棉花GhCOMT3基因的原核表达、纯化及鉴定

作     者：李波 倪志勇 范玲 LI Bo;NI Zhi-yong;FAN Ling

作者机构：新疆农业科学院核技术生物技术研究所新疆乌鲁木齐830091 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2010年第25卷第B8期

页      面：12-16页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"863"项目(2006AA10Z184) 农业部转基因重大专项课题(2009ZX08005-011B) 新疆自治区高技术研究发展计划项目(200611101) 国家自然科学基金项目(30660088) 

主　　题：GhCOMT3 原核表达 蛋白纯化 Western blotting 

摘      要：为了深入研究GhCOMT3基因的功能,将GhCOMT3基因构建到原核表达载体pET-28a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。用0.2mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,结果发现,16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达;30℃诱导的蛋白表达量最大,之后对包涵体进行变性溶解,进行SDS-PAGE检测,再经过蛋白标记亲和层析柱(His TrapTMHP)纯化得到变性的pET-28a-GhCOMT3融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化效果,鉴定表达产物,目的蛋白相对分子量约为39.119kDa,检测结果与预期一致。结果表明,pET-28a-GhCOMT3蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达产物,为在蛋白水平上研究GhCOMT3基因功能奠定了基础。