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大鼠脑额叶机械性损伤区GFAP、内质网应激相关蛋白CHOP和caspase-12的表达

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大鼠脑额叶机械性损伤区GFAP、内质网应激相关蛋白CHOP和Caspase-...

作者：邓士杰皖南医学院

学位级别：硕士

目的:探讨大鼠脑额叶机械性损伤模型制作方法;比较GFAP、CHOP和caspase-12在推断脑损伤形成时间中的价值。方法:根据脑定位图谱,利用脑定位仪定位脑前囟前4.6mm偏左2mm的M2区,用穿刺针穿刺,深度为2mm,制作额叶损伤模型,同时制作额叶对... 详细信息

目的:探讨大鼠脑额叶机械性损伤模型制作方法;比较GFAP、CHOP和caspase-12在推断脑损伤形成时间中的价值。方法:根据脑定位图谱,利用脑定位仪定位脑前囟前4.6mm偏左2mm的M2区,用穿刺针穿刺,深度为2mm,制作额叶损伤模型,同时制作额叶对照组模型,即只在相应部位钻孔,不针刺。分别在伤后2h、6h、12h、24h、3d、7d和14d处死脑损伤模型大鼠。取出损伤处脑组织,放于10%中性甲醛固定24h,再将组织块脱水,浸蜡和包埋制成组织切片,经免疫组织化学染色技术对目标蛋白染色,观察GFAP、CHOP和caspase-12在损伤区脑组织的表达,再利用计算机图像处理技术分析出各个时间段GFAP、CHOP和caspase-12的IOD(平均光灰度)和AOD(平均光密度)值,并与损伤形成时间做相关性分析,根据三个指标的回归性分析判别三种指标在脑损伤形成时间推断中的价值以及时间相关性程度。结果:实验数据用spss软件进行统计图分析,IOD、AOD值柱状图与散点图显示:①GFAP指标组中,对照与2h、6h和12h组组IOD值比较P〉0.05;与24h、3d、7d和14d组比较P〈0.05;对照组与24h、3d、7d和14d组AOD值比较P〈0.05,而与2h组和12h组比较P〉0.05。GFAP的IOD和AOD值表达在2h-7d组表达持续增加,并在7d至10d之间达到高峰(见图10,图12),接近14d组开始下降,全程表达趋势近似一鈡形曲线。GFAP的IOD值在各个损伤时间表达的线性回归二次拟合中R2=0.956,回归方程Y=1.997X2+870.192X+58318.828,AOD值线性回归二次拟合中R2=893,回归方程Y=-7.595×10-6X2+0.03X+0.213。②CHOP指标组,对照组与2h-7d组IOD值比较P〈0.05;对照组与14d组IOD值比较P〉0.05;对照组与7d与14d组之间AOD值比较P〉0.05;对照组与2h、6h、12h和24h之间AOD值比较P〈0.05。CHOP蛋白IOD值2小时开始增高,6h左右达到高峰,12h表达略有下降,至24h组表达逐渐减少,3d后呈低表达状态。CHOP的IOD值在各个损伤时间段表达的线性回归分析相关程度R=0.529,回归方程为Y=-133.269x+44009.463,AOD值所显示的下降趋势与IOD表达类似,相关程度R=0.642,回归方程为Y=-0.122X+40.331。③caspase-12指标组中,对照组与2h-7d组AOD值比较P〈0.05;对照组与14d组比较P〉0.05;对照组与7d组与14d组IOD值比较P〉0.05;对照组与2h、6h、12h、24h和3d组IOD值比较P〈0.05。caspase-12在6H组开始增高,12h,24h组达到高峰,3d组至14d组,开始下降,直线回归不明显。结论:GFAP表达与损伤经过时间具有回归曲线关系,有较明显的峰值,为推断晚期脑损伤形成时间提供一定的途径与方法。CHOP蛋白在脑损伤2h开始增高,6h左右达到高峰,伤后7d接近对照水平,变化趋势快,在推断中早期脑损伤形成时间有一定价值。caspase-12在脑损伤12h左右出现高峰值,为推断早期脑损伤形成时间提供一定的参考。

关键词： GFAP CHOP caspase-12 脑损伤形成时间

新生鼠高氧暴露后脑caspase-12表达与胼胝体白质损伤的关系

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中国新生儿科杂志 2016年第5期31卷 379-384页

作者：黄久浪韩颖崔晨陈茂琼侯新琳北京大学第一医院儿科 100034 贵州医科大学贵州医科大学附属医院新生儿科

目的探讨caspase-12参与高氧所致新生小鼠胼胝体白质损伤的情况。方法新生6天的C57BL/6小鼠共12组,随机分为高氧组及对照组。高氧组分别给予高氧24 h或48 h以及高氧48 h后在小鼠日龄的10、12、15、30天(P10、P12、P15、P30)断头取脑,并... 详细信息

目的探讨caspase-12参与高氧所致新生小鼠胼胝体白质损伤的情况。方法新生6天的C57BL/6小鼠共12组,随机分为高氧组及对照组。高氧组分别给予高氧24 h或48 h以及高氧48 h后在小鼠日龄的10、12、15、30天(P10、P12、P15、P30)断头取脑,并与相应日龄对照组进行对比。检测不同日龄小鼠胼胝体白质髓鞘碱性蛋白(MBP)表达,检测高氧24、48 h后小鼠胼胝体白质caspase-12 mRNA及蛋白表达,TUNEL法检测小鼠胼胝体白质细胞凋亡。结果 P10、P12高氧组MBP表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P=0.004,0.016);P15、P30两组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高氧24、48 h后与对照组24、48 h比较,caspase-12 mRNA相对表达量分别为(1.549±0.098)比(1.080±0.101)和(1.333±0.076)比(1.022±0.089),cleavedcaspase-12蛋白相对表达量分别为(1.582±0.010)比(0.994±0.078)和(1.370±0.095)比(0.978±0.069),高氧组均高于其对照组,差异有统计学意义(Pcaspase-12抗原表达阳性细胞显著增加。P10、P12高氧组凋亡指数高于对照组(18.742±2.503比4.587±2.353,36.184±3.655比5.351±2.678),差异有统计学意义(Pcaspase-12表达使胼胝体白质细胞过度凋亡,进而导致胼胝体白质损伤。

关键词：高氧症 caspase-12 胼胝体脑白质病小鼠,新生

caspase-12在偏侧咀嚼大鼠髁突软骨细胞中的表达

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现代口腔医学杂志 2017年第6期31卷 336-339页

作者：程洁魏强尉静王海娇吴永生河北省人民医院石家庄050051 河北医科大学第一医院

目的探讨caspase-12在偏侧咀嚼大鼠髁突软骨细胞中的表达变化。方法选取96只3周龄雄性SD大鼠,随机分为4个实验组和4个对照组。实验组大鼠拔除左侧上、下颌所有磨牙,对照组大鼠不做任何处理,分别于拔牙后1d,7d,14d,28d处死。免疫组化和RT... 详细信息

目的探讨caspase-12在偏侧咀嚼大鼠髁突软骨细胞中的表达变化。方法选取96只3周龄雄性SD大鼠,随机分为4个实验组和4个对照组。实验组大鼠拔除左侧上、下颌所有磨牙,对照组大鼠不做任何处理,分别于拔牙后1d,7d,14d,28d处死。免疫组化和RT-PCR方法检测不同时间点的caspase-12含量变化。结果拔牙后,实验组左侧的caspase-12表达在1d,7d,14d,28d时均显著高于对照组(Pcaspase-12表达在1d,7d,14d显著高于对照组(Pcaspase-12的含量逐渐升高,在14d,28d时升高较前一时间点有统计学差异(Pcaspase-12含量逐渐降低,在7d,28d时降低较前一时间点有统计学差异(Pcaspase-12参与了内质网应激介导的凋亡反应。

关键词：颞下颌关节软骨 caspase-12 内质网凋亡

caspase-12活化在小鼠原代肝细胞凋亡中的作用

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肝脏 2006年第1期11卷 12-14页

作者：姜山谢青张韡周惠娟刘海防俞红上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科 200025

目的探讨caspase-12表达变化与内质网应激介导小鼠原代肝细胞凋亡的关系。方法原位消化灌流法分离小鼠原代肝细胞,应用毒胡萝卜素对小鼠原代肝细胞进行凋亡诱导,通过DNA梯带,Hoechst染色和流式细胞仪等对肝细胞凋亡进行定性和定量检测,... 详细信息

目的探讨caspase-12表达变化与内质网应激介导小鼠原代肝细胞凋亡的关系。方法原位消化灌流法分离小鼠原代肝细胞,应用毒胡萝卜素对小鼠原代肝细胞进行凋亡诱导,通过DNA梯带,Hoechst染色和流式细胞仪等对肝细胞凋亡进行定性和定量检测,选出合适的诱导浓度和诱导时间。用Western印迹法检测凋亡过程中caspase-12蛋白酶的表达变化。结果毒胡萝卜素4μmol、诱导30h可引起50%肝细胞发生凋亡,并出现典型的凋亡形态改变。随诱导时间延长procaspase-12蛋白表达逐渐减少。结论毒胡萝卜素4μmol作用30h是建立小鼠原代肝细胞凋亡模型的合适条件,随凋亡细胞数量增加,procaspase-12相应减少,caspase-12活化是毒胡萝卜素引起内质网应激介导肝细胞凋亡的主要机制。

关键词：内质网应激凋亡肝细胞 caspase-12

caspase-12对应力介导的成肌细胞的影响

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潍坊医学院学报 2018年第6期40卷 458-460页

作者：刘丽娟贺龙飞韩欣颖潍坊市人民医院牙科山东潍坊261041

目的观察周期性张应力对L6大鼠成肌细胞caspase-12表达的影响。方法成功构建L6大鼠成肌细胞的体外培养力学刺激模型,采用Western-blot法分析周期性张应力对caspase-12蛋白表达的影响。应用加载频率为10cycles/min,拉伸变形幅度为15%的力... 详细信息

目的观察周期性张应力对L6大鼠成肌细胞caspase-12表达的影响。方法成功构建L6大鼠成肌细胞的体外培养力学刺激模型,采用Western-blot法分析周期性张应力对caspase-12蛋白表达的影响。应用加载频率为10cycles/min,拉伸变形幅度为15%的力,分别给予成肌细胞1,6,12,24h的力学刺激。同时种板对照组与实验组,对照组不给予力学刺激。结果 caspase-12在加力1h后,蛋白表达量开始升高,加力6h后蛋白表达量显著升高,加力24h达到峰值,与对照组相比,差异均有显著性(P <0. 05)。结论周期性张应力可引起内质网应激(ERS)并最终导致成肌细胞凋亡。

关键词：周期性张应力成肌细胞内质网应激 caspase-12

caspase-12在胎鼠宫内缺血/再灌注后脑神经元凋亡中的作用

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重庆医学 2007年第9期36卷 834-835页

作者：张建华赵泽燕张华重庆医科大学附属第一医院妇产科 400016

目的探讨caspase-12与内质网应激介导的宫内缺血/再灌注损害后胎鼠脑组织神经元凋亡的关系。方法制作胎鼠宫内缺血/再灌注损伤模型。取胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况。以免疫组化法检测海马回CA1区caspase-12蛋白的表达情... 详细信息

目的探讨caspase-12与内质网应激介导的宫内缺血/再灌注损害后胎鼠脑组织神经元凋亡的关系。方法制作胎鼠宫内缺血/再灌注损伤模型。取胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况。以免疫组化法检测海马回CA1区caspase-12蛋白的表达情况。结果缺血15min再灌注3、6、12、24h,海马回CA1区TUNEL阳性神经元数分别为(43.6±11.4)(、64.4±9.3)(、74.2±12.1)和(97.3±8.9)个/mm2;随着再灌注时间的延长,TUNEL阳性神经元数明显增加,于再灌注24h达高峰。与血流未恢复时的(20.2±9.9)个/mm2比较,差异有统计学意义(P12、24h,海马回CA1区caspase-12的表达分别为0.41±0.12、0.51±0.21、0.59±0.16和0.31±0.09,与对照组的0.01±0.01比较,差异有统计学意义(P12h出现。结论caspase-12活化是胎鼠宫内缺血缺氧时内质网应激介导脑神经元凋亡的重要环节。

关键词：眙鼠缺血/再灌注凋亡 caspase-12

依达拉奉对幼鼠惊厥持续状态后海马XBP1 mRNA和caspase12表达及神经元凋亡的影响

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温州医学院学报 2009年第1期39卷 18-23页

作者：邓小龙王海萍焦颖林忠东李光乾温州医学院附属育英儿童医院神经科浙江温州325027

目的:探讨依达拉奉对幼鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后海马内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)关键标志分子X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)mRNA、caspase-12的表达及神经元凋亡的影响。方法:将19～21日龄SD大鼠随机分入惊厥持续状态(SC)组、依达拉奉(ED)组、生理盐水对照(NS)组;各组再按不同时间点分五个亚组。应用氯化锂-匹鲁卡品建立大鼠SC模型,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察SC后海马XBP1、caspase-12 mRNA的表达情况。用免疫组织化学方法观察海马caspase-12蛋白表达情况。用TUNEL法观察神经元凋亡细胞数。结果:幼年大鼠海马中XBP1和caspase-12在SC组表达显著增强,与NS组比较差异有显著性(Pcaspase-12 mRNA及蛋白表达显著降低(P12 h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(Pcaspase-12的表达,并使神经元凋亡数目减少,从而发挥对神经元的保护作用。

关键词：依达拉奉惊厥持续状态 XBP1 caspase-12 神经元凋亡

糖尿病大鼠心肌组织内质网应激因子GRP78及caspase-12的表达及其对心脏结构和功能的影响

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山西医科大学学报 2016年第8期47卷 679-684页

作者：杨竞霄陈静园王子宽第四军医大学附属唐都医院心内科西安710038 火箭军工程大学门诊部

目的观察糖尿病大鼠心肌内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关因子GRP78和caspase-12表达的变化,探讨其对心脏结构和功能的影响。方法采用链脲佐菌素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,取15只造模成功的大鼠,随机分为0周组、8周... 详细信息

目的观察糖尿病大鼠心肌内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关因子GRP78和caspase-12表达的变化,探讨其对心脏结构和功能的影响。方法采用链脲佐菌素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,取15只造模成功的大鼠,随机分为0周组、8周组和16周组,每组5只。采用颈动脉插管法检测大鼠血压、心率及心功能的各项指标。称取体质量、全心质量及左心室质量,计算大鼠心肌肥厚指数HWI及LVEI。Masson染色观察心肌胶原纤维含量的改变,免疫组化及Western blot检测大鼠心肌组织中GRP78及caspase-12表达水平,Western blot检测cleaved caspase-3表达水平。结果三组大鼠血压及心率无统计学差异(P>0.05)。与0周组相比,大鼠平均左心室舒张末期压(LVEDP)及平均压下降最大速率(-dp/dtmax)在8周及16周时明显升高(P0.05),HWI及LVWI在16周时明显升高(Pcaspase-12表达在8周时明显增高(Pcaspase-3表达在8周时明显增高(Pcaspase-12及cleaved caspase-3表达明显升高。因此,心肌细胞ERS的激活可能是高血糖所致大鼠心肌结构和功能改变的原因之一。

关键词：糖尿病内质网应激心脏结构 GRP78 caspase-12 大鼠

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡及caspase-12表达的影响

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湖南中医药大学学报 2015年第3期35卷 1-4,18,72页

作者：陈聪吴勇军喻嵘唐元罗文娟曾婧张翔湖南中医药大学湖南长沙410208

目的探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及内质网应激凋亡因子caspase-12 m RNA和蛋白表达水平的变化及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmol/L葡萄糖,10%空白血浆)、高糖... 详细信息

目的探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及内质网应激凋亡因子caspase-12 m RNA和蛋白表达水平的变化及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmol/L葡萄糖,10%空白血浆)、高糖组(B组,200 mmol/L葡萄糖,10%空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组,200 mmol/L葡萄糖,10%含药血浆),4-苯基丁酸含药血浆组(D组,200 mmol/L葡萄糖,10%含药血浆)。培养48 h后,采用免疫荧光细胞化学法、流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Western blot法、RT-PCR法分别检测caspase-12蛋白或m RNA表达水平的变化。结果与A组比较:在高糖状态下B组足细胞凋亡率、caspase-12 m RNA和蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(Pcaspase-12 m RNA和蛋白的表达水平均降低,差异均有统计学意义(Pcaspase-12 m RNA和蛋白的表达水平,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 caspase-12表达上调,是足细胞凋亡的分子机制之一;10%左归降糖益肾方含药血浆可能通过降低caspase-12的表达水平,从而保护足细胞。

关键词：高糖足细胞左归降糖益肾方 caspase-12