电话时间为NIHL的危险因素,每天平均佩戴耳机时间0-2h者患NIHL的危险是不佩戴耳机者的2.033倍(P=0.002);平均每天打电话≧16min者患NIHL的危险是不打电话者的2.477倍(P=0.012)。(2)研究人群中除rs3769823和rs7921977不符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律外,其余19个SNP的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。(3)对caspase基因多态与NIHL易感性关联的主效应分析表明,CASP3基因rs1049216、rs6948多态性降低NIHL的发病风险(ORCT+TT vs CC=0.645,95%CI=0.428.973;ORAC+CC vs AA=0.655,95%CI=0.431.995);以AC单体型作为参照,CT单体型携带者患NIHL的风险显著降低(OR=0.691,95%CI=0.501.954)。(4)CASP7基因rs2227310、rs12415607多态性降低NIHL的发病风险(rs2227310:ORGG vs CC=0.372,95%CI=0.200.693;ORGG vs CC+CG=0.397,95%CI=0.224.704;rs12415607:ORAA vs CC=0.36,95%CI=0.189.687;ORAA vs CC+AC=0.413,95%CI=0.231.739),而rs1127687多态性增高NIHL的发病风险(ORAG vs GG=1.605,95%CI=1.061.426;ORAG+AA vs GG=1.6,95%CI=1.079.374;ORGG+AA vs AG=0.638,95%CI=0.423.961);以CCG单体型作为参照,AGG单体型携带者患NIHL的风险有所降低(OR=0.772,95%CI=0.600.992)。(5)叉生分析表明,rs1049216、rs6948、rs2227310、rs12415607均与文化程度、入睡时间存在交互作用,文化程度越高、入睡时间越早,突变基因型的保护作用越明显(OR值变小且差异有统计学意义)。而rs1127687与耳机佩戴、打电话时间则存在交互作用,与rs1127687 GG野生基因型且不佩戴耳机、打电话时间7687(AG+AA)突变基因型且佩戴耳机、打电话时间≥16(min/d)的个体患NIHL的显著风险上升(OR=2.008,95%CI=1.174.434;OR=2.283,95%CI=1.265.122)。rs1049216分别与rs6948、rs2227310、rs12415607,rs6948分别与rs2227310、rs12415607存在显著的协同作用,当其突变基因型共同存在时,会显著降低NIHL的发病风险。结论:在环境行为因素中,文化程度、入睡时间是NIHL的保护因素,佩戴耳机、打电话时间为NIHL的危险因素。CASP3、CASP7基因多态及其单体型与NIHL存在显著关联。CASP3和CASP7与文化程度、入睡时间、佩戴耳机与否、打电话时间等环境因素对NIHL易感性的影响存在交互作用。CASP3、CASP7存在基因-基因交互效应。研究结果仍需大样本、多中心的流行病学研究予以验证。

关键词：凋亡 caspase3 caspase7 噪声性听力损失单核苷酸多态性环境因素交互作用

氢气对肺腺癌A549细胞促进凋亡和抑制增殖的研究

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氢气对肺腺癌A549细胞促进凋亡和抑制增殖的研究

作者：闫振锋河北医科大学

学位级别：硕士

目的:1.探索、讨论氢气促进肺腺癌A549细胞凋亡、抑制其增殖的作用及其机制。2.结合转录组测序结果,采用western blot实验验证P21、CDK4、caspase-7、caspase-9在20%、40%、60%浓度氢气作用的肺癌A549细胞株以及对照组中的表达是否存在... 详细信息

目的:1.探索、讨论氢气促进肺腺癌A549细胞凋亡、抑制其增殖的作用及其机制。2.结合转录组测序结果,采用western blot实验验证P21、CDK4、caspase-7、caspase-9在20%、40%、60%浓度氢气作用的肺癌A549细胞株以及对照组中的表达是否存在差异。3.免疫组化实验验证肺癌A549细胞转移瘤的瘤体组织中的P21、CDK4、caspase-7、caspase-9的表达在的在对照组、氢气组、顺铂组中表达是否存在差异。方法:1.培养肺腺癌A549细胞至对数生长期,然后应分别用20%浓度、40%浓度、60%浓度的氢气进行干预,每次干预2小时,连续干预3天,每天干预前在显微镜下观察细胞生长情况,并进行图像采集,干预结束后收集细胞,然后使用流式细胞仪来检测细胞凋亡情况及细胞周期。2.把常规培养的腺癌A549细胞作为对照组,将按照第一步处理的腺癌A549细胞作为实验组,处理结束后进行收集,并提取蛋白,采用western blot技术检测细胞中P21、CDK4、caspase-7、caspase-9的表达情况。3.采用免疫组织化学方法检测肺癌A549细胞转移瘤的瘤体组织中的P21、CDK4、caspase-7和caspase-9的表达情况。结果:1.20%浓度、40%浓度、60%浓度氢气均可以促进肺癌A549细胞的凋亡、抑制其增殖。2.P21在40%浓度氢气和60%浓度氢气处理的腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为升高趋势,CDK4在60%浓度氢气处理的肺腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为下降趋势,caspase7在20%浓度氢气、40%浓度氢气和60%浓度氢气处理的腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为升高趋势,caspase 9在40%浓度氢气和60%浓度氢气处理的腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为升高趋势,在统计学数据显示差异拥有统计学意义(P0.05);CDK4在对照组及20%浓度氢气组、40%浓度氢气组的表达无统计学差异(P>0.05);caspase 9在对照组及20%浓度氢气组两组间的表达统计学显示不具有统计学意义(P>0.05)。3.采用免疫组织化学方法检测肺癌A549细胞转移瘤的瘤体组织中P21、CDK4、caspase-7以及caspase-9表达,P21、caspase7、caspase9在氢气组及顺铂组的表达与对照组相比,表现为升高趋势,CDK4在氢气组及顺铂组表达,与对照组相比,表现为下降趋势,统计学数据显示差异具有统计学意义(Pcaspase7、caspase9蛋白在肺癌A549细胞转移瘤组织及肺癌A549细胞株中表达的上升,CDK4蛋白表达的下降。提示氢气有可能通过升高P21、caspase7、caspase9蛋白表达量、降低CDK4蛋白表达量,从而发挥其促进肺癌A549细胞凋亡,抑制其增殖的作用。

关键词：肺癌氢气 P21 CDK4 caspase7 caspase9

ERα调控HDAC3在内分泌耐药乳腺癌细胞中的作用与机制研究

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ERα调控HDAC3在内分泌耐药乳腺癌细胞中的作用与机制研究

作者：张梦南京师范大学

学位级别：硕士

在全世界范围内,乳腺癌对女性健康构成严重威胁。大约70%的乳腺癌患者都是ERα阳性的,这类患者最常采用的治疗方法是内分泌治疗。他莫昔芬是内分泌治疗的一线药物,患者经过他莫昔芬治疗后复发率降低约40%,死亡率降低约30%。然而,患者使... 详细信息

在全世界范围内,乳腺癌对女性健康构成严重威胁。大约70%的乳腺癌患者都是ERα阳性的,这类患者最常采用的治疗方法是内分泌治疗。他莫昔芬是内分泌治疗的一线药物,患者经过他莫昔芬治疗后复发率降低约40%,死亡率降低约30%。然而,患者使用他莫昔芬治疗5年,仍然有三分之一的患者在15年内出现复发。由于内分泌耐药的出现,使得乳腺癌患者的治愈率有限。因此,逆转内分泌治疗的耐药性对ERα阳性乳腺癌治疗具有极其重要的作用。ERα表达的下调是内分泌耐药发生的主要机制之一,最近的研究表明HDAC3在ERα阴性乳腺癌细胞中高表达,HDAC抑制剂也可能有效地克服乳腺癌患者对他莫昔芬的耐药性。在这里,我们的目标是解开ERα和HDAC3在促进内分泌耐药乳腺癌细胞的增殖优势方面的分子机制。本论文通过RT-q PCR和蛋白质免疫印迹实验检测ERα和HDAC3的表达水平,我们发现他莫昔芬耐药（T47D-TAR）细胞中ERα表达降低,而HDAC3蛋白表达水平上调。我们通过进一步研究发现在乳腺癌细胞中ERα表达下调通过减少caspase7的表达从而减少HDAC3蛋白的切割,最终提高了HDAC3蛋白稳定性。组蛋白乙酰化水平的变化会影响基因的转录,我们的研究确定了ERα正调控H3K9ac和H4K16ac表达,而HDAC3负调控H3K9ac和H4K16ac表达。我们的研究发现在T47D-TAR细胞中抑制HDAC3表达会上调CDKN1A的表达。最后,我们通过克隆形成实验证明了抑制HDAC3的表达能明显降低T47D-TAR细胞增殖能力。因此,我们得出这样的结论:ERα表达下调的内分泌耐药乳腺癌细胞通过上调HDAC3蛋白表达而保留增殖优势,HDAC3可以作为内分泌耐药乳腺癌的一个有效的治疗目标。

关键词： ERα caspase7 HDAC3 内分泌耐药乳腺癌

沉默SETDB1对肾癌细胞生长的影响及分子机制研究

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中国临床研究 2016年第7期29卷 896-899,903页

作者：周颖陈萱淮安市第一人民医院肾内科江苏淮安223300

目的探讨组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型1(SETDB1)对人肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养肾癌ACHN细胞及正常肾小管上皮HK-2细胞,qRT-PCR及Western blot分别检测两种细胞系中SETDB1 mRNA及蛋白的表达。采用转染SETDB1... 详细信息

目的探讨组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型1(SETDB1)对人肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养肾癌ACHN细胞及正常肾小管上皮HK-2细胞,qRT-PCR及Western blot分别检测两种细胞系中SETDB1 mRNA及蛋白的表达。采用转染SETDB1特异性干扰性小核糖核酸(siRNA)敲低ACHN细胞中SETDB1表达,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测SETDB1的敲低效果,CCK-8法、溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)结合试验检测细胞活力与增殖,流式细胞仪、caspase3/7活性分析检测细胞凋亡的变化。采用qRTPCR、Western blot检测沉默SETDB1后p53 mRNA及蛋白的表达水平。结果 SETDB1在肾癌ACHN细胞中表达水平明显高于正常肾小管上皮HK-2细胞(t=14.435,P765,P7酶活性提高(t=5.763,P<0.01);同时p53 mRNA(t=9.241,P<0.01)及蛋白的表达水平显著提高。结论 SETDB1在肾癌细胞中表达升高,下调SETDB1能够通过促进p53表达而发挥抗肿瘤生长作用。

关键词：组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶 SET结构域分支型1 p53 caspase3 caspase7 肾癌细胞凋亡细胞转染