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beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠再灌注中的表达及意义

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中风与神经疾病杂志 2014年第8期31卷 687-690页

作者：石秋艳杨斌孙原范亚霞张春阳刘冰河北联合大学附属医院神经内科河北唐山063000

目的研究自噬相关蛋白beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义。方法根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按... 详细信息

目的研究自噬相关蛋白beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义。方法根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按不同缺血后处理时间分为15 s、30 s、1 min 3个亚组。缺血2 h再灌注24h后用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白beclin-1、LC3-Ⅱ的表达情况,透射电镜观察神经细胞中自噬和溶酶体的激活以及细胞超微结构的变化。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组神经行为学评分明显降低(P1),beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达细胞数明显增加(P1),自噬体形成和溶酶体激活量增加;缺血30 s亚组相比较15 s和1 min亚组上述指标(神经行为学评分除外)(P>0.05),差异亦有显著性(P1)。结论脑缺血后处理的抗缺血再灌注损伤作用可能与上调自噬相关蛋白beclin-1、LC3-Ⅱ的表达有关。

关键词： beclin-1 LC3-Ⅱ 自噬缺血后处理缺血再灌注损伤

beclin-1在肾小球足细胞自噬调控中的作用

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中华实用儿科临床杂志 2014年第17期29卷 1281-1284页

作者：于力王辉阳广州医科大学附属广州市第一人民医院儿科 510180

自噬是一个发生在真核细胞中由细胞初级溶酶体处理内源性底物的一系列生化过程，其主要作用是清除和降解自身受损的细胞器及多余的生物大分子，并利用降解产物提供能量和重建细胞结构，在维持细胞稳态和细胞生命活动等方面起重要作用。... 详细信息

自噬是一个发生在真核细胞中由细胞初级溶酶体处理内源性底物的一系列生化过程，其主要作用是清除和降解自身受损的细胞器及多余的生物大分子，并利用降解产物提供能量和重建细胞结构，在维持细胞稳态和细胞生命活动等方面起重要作用。近年来，研究发现肾小球足细胞的自噬活性水平与足细胞的损伤和蛋白尿的发生发展有关。自噬在肾小球足细胞中起到的调控作用成为对抗足细胞损伤的研究热点，其中自噬相关基因beclin—1在自噬调控中的作用更是引起了广泛关注。现就近年来关于beclin-1在足细胞自噬调控中作用的相关研究进行综述。

关键词：足细胞自噬 beclin-1

beclin-1对胃癌增殖侵袭的影响及在胃癌组织中的表达与血管生成拟态的关系和临床意义

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Beclin-1对胃癌增殖侵袭的影响及在胃癌组织中的表达与血管生成拟...

作者：张雨蚌埠医学院

学位级别：硕士

【研究目的】探索beclin-1、PDCD4、Twist1在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达情况以及血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)在胃癌组织中的存在情况,并分析其与预后的关系,为胃癌的治疗寻找一个靶点;探索降表达beclin-1基因对胃... 详细信息

【研究目的】探索beclin-1、PDCD4、Twist1在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达情况以及血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)在胃癌组织中的存在情况,并分析其与预后的关系,为胃癌的治疗寻找一个靶点;探索降表达beclin-1基因对胃癌BGC7901细胞株增殖侵袭能力的影响。【研究方法】1.在蚌埠医学院第一附属医院病理科收集2013年1月至2013年12月期间113例胃癌根治术的胃癌组织标本和其相对应的癌旁组织,并且统计其临床信息。2.利用HE结合免疫组化染色观察113例胃癌标本以及癌旁正常组织中beclin-1、PDCD4、Twist1表达情况,用CD34/PAS套染寻找113例胃癌标本中是否含有VM结构,并统计VM的数量,统计分析实验结果与临床病理参数之间的关系。3.对这113例胃癌患者进行随访,随访至死亡或最后随访日期为2019年3月1日,统计患者的生存情况,分析生存时间与实验结果及临床病理参数之间的关系。4.通过shRNA技术稳定转染构建低表达beclin-1基因的BGC7901细胞株,将实验细胞分为转染组、空载体组和对照组。*** blot方法检测三组细胞beclin-1蛋白的表达差异验证目的基因的转染效果。***8细胞增殖实验检测三组细胞的增殖能力,分析统计其差异。7.划痕实验观察并计算三组细胞迁移能力,分析统计其差异。***迁移及Transwell侵袭实验检测三组细胞迁移和侵袭的能力,分析统计其差异。【研究结果】1.113例胃癌组织中beclin-1、PDCD4、Twist1、VM的阳性率分别为49.56%(56/113)、30.97%(35/113)、56.64%(64/113)、32.74%(37/113),其中在随机10个高倍镜下一共发现893个VM结构,有34个VM结构中存在一些红细胞。2.113例胃癌组织中beclin-1、PDCD4、Twist1、VM阳性情况与病理分级,肿瘤的直径,浸润程度,淋巴结转移,临床TNM分期有统计学意义(P0.05)。***-1阳性率与PDCD4呈正相关(r=0.638,P1),与Twist1(r=-0.740,P1)和VM(r=-0.578,P1)阳性率呈负相关;PDCD4阳性率与Twist1(r=-0.766,P1)和VM(r=0.467,P1)呈负相关,Twist1阳性率与VM(r=0.611,P1)呈正相关。4.患者的生存时间与beclin-1、PDCD4、Twist1、VM的阳性率,肿瘤直径、分级、浸润程度、淋巴结转移、TNM分期存在差异,并具有统计学意义(P0.05)。***1、PDCD4、Twist1、VM的阳性率以及肿瘤大小、浸润深度和临床TNM分期是胃癌患者生存的独立预后因素。*** blot结果显示beclin-1蛋白在转染组的灰度值比值低于空载体组和对照组(P1和PDCD4对肿瘤的进展起到抑制作用,Twist1和VM促进肿瘤的进展,提示预后不良。2.降表达beclin-1基因,在正常培养条件下一定程度上增强了胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。

关键词：胃癌 beclin-1 PDCD4 Twist1 血管生成拟态

beclin-1负反馈调节高醛固酮诱导的血管内皮细胞损伤及机制研究

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Beclin-1负反馈调节高醛固酮诱导的血管内皮细胞损伤及机制研究

作者：蒋雯怡苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究在人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC）中,醛固酮（Aldosterone,Aldo）诱导的自噬蛋白beclin-1在高醛固酮导致的血管内皮损伤中的作用。方法:1、用醛固酮浓度梯度（0,10,100,1000 nM）作用于... 详细信息

目的:研究在人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC）中,醛固酮（Aldosterone,Aldo）诱导的自噬蛋白beclin-1在高醛固酮导致的血管内皮损伤中的作用。方法:1、用醛固酮浓度梯度（0,10,100,1000 nM）作用于HUVEC 12、24、48、72 h,用CCK8试剂盒检测醛固酮作用不同时间后的细胞活力。用同一浓度梯度（0,10,100,1000 nM）的醛固酮作用于HUVEC,利用western blot检测自噬相关蛋白beclin-1,SQSTM1/p62和LC3的表达量变化,利用试剂盒检测细胞总NO含量的变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。2、用免疫共沉淀法和免疫荧光法证实beclin-1与盐皮质激素受体（Mineralocorticoid receptor,MR）存在相互作用。在高醛固酮条件下高表达及敲降beclin-1后再次检测细胞中NO含量的变化和凋亡情况。3、设置对照组、醛固酮组、高醛固酮条件下高表达beclin-1组,用免疫荧光法和western blot检测细胞核内MR的表达量、免疫荧光法检测MR与溶酶体之间的共定位情况,利用转录组测序获得有显著性差异表达的基因。4、构建Myc-beclin-1全长和三个截短体质粒,Strep-MR全长和截短体质粒,共转染进入HEK-293T细胞,确定共表达成功后,用Myc免疫磁珠进行免疫共沉淀,检测beclin-1与MR结合的区域。结果:1、醛固酮对细胞活力的抑制作用具有时间依赖性。醛固酮浓度为100 nM时,作用于HUVEC 48 h开始对细胞活力有显著抑制作用（P＜0.05）。醛固酮作用于HUVEC 48 h,随着浓度升高能够显著上调自噬蛋白beclin-1,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达,下调p62的表达（P＜0.05）;同时显著减少细胞内NO的合成,增加细胞凋亡率（P＜0.05）。2、beclin-1与MR存在共定位。在高醛固酮条件下高表达beclin-1能够逆转醛固酮造成的NO含量下降和凋亡率升高的情况,同时,敲降beclin-1进一步促进由醛固酮导致的细胞凋亡的发生。3、与对照组相比,醛固酮显著促进MR核易位和MR与溶酶体的共定位。醛固酮的这一作用在高表达beclin-1后被逆转,相反,在敲降beclin-1后醛固酮的作用得到进一步增强。4、beclin-1与MR之间存在相互作用,结合区域为beclin-1 161-240 AA与MR 601-984 AA。结论:醛固酮诱导产生的beclin-1能够与MR结合,负反馈调节醛固酮经MR途径诱导的血管内皮细胞凋亡、NO合成的减少以及MR的核易位。

关键词： beclin-1 自噬醛固酮盐皮质激素受体血管内皮细胞

beclin-1、LC3B在神经母细胞瘤组织中的表达及意义

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Beclin-1、LC3B在神经母细胞瘤组织中的表达及意义

作者：钱立蕾河北医科大学

学位级别：硕士

目的:检测神经母细胞瘤及正常淋巴结组织中LC3B与beclin-1的表达,分析LC3B与beclin-1的表达在两者中的差异,并进一步分析LC3B与beclin-1在神经母细胞瘤中的表达与神经母细胞瘤临床病理特征的关系,探讨其在神经母细胞瘤中的意义。方法:... 详细信息

目的:检测神经母细胞瘤及正常淋巴结组织中LC3B与beclin-1的表达,分析LC3B与beclin-1的表达在两者中的差异,并进一步分析LC3B与beclin-1在神经母细胞瘤中的表达与神经母细胞瘤临床病理特征的关系,探讨其在神经母细胞瘤中的意义。方法:本研究纳入自2010年10月至2018年12月间就诊于河北医科大学第四医院并经病理诊断为神经母细胞瘤的38例患者及16例儿童肿瘤患者的正常淋巴结组织为研究对象。采用S-P免疫组化方法检测标本中LC3B及beclin-1的表达,用χ2检验或Fisher精确概率法分析两者表达与临床特点的关系。采用Spearman相关分析法分析LC3B和beclin-1之间的相关性。结果:1、LC3B阳性表达位于细胞浆,beclin-1阳性表达位于细胞核,LC3B及beclin-1在神经母细胞瘤表达阳性率高于正常淋巴结组织,差异具有统计学意义(Pbeclin-1在神经母细胞瘤中的阳性表达与病理类型及危险度分组相关,危险度高、病理类型分化差,两者表达阳性率高,差异均具有统计学意义(P0.05)。3、Spearman相关分析结果显示:LC3B与beclin-1在神经母细胞瘤中的表达呈正相关(r=0.447,P=0.006)。结论:1、自噬相关蛋白LC3B与beclin-1在神经母细胞瘤中表达明显高于正常淋巴结组织,且与神经母细胞瘤临床危险度分层、分化程度密切相关,提示自噬参与了神经母细胞瘤的发生发展过程。2、LC3B与beclin-1在神经母细胞瘤表达成正相关,beclin-1与LC3B在神经母细胞瘤自噬过程中可能起协同作用。3、LC3B与beclin-1在神经母细胞瘤中阳性表达与临床危险度分层及病理类型密切相关,可协助判断神经母细胞瘤病情程度和预后。

关键词：神经母细胞瘤 LC3B beclin-1 免疫组织化学

beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

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Beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

作者：陈晓丽重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨自噬相关蛋白beclin-1、P62及LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法:生长至对数生长期的***标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×10～9CFU/ml,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠(6～8周,16～20 g)进行处理,分... 详细信息

目的:探讨自噬相关蛋白beclin-1、P62及LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法:生长至对数生长期的***标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×10～9CFU/ml,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠(6～8周,16～20 g)进行处理,分别在感染后0、6、12、24、48h收集Balb/c小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织,瑞氏-吉姆萨染色进行BALF细胞计数,HE染色观察肺组织病理学改变,Western blot检测自噬相关蛋白beclin-1、P62、LC3B在肺组织中的表达水平,免疫荧光观察LC3B在肺组织中的表达情况。结果:HE染色显示,小鼠鼻饲***后12h及24h后肺组织内出现大量炎症细胞浸润。BALF中总细胞数量及中性粒细胞数量于感染后6h开始增高(1.280±0.506、6.272±1.312,P=0.000;0.000±0.000、3.456±1.308,P=0.000),在12h时达到高峰(1.280±0.506、19.456±0.997,P=0.000;0.000±0.000、15.040±1.012,P=0.000),48h后基本恢复正常水平(1.280±0.506、3.520±0.933,P=0.005;0.000±0.000、0.128±0.175,P=0.835)。Western blot结果显示:自噬相关蛋白beclin-1于感染后6h开始增加(0.626±0.078、0.921±0.093,P=0.002),48h时达到最高水平(0.626±0.078、1.884±0.158,P=0.000);自噬相关蛋白P62于感染后6h开始减少(2.915±0.094、2.275±0.269,P=0.000),48h时降低至最低水平(2.915±0.094、1.178±0.142,P=0.000);自噬相关蛋白LC3B于感染后12h开始升高(0.747±0.197、1.429±0.318,P=0.006),24h时达到高峰(0.747±0.197、2.002±0.451,P=0.000),48h后降低(0.747±0.197、1.563±0.501,P=0.002)。免疫荧光显示:小鼠感染后12h与24h,肺组织中LC3B蛋白表达水平增加。结论:***感染小鼠肺部后激活自噬的发生,且自噬在免疫调节过程中发挥着重要作用。

关键词：自噬肺炎链球菌肺炎 beclin-1 P62 LC3B

beclin-1及ROS在神经元自噬流损伤中的作用与机制

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Beclin-1及ROS在神经元自噬流损伤中的作用与机制

作者：王心涛上海交通大学

学位级别：硕士

目的:心跳骤停(CA)发病凶险,已有研究证实心肺复苏后大脑内自噬过度激活可致神经细胞死亡,但具体机制不明。本研究拟制作心跳骤停(CA)引起的脑缺血再灌注损伤模型,关注CA后大脑自噬功能的改变及分子机制。为心跳骤停脑损伤的治疗提供一... 详细信息

目的:心跳骤停(CA)发病凶险,已有研究证实心肺复苏后大脑内自噬过度激活可致神经细胞死亡,但具体机制不明。本研究拟制作心跳骤停(CA)引起的脑缺血再灌注损伤模型,关注CA后大脑自噬功能的改变及分子机制。为心跳骤停脑损伤的治疗提供一定的理论基础。方法:建立窒息性心跳骤停的动物模型,观察心肺复苏对大脑皮层神经元自噬流的影响。建立氯喹诱导或氧糖剥夺损伤引起的自噬流受损的细胞模型,探讨神经细胞ROS表达增多与自噬流受损的机制。通过shRNA沉默beclin-1或过表达beclin-1,探讨beclin-1的表达水平对自噬相关蛋白的转录及自噬流的影响。通过beclin-1基因部分敲除和/或LAMP2过表达观察其对神经细胞受损的自噬流及细胞死亡的影响。结果:体内外结果显示,CA-ROSC后大鼠脑皮层自噬流受损,溶酶体蛋白减少,ROS表达增加同时神经细胞死亡增多。过量表达的beclin-1抑制了自噬相关基因LC3及溶酶体蛋白LAMP2的转录,同时增加了神经元的死亡,但并没有影响p62的转录。过表达LAMP2或部分沉默beclin-1,可以使受损的自噬流恢复并减少神经元细胞的死亡。结论:心跳骤停-心肺复苏后能够诱导大鼠大脑皮层发生自噬,使其氧自由基ROS增加,同时损伤溶酶体功能,使自噬流受损,诱发神经元死亡。溶酶体蛋白LAMP2和自噬相关蛋白beclin-1有可能成为改善心跳骤停-心肺复苏患者预后的有效候选靶点。

关键词：心跳骤停心肺复苏自噬流活性氧簇 beclin-1

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中药新药与临床药理 2019年第6期30卷 639-646页

作者：安祯祥何远利王敏安仕刚陈昱江贵州中医药大学第一附属医院

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27g·kg^-1),秋水仙碱组(0.2mg·kg^-1),扶正化瘀组(0.415g·kg^-1... 详细信息

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27g·kg^-1),秋水仙碱组(0.2mg·kg^-1),扶正化瘀组(0.415g·kg^-1)。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5mL·kg^-1)联合灌胃30%乙醇(10mL·kg^-1)制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10mL·kg^-1),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及WesternBlot法检测大鼠肝组织beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(P1),ALB含量显著降低(P1),肝组织α-SMA蛋白及beclin-1和LC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(P1)。与模型组比较,FRF中、高剂量组的γ-GGT显著下降(P1),FRF各剂量组的大鼠血清ALT、AST、TBIL明显降低(P1),ALB升高(P1),肝组织α-SMA蛋白及beclin-1、LC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(P1)。结论FRF能干预纤维组织增生,改善肝功能,其抗肝纤维化机制可能与下调beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。

关键词：扶脾柔肝方肝纤维化自噬 beclin-1 LC3-Ⅱ

CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生相关性探究

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中国免疫学杂志 2022年第14期38卷 1758-1761页

作者：巩海凤俄洛吉青海省人民医院产科西宁810007

目的:研究CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生的相关性。方法:选取2019年2月至2021年4月青海省人民医院收治的137例不孕症患者作为研究对象,另选同期体检的60例健康女性作为对照。流式细胞术检测外周血CD... 详细信息

目的:研究CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生的相关性。方法:选取2019年2月至2021年4月青海省人民医院收治的137例不孕症患者作为研究对象,另选同期体检的60例健康女性作为对照。流式细胞术检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)水平,并计算CD4^(+)/CD8^(+);免疫组化染色法检测beclin-1表达;阴道彩色多普勒超声诊断仪检测子宫内膜容受性(血流阻力指数、搏动指数、子宫内膜厚度与容积)变化。Spearman分析CD4^(+)/CD8^(+)、beclin-1阳性表达与子宫内膜容受性相关指标的关系。结果:不孕组CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)高于健康组,CD8^(+)水平低于健康组(Pbeclin-1阳性表达58例,不孕组阳性表达101例,不孕组阳性率(73.72%)低于健康组(96.67%,Pbeclin-1阳性表达与血流阻力指数、搏动指数呈负相关,与子宫内膜厚度与容积呈正相关(Pbeclin-1阳性表达下调,可能与机体子宫内膜容受性变化与不孕发生密切相关。

关键词：不孕症 T淋巴细胞自噬 beclin-1 子宫内膜容受性

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