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解剖学杂志 2007年第1期30卷 112-113页

作者：王乔程蓓潘伯群宋健武汉大学医学院人体解剖学与组织胚胎学系结构生物学研究中心武汉430071

免疫组化和蛋白质印迹（Western blotting）是生物医学科研和教学中鉴定目的蛋白表达的最常用手段。二者的原理基本一致，即通过抗原与抗体的特异性免疫反应来检测目的蛋白质。

关键词：抗原-抗体反应蛋白质印迹免疫组化 blotting 特异性免疫反应蛋白表达医学科研

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苯DNA加合物研究进展(综述)

卫生研究 1995年第S1期24卷 3-6,31页

作者：李桂兰常平中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所

苯ＤＮＡ加合物研究进展（综述）李桂兰，常平综述徐伯洪审校（中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所，北京１０００５０）我国职业接触苯的工人约有５０万，长期接触苯可引起白血病。苯与其它实质性肿瘤的问题也有报道［１，２］... 详细信息

苯ＤＮＡ加合物研究进展（综述）李桂兰，常平综述徐伯洪审校（中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所，北京１０００５０）我国职业接触苯的工人约有５０万，长期接触苯可引起白血病。苯与其它实质性肿瘤的问题也有报道［１，２］。世界癌症研究机构（ＩＡＲＣ）１９...

关键词： RNA mRNA northern blotting human gliona 1 extraction

棉花GhCOMT3基因的原核表达、纯化及鉴定

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华北农学报 2010年第B8期25卷 12-16页

作者：李波倪志勇范玲新疆农业科学院核技术生物技术研究所新疆乌鲁木齐830091

为了深入研究GhCOMT3基因的功能,将GhCOMT3基因构建到原核表达载体pET-28a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。用0.2mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,结果发现,16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达;30℃诱导... 详细信息

为了深入研究GhCOMT3基因的功能,将GhCOMT3基因构建到原核表达载体pET-28a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。用0.2mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,结果发现,16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达;30℃诱导的蛋白表达量最大,之后对包涵体进行变性溶解,进行SDS-PAGE检测,再经过蛋白标记亲和层析柱(His TrapTMHP)纯化得到变性的pET-28a-GhCOMT3融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化效果,鉴定表达产物,目的蛋白相对分子量约为39.119kDa,检测结果与预期一致。结果表明,pET-28a-GhCOMT3蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达产物,为在蛋白水平上研究GhCOMT3基因功能奠定了基础。

关键词： GhCOMT3 原核表达蛋白纯化 Western blotting

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究

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中国肿瘤临床 2007年第13期34卷 740-743页

作者：鲁照明刘红涛许培荣侯桂琴薛乐勋郑州大学医学实验中心细胞生物研究室郑州市450052

目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western... 详细信息

目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况。结果:在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异(F=80.442,P0.05)。进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象。上述结果说明12hNotch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡。结论:Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点。

关键词： Notch1 EC9706 免疫细胞化学 Western blotting

糖尿病仓鼠视网膜p38MAPK和TGFβ_2的表达

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第三军医大学学报 2007年第8期29卷 714-716页

作者：彭惠洪苏玲陶永贤彭彦姜蓉重庆医科大学附属第一医院眼科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科重庆400016 重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨p38MAPK、TGFβ2在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发生发展中的作用及其机制。方法用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导仓鼠糖尿病(DM)模型,提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表... 详细信息

目的探讨p38MAPK、TGFβ2在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发生发展中的作用及其机制。方法用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导仓鼠糖尿病(DM)模型,提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表达情况,Western blotting检测DM仓鼠p38MAPK、TGFβ2蛋白情况。结果DM仓鼠视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表达呈显著升高,蛋白表达增多。结论p38MAPK信号途径参与DR的发病机,制阻断p38MAPK的活性可能有助于阻断DR的发生和发展。

关键词：糖尿病视网膜病变 RT-PCR Western blotting p38MAPK信号途径糖尿病仓鼠

BTH诱导的一种黄瓜叶片胞间隙病程相关蛋白的纯化及鉴定

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园艺学报 2009年第4期36卷 507-512页

作者：李玉红陈鹏程智慧张静董剑西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学农学院陕西杨凌712100

对苯并噻二唑(BTH)处理和接种霜霉病菌后的黄瓜幼苗叶片胞间隙液中病程相关蛋白的诱导积累及纯化鉴定进行了研究。结果表明,BTH处理和接种霜霉病菌均可诱导黄瓜叶片胞间隙液产生分子量为27kD的新蛋白,利用SDS-PAGE结合电洗脱的方法纯化... 详细信息

对苯并噻二唑(BTH)处理和接种霜霉病菌后的黄瓜幼苗叶片胞间隙液中病程相关蛋白的诱导积累及纯化鉴定进行了研究。结果表明,BTH处理和接种霜霉病菌均可诱导黄瓜叶片胞间隙液产生分子量为27kD的新蛋白,利用SDS-PAGE结合电洗脱的方法纯化了该蛋白。通过基体辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析,将所得的肽指纹图谱(PMF)在NCBInr蛋白质数据库中比对,发现该蛋白是一种酸性几丁质酶。酶活性测定及Western blotting分析进一步证实了上述结果。

关键词：黄瓜霜霉病苯并噻二唑病程相关蛋白质谱分析 Western blotting

Identification of an 80 K Dalton Human Sperm Antigen

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Journal of Reproduction and Contraception 1990年第1期1卷 1-8页

作者：于和鸣宋济范王恩泽刘先菊王士娴 DepartmentofReproductiveImmunology NationalResearchInstituteforFamilyPlanningBeijing100081China

Monoclonal antibodies raised against human sperm were used as a probe to look for specific human sperm antigen. By “ Western blotting” ,an 80 K dalton molecular weight protein was recognized by the monoclonal antibody, 21-2-4. By the SDS polyacrylamide gel electrophoresis, the 80 Kd was the major band of deoxycholate extract in which this protein could be isolated from other components of sperm by eleetro-elution from the gel slab. For the purpose of evaluating the function of 80 Kd in fertilization, the rabbit anti-80 Kd polyclonal antibodies were produced and immunoassays were performed. The TAT result showed that the agglutination in patterns of tail to tail and head to head were induced by incubating human sperm with rabbit anti-8OKd antiserum. The SIT result showed that the human sperm motility was strongly inhibited by rabbit anti-80 Kd antiserum. The immanofluorescence staining of human sperm incubated with rabbit anti-80 Kd antiserum showed very strong fluorescence on postaerosome and tail. These results suggest that 80 Kd is a specific sperm antigen which locates on the surface of human sperm and possibly plays an important role in fertilization.

关键词：精子抗原单克隆抗体抗精子抗体 Western blotting 避孕

葎草花粉致敏蛋白多克隆抗体的制备及其在筛选致敏蛋白组分的应用

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西安交通大学学报（医学版） 2007年第2期28卷 161-163页

作者：李雅莉孙秀珍高燕华刘昀张洁冯向莉西安交通大学医学院第二附属医院呼吸科陕西西安710004

目的制备、鉴定兔抗葎草花粉蛋白多克隆抗体,并初步应用于葎草花粉致敏蛋白组分的筛选。方法用葎草花粉变应原浸液免疫兔,获得高效价抗葎草花粉蛋白抗血清,应用琼脂免疫双扩散、ELISA法以及Western blotting鉴定产生的抗体。同时对葎草... 详细信息

目的制备、鉴定兔抗葎草花粉蛋白多克隆抗体,并初步应用于葎草花粉致敏蛋白组分的筛选。方法用葎草花粉变应原浸液免疫兔,获得高效价抗葎草花粉蛋白抗血清,应用琼脂免疫双扩散、ELISA法以及Western blotting鉴定产生的抗体。同时对葎草花粉过敏性哮喘患者血清进行Western blotting检测。结果兔抗血清效价经ELISA检测,效价>1∶10000,免疫双扩散结果表明抗血清只与葎草花粉变应原形成特异性IgG沉淀线,Western blotting检测兔抗血清IgG可以特异性识别葎草花粉8种蛋白组分,分子质量分别为100、88、76、69、65、55、49、38 ku,患者血清IgG可以识别5种蛋白组分,分子质量分别为100、76、55、493、8 ku。结论制备的兔抗血清具有较高效价和较好的特异性,应用该血清筛选出的葎草花粉致敏蛋白组分与患者血清筛选的组分相似,因此可进一步应用于初筛cDNA表达文库。

关键词：葎草花粉多克隆抗体 Western blotting

新城疫病毒HN09-69株P基因的克隆、序列分析及表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第2期40卷 20-26页

作者：陈礼朋王忠田岳旭龙王泽仁高文明李双亮张宇耕崔保安李新生河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 中国兽医药品监察所北京100081

【目的】对新城疫病毒(NDV)HN09-69株P基因进行克隆、序列分析和表达鉴定,为研究P和V蛋白的功能,及NDV新流行毒株的免疫预防提供理论依据。【方法】以HN09-69株NDV为研究对象,根据GenBank上发布的相关P基因参考序列设计引物,进行RT-PCR... 详细信息

【目的】对新城疫病毒(NDV)HN09-69株P基因进行克隆、序列分析和表达鉴定,为研究P和V蛋白的功能,及NDV新流行毒株的免疫预防提供理论依据。【方法】以HN09-69株NDV为研究对象,根据GenBank上发布的相关P基因参考序列设计引物,进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析,将P基因的核苷酸序列与相关参考株的P基因序列进行比对分析并构建进化树。将P基因克隆到原核表达载体PET28a(+)中,得到重组质粒rPET28a(+)-P,将重组表达质粒转化到BL21(DE3)中诱导表达,用SDS-PAGE电泳和Western blotting检测表达情况。【结果】扩增出了HN09-69株P基因的ORF,序列长度为1 188bp。NDV HN09-69株核苷酸与弱毒株La Sota、clone-30同源性分别为82.5%和82.4%,与强毒株F48E8同源性为84.9%,与鸭源,鹅源NDV核苷酸同源性分别为97.9%～98.4%和96.0%～98.0%。SDS-PAGE电泳和Western blotting检测结果表明,重组P蛋白分子质量约为54ku,符合预期结果,在大肠杆菌中主要以可溶性的形式表达。【结论】NDV HN09-69株与SDWF-02和SD-09鸭源强毒分离株同源性高,亲缘关系近。重组P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。

关键词：新城疫病毒 P基因原核表达 SDS-PAGE Western blotting

利用鱼抗血清及鼠抗血清分析鱼肠道弧菌全菌蛋白抗原性

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2016年第10期46卷 24-31页

作者：张铭伟唐小千绳秀珍邢婧战文斌中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室山东青岛266003

从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾。通过生理生化特征测定和16SrDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)... 详细信息

从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾。通过生理生化特征测定和16SrDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)。以福尔马林灭活的菌株CD86全菌分别免疫健康的小鼠和牙鲆,ELISA测定鼠抗血清和牙鲆抗血清效价分别为12 800和1 200。利用间接免疫荧光技术检测2种抗血清与菌株CD86的结合活性,结果显示,2种血清均可同菌体发生阳性反应,其中鼠抗血清阳性反应信号明显强于鱼抗血清。同时,利用Western blotting分析了菌株CD86全菌蛋白的抗原性,结果显示分子量为27、30和37kDa的菌体蛋白条带与2种血清均发生阳性反应;分子量为19、25、28、29和35kDa的菌体蛋白条带仅与鼠抗血清发生阳性反应;分子量为45kDa的菌体蛋白条带只与鱼抗血清发生阳性反应。研究结果表明,牙鲆对菌体抗原产生的抗体应答与小鼠存在明显差异,该发现对研筛鱼用高效的鱼肠道弧菌亚单位疫苗具有重要的参考价值。

关键词：鱼肠道弧菌分离鉴定 ELISA Western blotting 抗原性分析抗血清