检索结果-南通市图书馆

白菜种子cdna酵母文库的构建及BrTTG1互作蛋白的筛选及分析

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生物技术通报 2024年第2期40卷 223-232页

作者：任延靖张鲁刚赵孟良李江邵登魁青海大学农林科学院青藏高原种质资源研究与利用实验室西宁810016 农业农村部青藏高原种质资源保护与遗传改良重点实验室西宁810016 西北农林科技大学园艺学院杨凌712100

【目的】通过构建白菜种子的cDNA文库,筛选WDR 40蛋白TRANSPARENT TESTA GLABRA 1(TTG1)的互作蛋白,探究TTG1参与MBW三元复合体调控种皮原花青素形成的分子机制。【方法】以棕籽白菜自交系‘B147’的种子为材料,提取总RNA并建立cDNA文库... 详细信息

【目的】通过构建白菜种子的cDNA文库,筛选WDR 40蛋白TRANSPARENT TESTA GLABRA 1(TTG1)的互作蛋白,探究TTG1参与MBW三元复合体调控种皮原花青素形成的分子机制。【方法】以棕籽白菜自交系‘B147’的种子为材料,提取总RNA并建立cDNA文库,通过gateway技术构建诱饵载体pGBKT7-TTG1并进行酵母双杂交筛库。【结果】酵母文库库容为1.2×10^(7)CFU,文库滴度是5.0×10^(7)CFU/mL,插入片段平均长度大于1000 bp,诱饵载体在酵母中无自激活活性。通过构建的诱饵载体pGBKT7-TTG1与构建的cDNA文库杂交,共获得了38个阳性互作蛋白,功能预测显示其中一个蛋白注释为MYB转录因子,注释为MYB73,序列分析结果显示该基因含有R2R3-MYB型抑制子保守基序C1和C2,推测该基因为白菜中参与种皮颜色形成的R2R3-MYB型抑制子,暗示着白菜中可能存在不同MYB转录因子参与的调控网络,影响着原花青素的形成。【结论】本研究构建了白菜种子组织的酵母双杂交cDNA文库,获得了38个TTG1阳性互作蛋白,首次挖掘到了可能影响白菜种皮颜色原花青素形成的R2R3-MYB型抑制子MYB73,为后期探究白菜种皮原花青素的调控网络奠定良好的基础。

关键词：白菜种皮颜色 cDNA文库酵母双杂交互作蛋白 MYB73 基因克隆表达分析

捻转血矛线虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2022年第2期48卷 247-253页

作者：张惠黄艳周静茹吴飞童丹妮陈学秋杨怡马光旭杜爱芳浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室杭州310058

为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cdna进... 详细信息

为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cdna进行均一化处理,再将纯化后的cdna与线性化的pGADT7-Rec重组构建的文库质粒转化至Y187酵母中,构建出酵母转录激活结构域(activationdomain,AD)文库。结果表明:本研究构建了重组率为100%,插入片段平均长度为1000 bp,工作液细胞密度大于3.5×10^(7)CFU/mL的捻转血矛线虫均一化酵母AD文库;所构建的表达文库各项指标均达标,符合酵母双杂交筛选要求。本文库为捻转血矛线虫的分子机制研究以及疫苗的开发奠定了基础。

关键词：捻转血矛线虫 cDNA文库酵母双杂交系统蛋白质间相互作用

苹果砧木‘青砧1号’叶片cDNA文库构建及MdMLO上游调控因子的筛选

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园艺学报 2023年第5期50卷 933-946页

作者：张琨思彬彬周军任玉锋张欣徐文娣王佳伟乔帅王惠冉北方民族大学生物科学与工程学院遗传发育生物学实验室银川750021

MLO(Mildew Resistance Locus O)家族基因是植物特有的“感病基因”,普遍认为它对白粉病具有负调控作用。目前在单子叶和双子叶植物中发现许多抗白粉病MLO基因,但对于其上游调控因子如何调控其表达而影响白粉病发生的研究却很少。本研... 详细信息

MLO(Mildew Resistance Locus O)家族基因是植物特有的“感病基因”,普遍认为它对白粉病具有负调控作用。目前在单子叶和双子叶植物中发现许多抗白粉病MLO基因,但对于其上游调控因子如何调控其表达而影响白粉病发生的研究却很少。本研究中以易感白粉病的苹果砧木‘青砧1号’叶片为材料,构建其cDNA文库,文库滴度4×10^(9)cfu·mL^(-1),重组率为100%。生物信息分析苹果MdMLO家族基因启动子区共有38种顺式作用元件,包含激素、应激防御和生长发育等响应元件。以TCA和TC-rich repeats为诱饵序列构建诱饵载体,分别命名为Bait-TCA和Bait-TC。利用酵母单杂交的方法筛选其上游调控因子,结果显示Bait-TCA具有自激活现象无法筛选,Bait-TC诱饵载体调取获得30条基因序列,其中6条参与植物抗逆防御反应,推测它们可能通过与TC-rich repeats元件互作来调控MLO的表达,进而调控苹果叶片对于白粉病的响应。

关键词：苹果 MLO基因 cDNA文库酵母单杂交顺式作用元件

芍药种子休眠解除过程的酵母杂交cDNA文库构建

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北京林业大学学报 2023年第7期45卷 120-129页

作者：费日雯樊富伟孙天祎辛如洁宋文慧关士鑫孙晓梅沈阳农业大学园艺学院辽宁沈阳110866 沈阳农业大学林学院辽宁沈阳110866

【目的】芍药具有极佳的观赏价值,但其种子的双重休眠难以解除,严重阻碍芍药的育种进程。本研究利用gateway技术构建芍药种子休眠解除关键时期的酵母杂交cDNA文库,可用于筛选调控芍药种子休眠解除相关基因的转录因子及互作蛋白。本文库... 详细信息

【目的】芍药具有极佳的观赏价值,但其种子的双重休眠难以解除,严重阻碍芍药的育种进程。本研究利用gateway技术构建芍药种子休眠解除关键时期的酵母杂交cDNA文库,可用于筛选调控芍药种子休眠解除相关基因的转录因子及互作蛋白。本文库的构建可为丰富芍药种子休眠调控研究提供科学支撑,能为芍药栽培育种和野生资源保护及利用奠定分子理论基础。【方法】本研究以休眠解除过程中5个关键时期的芍药种子为试验材料,进行总RNA的提取和m RNA的分离,使用gateway方法构建cdna初级文库,再通过LR重组,将初级文库重组到pGADT7-DEST次级文库载体上,构建出次级文库,最后经过酵母转化试验,将次级文库质粒转化到酵母Y187感受态细胞中,构建出芍药种子休眠解除过程的酵母文库。【结果】经鉴定,cdna初级文库库容量为1.28×10^(7) CFU,平均插入片段长度在1000 bp以上,重组率为100%;cdna次级文库库容量为1.12×10^(7) CFU,平均插入片段长度在1000 bp以上,重组率为100%;酵母文库滴度为7.0×10^(7) CFU/mL,平均插入片段长度在1000 bp以上,重组率为96%。23个阳性克隆测序结果经NCBI比对后,按照功能将20个已知蛋白序列划分为8类,其中7个序列已被报道参与种子的休眠与萌发。【结论】芍药种子休眠解除过程的酵母杂交cDNA文库构建的质量较高,具有较完整的基因信息,符合酵母文库筛选试验所需的标准,为构建芍药种子休眠解除过程的分子调控网络提供基础。

关键词：芍药种子休眠与萌发酵母杂交 cDNA文库 gateway技术

番茄分裂泛素酵母双杂膜系统cDNA文库及SlToc159诱饵载体的构建

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植物生理学报 2022年第5期58卷 825-834页

作者：王琪闫见敏岳江李云洲须文贵州大学农学院贵阳550025 贵州大学蔬菜研究院贵阳550025

叶绿体是植物进行光合作用、脂质代谢以及氨基酸合成的重要场所。叶绿体自身基因组编码的蛋白质仅有100个左右,其余95%(约3000多个)的叶绿体蛋白质即前体蛋白是由细胞核基因组编码的,在细胞质中翻译后通过TOC-TIC转运蛋白复合体导入叶... 详细信息

叶绿体是植物进行光合作用、脂质代谢以及氨基酸合成的重要场所。叶绿体自身基因组编码的蛋白质仅有100个左右,其余95%(约3000多个)的叶绿体蛋白质即前体蛋白是由细胞核基因组编码的,在细胞质中翻译后通过TOC-TIC转运蛋白复合体导入叶绿体的特定位置而发挥生物学功能。Toc159是叶绿体外膜转运蛋白,主要负责转运初始阶段前体蛋白的特异性识别。为研究番茄SlToc159与前体蛋白的互作机制,本试验以‘Alisa Craig’番茄为材料,提取番茄幼苗叶片总RNA,采用Gateway技术构建分裂泛素化膜系统cDNA文库,同时构建诱饵载体pBT3-N-Toc159AGM和pBT3-N-Toc159GM,并用营养缺陷法检测其自激活活性。文库质量检测结果显示,文库总容量为1.6×10^(7)CFU,文库滴度为4.0×10^(6)CFU·mL^(-1),外源基因插入片段为750~2000 bp,重组率为100%,符合后续筛选互作蛋白的cDNA文库要求。酶切及测序结果表明,诱饵载体pBT3-N-Toc159AGM和短截A区的pBT3-N-Toc159GM构建成功,能够在分裂泛素化系统中正确表达且无自激活活性。本研究结果为番茄膜蛋白利用酵母双杂交筛选互作蛋白提供参考与理论基础。

关键词：番茄分裂泛素酵母双杂交系统 cDNA文库 Gateway技术叶绿体外膜转运蛋白 SlToc159 诱饵载体

曼氏裂头蚴cDNA文库的构建及诊断候选抗原筛选

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中国血吸虫病防治杂志 2021年第4期33卷 380-386页

作者：卢艳陈家旭宋鹏李浩艾琳蔡玉春储言红陈韶红中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室、WHO热带病合作中心、国家级热带病国际联合研究中心上海200025

目的构建曼氏裂头蚴cDNA文库,通过免疫筛选获得曼氏裂头蚴病诊断候选抗原基因。方法提取曼氏裂头蚴虫体总RNA,反转录合成cdna,连接噬菌体载体,经体外包装后构建曼氏裂头蚴SMART cDNA文库。用曼氏裂头蚴病患者血清免疫筛选cDNA文库,获得... 详细信息

目的构建曼氏裂头蚴cDNA文库,通过免疫筛选获得曼氏裂头蚴病诊断候选抗原基因。方法提取曼氏裂头蚴虫体总RNA,反转录合成cdna,连接噬菌体载体,经体外包装后构建曼氏裂头蚴SMART cDNA文库。用曼氏裂头蚴病患者血清免疫筛选cDNA文库,获得阳性克隆,测定阳性克隆插入片段的DNA序列,进行同源性分析并预测编码蛋白的结构和功能。结果成功构建了曼氏裂头蚴cDNA文库,文库滴度为6.25×10^(6)pfu/mL,重组率为100%,文库插入片段的平均长度大于1100 bp。经免疫筛选获得12个阳性克隆,分为Sm-Ⅰ、Sm-Ⅱ、Sm-Ⅲ和Sm-Ⅳ4类,其代表克隆为Sm60-1、Sm58-1、Sm20-1、Sm22-3,插入片段长度分别为1134、1063、883、969 bp,编码蛋白分别与欧猥迭宫绦虫抗原多肽、胞质抗原、核糖体蛋白S4样蛋白和未命名蛋白具有较高同源性。结论成功构建了曼氏裂头蚴SMART cDNA文库,获得了4类阳性克隆,为曼氏裂头蚴病诊断抗原的进一步研究奠定了基础。

关键词：曼氏裂头蚴 cDNA文库免疫筛选诊断抗原 SMART技术

不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建及BcFT上游调控因子筛选

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核农学报 2023年第6期37卷 1130-1137页

作者：徐新凤王惠玉米闵侯喜林李英王建军肖栋刘同坤作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室南京农业大学园艺学院江苏南京210095

FLOWERING LOCUS T(FT)是调控植物开花途径中的关键基因,前期研究中,在比较晚开花wym-97和早开花cx-49两个品种的BcFT启动子时,发现cx-49的BcFT启动子存在一个1577 bp的插入片段。为探索该插入片段对不结球白菜开花的影响,本研究构建不... 详细信息

FLOWERING LOCUS T(FT)是调控植物开花途径中的关键基因,前期研究中,在比较晚开花wym-97和早开花cx-49两个品种的BcFT启动子时,发现cx-49的BcFT启动子存在一个1577 bp的插入片段。为探索该插入片段对不结球白菜开花的影响,本研究构建不结球白菜酵母杂交cDNA文库,继而利用酵母单杂交技术筛选与BcFT启动子互作的蛋白。结果显示,本研究所得cDNA文库的库容为1.8×10^(6)CFU,重组率为100%,插入片段长度分布范围约400~2000 bp,平均长度大于1000 bp,表明不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建成功。自激活试验表明,800 ng·mL^(-1)的金担子素(AbA)可以抑制诱饵载体的自激活。通过酵母单杂交试验筛选到结合BcFT启动子插入片段的上游蛋白BcSAP18和BcDEAR2。综上,本研究成功构建了不结球白菜酵母杂交cDNA文库并获得了BcFT启动子插入片段的互作蛋白,为进一步研究BcFT在不结球白菜开花中的调控机制奠定了基础。

关键词：不结球白菜 BcFT基因开花 cDNA文库酵母单杂交

小麦叶锈菌与小麦互作的酵母双杂交cDNA文库构建与应用

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生物技术通报 2023年第9期39卷 136-146页

作者：温晓蕾李建嫄李娜张娜杨文香河北农业大学植物保护学院植物病理学系河北省农作物病虫害生物防治技术创新中心国家北方山区农业工程技术研究中心保定071001 河北科技师范学院农学与生物科技学院河北省作物逆境生物学重点实验室秦皇岛066000 邢台学院生物科学与工程学院邢台054000 河北省植保植检总站石家庄050000

为筛选小麦叶锈菌效应蛋白的互作靶标蛋白,解析效应蛋白干扰寄主的防御反应机制。本试验以小麦叶锈菌菌株13-5-28-1(JHKT)与感病品种Thatcher在0-12 d互作的供试样本为材料,利用SMART方法构建三框均一化的、用于筛选与小麦叶锈菌互作的... 详细信息

为筛选小麦叶锈菌效应蛋白的互作靶标蛋白,解析效应蛋白干扰寄主的防御反应机制。本试验以小麦叶锈菌菌株13-5-28-1(JHKT)与感病品种Thatcher在0-12 d互作的供试样本为材料,利用SMART方法构建三框均一化的、用于筛选与小麦叶锈菌互作的小麦cDNA文库,采用同源重组的方法构建效应因子Pt34084重组诱饵载体pGBKT7-Pt34084,并以其为诱饵蛋白,利用共转化方法筛选互作的靶标蛋白。结果表明,构建的小麦叶锈菌与小麦互作的cDNA文库库容约1.05×10^(7)CFU/mL,滴度为1.2×10^(9)CFU/mL,平均插入片段大于1 kb,重组阳性率为100%,符合cdna建库要求。构建的诱饵重组载体pGBKT7-Pt34084在SD/-Trp-His-Ade培养基中添加20 mmol/L 3-AT及400 ng/mL ABA可抑制其自激活性。利用该文库共筛选获得16个来自小麦及叶锈菌的不同候选互作蛋白,这些蛋白涉及植物代谢、激素信号转导、抗病反应等多个方面。预示Pt34084可通过多种渠道干扰寄主的防御反应,促进叶锈菌侵染。研究结果有助于解析小麦叶锈菌致病机理,为创造新的有效防控小麦叶锈菌策略奠定基础。

关键词：小麦叶锈菌小麦叶锈病 cDNA文库酵母双杂交效应蛋白互作蛋白筛选

玉米大斑病菌cDNA文库的构建及转录因子StMR1互作蛋白的筛选

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生物技术通报 2024年第6期40卷 281-289页

作者：王秋月段鹏亮李海笑刘宁曹志艳董金皋河北农业大学植物保护学院保定071000 华北作物改良与调控国家重点实验室保定071000

【目的】筛选玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)转录因子的互作蛋白,解析黑色素调控转录因子StMR1调控玉米大斑病菌致病性的分子机制。为解析玉米大斑病菌侵染过程中转录因子的调控网络,阐明病菌的致病机理提供参考。【方法】收集玉... 详细信息

【目的】筛选玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)转录因子的互作蛋白,解析黑色素调控转录因子StMR1调控玉米大斑病菌致病性的分子机制。为解析玉米大斑病菌侵染过程中转录因子的调控网络,阐明病菌的致病机理提供参考。【方法】收集玉米大斑病菌菌丝和孢子不同萌发阶段作为试验材料,采用Gateway方法构建玉米大斑病菌cDNA文库,使用同源重组的方法构建转录因子StMR1的诱饵载体,采用酵母双杂交技术筛选其互作蛋白并进行一对一验证。【结果】构建的玉米大斑病菌文库插入的平均片段长度大于1000 bp,初级文库及次级文库的库容量为1.2×107和1.04×107CFU,重组率为100%,可以用于酵母双杂交筛选。成功构建可以用于筛库的诱饵载体pGBKT7-StMR1,经初筛与复筛得到3个互作蛋白,一对一验证短链脱氢酶、糖基转移酶、富含亮氨酸重复序列蛋白均与转录因子StMR1存在互作。【结论】成功构建了丰富度高且质量好的玉米大斑病菌cDNA文库并筛选到了与转录因子StMR1互作的蛋白。

关键词：玉米大斑病菌 cDNA文库转录因子酵母双杂交互作蛋白