Beclin-1对胃癌增殖侵袭的影响及在胃癌组织中的表达与血管生成拟态的关系和临床意义

作     者：张雨 

作者单位：蚌埠医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：周蕾

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胃癌 Beclin-1 PDCD4 Twist1 血管生成拟态 

摘      要：【研究目的】探索Beclin-1、PDCD4、Twist1在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达情况以及血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)在胃癌组织中的存在情况,并分析其与预后的关系,为胃癌的治疗寻找一个靶点;探索降表达Beclin-1基因对胃癌BGC7901细胞株增殖侵袭能力的影响。【研究方法】1.在蚌埠医学院第一附属医院病理科收集2013年1月至2013年12月期间113例胃癌根治术的胃癌组织标本和其相对应的癌旁组织,并且统计其临床信息。2.利用HE结合免疫组化染色观察113例胃癌标本以及癌旁正常组织中Beclin-1、PDCD4、Twist1表达情况,用CD34/PAS套染寻找113例胃癌标本中是否含有VM结构,并统计VM的数量,统计分析实验结果与临床病理参数之间的关系。3.对这113例胃癌患者进行随访,随访至死亡或最后随访日期为2019年3月1日,统计患者的生存情况,分析生存时间与实验结果及临床病理参数之间的关系。4.通过shRNA技术稳定转染构建低表达Beclin-1基因的BGC7901细胞株,将实验细胞分为转染组、空载体组和对照组。*** blot方法检测三组细胞Beclin-1蛋白的表达差异验证目的基因的转染效果。***8细胞增殖实验检测三组细胞的增殖能力,分析统计其差异。7.划痕实验观察并计算三组细胞迁移能力,分析统计其差异。***迁移及Transwell侵袭实验检测三组细胞迁移和侵袭的能力,分析统计其差异。【研究结果】1.113例胃癌组织中Beclin-1、PDCD4、Twist1、VM的阳性率分别为49.56%(56/113)、30.97%(35/113)、56.64%(64/113)、32.74%(37/113),其中在随机10个高倍镜下一共发现893个VM结构,有34个VM结构中存在一些红细胞。2.113例胃癌组织中Beclin-1、PDCD4、Twist1、VM阳性情况与病理分级,肿瘤的直径,浸润程度,淋巴结转移,临床TNM分期有统计学意义(P0.05)。***-1阳性率与PDCD4呈正相关(r=0.638,P0.05)。***1、PDCD4、Twist1、VM的阳性率以及肿瘤大小、浸润深度和临床TNM分期是胃癌患者生存的独立预后因素。*** blot结果显示Beclin-1蛋白在转染组的灰度值比值低于空载体组和对照组(P0.05)。***8细胞增殖实验结果显示,转染组细胞的增殖能力高于空载体组和对照组(P0.05)。8.划痕实验结果显示24小时以后,转染组细胞的迁移能力高于空载体组和对照组(P0.05)。***迁移及侵袭实验结果均显示24小时以后,转染组细胞穿膜个数高于空载体组和对照组(P0.05)。【研究结论】***-1和PDCD4对肿瘤的进展起到抑制作用,Twist1和VM促进肿瘤的进展,提示预后不良。2.降表达Beclin-1基因,在正常培养条件下一定程度上增强了胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。