检索结果-南通市图书馆

Journal of Pharmaceutical Analysis 2010年第3期22卷 168-174页

作者： Shi-Wen Guo,Hong-Min Che,Wen-Zhi Li Department of Neurosurgery,the First Affiliated Hospital,Medical School of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,China Department of Neurosurgery First Affiliated Hospital Medical School of Xi'an Jiaotong University Xi'an 710061 China

Objective To construct lentivirus vectors carrying alphastatin gene,test its secretion expression in human umbilical vein endothelia cells(HUVECs)and observe its effects on growth,migration and tube formation of *** We constructed recombinant lentivirus vectors of NT4-alphastatin fusion gene containing neurotrophin-4 signal peptide,pro-region sequences and alphastatin,then transfected the recombinant lentivirus vectors into HUVECs to obtain secretory protein alphastatin and test its anti-angiogenic activities in *** Our data showed that recombinant self-inactivating lentivirus vectors of NT4-alphastatin were successfully constructed,and stable NT4-alphastatin transduced HUVECs were capable of sustainably secreting alphastatin which significantly suppressed HUVECs migration and differentiation but not VEGF-induced *** This report represents the first time on the use of lentivirus-based vectors to deliver alphastatin,the endogenous angiogenesis inhibitor,and reveals the potential utility of anti-angiogenic gene therapy with lentivirus vectors for treating cancer.

关键词： lentivirus vector alphastatin anti-angiogenesis

alphastatin作用下EC304细胞蛋白质差异表达的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Alphastatin作用下EC304细胞蛋白质差异表达的实验研究

作者：王鑫鑫中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

胃癌是一种常见的危害人类健康的疾病,其治疗方式主要依赖于手术切除,术后采用以化疗为主的辅助治疗。研究表明,胃癌血管新生在其发生、发展和转移过程中发挥重要作用。近年来,肿瘤血管新生抑制剂已成为恶性肿瘤治疗领域的热点,有些正... 详细信息

胃癌是一种常见的危害人类健康的疾病,其治疗方式主要依赖于手术切除,术后采用以化疗为主的辅助治疗。研究表明,胃癌血管新生在其发生、发展和转移过程中发挥重要作用。近年来,肿瘤血管新生抑制剂已成为恶性肿瘤治疗领域的热点,有些正在临床试验中。alphastatin具有很强的抑制血管内皮细胞管状结构形成和抗鼠源性CT26生长的作用,显示出良好的应用前景。为此,我们开展了alphastatin台疗胃癌及其作用机理的研究。目的是评价alphastatin印制胃癌血管新生的可行性和有效性,为进一步研究治疗其他恶性肿瘤提供实验基础,进一步探讨alphastatin发挥血管新生的作用机制,为阐述其生物学活性提供理论依据。有关抗血管新生的具体机制国内外的研究较多,但对其蛋白表达的研究较少。本研究寻找与alphastatin目互作用、且在抗血管新生过程中起重要作用的蛋白,并且通过免疫荧光等技术确定它们在信号通路中的上下游关系,从而探讨Alphastin在抗血管新生过程中的可能作用机制。目的：探讨alphastatin作用下人脐静脉内皮细胞EC304内蛋白质表达谱的变化。方法：传代培养EC304细胞,随机分为alphastatin组和对照组。提取各组EC304细胞内蛋白质,应用蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)技术,分析在alphastatin作用下EC304细胞蛋白质组表达的差异。运用ImageMaster 2D Platinum 5.0凝胶图像分析软件对2-DE凝胶图像进行差异表达分析,差异明显蛋白点经胶内酶切后用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱进行分析,通过Mascot数据库检索鉴定差异蛋白质。并对检索出的差异蛋白通过western blot及免疫荧光方法进行验证。结果：1、对照组和alphastatin组平均识别到1350±90个蛋白质点,图像分析匹配率约为70-82%,共找到29个有显著差异的蛋白质点,其中上调蛋白质斑点10个下调蛋白质斑点17个,新增蛋白质斑点2个,消失1个。这些差异点主要分布在pI4.0-9.2、分子量14.0kDa-100.0kDa之间,表达上调的倍数一般在3-25倍,下调最低至0.1倍。2、采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术,分析了29个质谱兼容银染凝胶重复性好的差异蛋白质斑点,鉴定出23个有意义的蛋白质。Mascot检索分值64-666,配数3-27,序列覆盖率8-62%。3、质谱分析鉴定出核苷双磷酸化激酶A (Nm23 protein)及profilin-2 isoform b等23种蛋白质,前者参与多种生物行为,如细胞增殖,分化和发展,信号转导,G蛋白偶联的受体介导内吞以及基因表达。而后者可调节胞外信号导致的肌动蛋白多聚化,可以影响细胞骨架结构。4、通过对Nm23 protein及profilin-2 isoform b的western blot及免疫荧光分析,发现Nm23 protein及profilin-2 isoform b在alphastatin实验组中表达显著下降。结论：1、alphastatin作用于EC304细胞后能引起蛋白质表达发生差异性明显的变化,说明alphastatin可能通过调节蛋白质含量或传导通路的途径发挥EC304细胞调节作用。2、通过质谱分析技术鉴定出的差异显著的蛋白质,结果真实可靠,查阅文献发现检出蛋白质与血管新生和抗血管新生作用相关。证明蛋白质组学方法在研究alphastatin作用机制及探讨胃癌的抗血管新生治疗中发挥重要的作用。3、对于检出蛋白采用western blot及免疫荧光染色方法进一步验证了质谱分析结果。分析alphastatin可能通过Nm23 protein及profilin-2 isoform b等几种蛋白参与细胞的调节并发挥抗血管新生的功能,为研究胃癌的抗血管新生治疗提供了新的研究方向。

关键词： alphastatin EC304 蛋白质组双向电泳质谱胃癌血管新生 western blot 免疫荧光

The effect of alphastatin peptide suppressing the hypoxia-induced vasculogenic mimicry formation of glioma

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Medical Colleges of PLA(China) 2010年第5期25卷 267-274页

作者： Zhang Xi Guo Shiwen Wei Chunyan Department of Neurosurgery First Affiliated Hospital Medical School Xi 'an Jiaotong University Xi'an 710061 China Department of Gynecology and Obstetrics Second Affiliated Hospital Medical School Xi 'an Jiaotong University Xi 'an 710004 China

Objective:To investigate the vasculogenic mimicry formation induced by hypoxia in Ⅱ-Ⅲ human glioma cell and the effect of alphastatin peptide suppressing the hypoxia-induced vasculogenic mimicry formation and the ***:MTT,Transwell and three-dimentional culture were used to detect the proliferation,migration and tubule formation of *** expression of vascular endothelial growth factor-α(VEGF-α),erythropoietin-producing hepatocellular carcinoma-A2 (EphA2) and matrix metalloproteinases 2 (MMP2) was detected by RT-PCR and Western blotting ***:The OD 490 in hypoxia group was 0.60±0.06 and in control group was 0.46±*** number of cell migration was 178.71±18.81 in hypoxia group and 85.86±17.92 in control *** tubule formation was 56.80±12.21 in hypoxia group and 4.20±2.62 in control *** proliferation,migration and tubule formation in hypoxia group were significantly higher than that in control *** expression of VEGF-α,EphA2 and MMP2 was upregulated in *** various concentrations of alphastatin (100,1 000,10 000 nmol/L) were added to hypoxia group,the numbers of cell migration were 142.57±12.12,92.71±17.68,30.00±7.72 and the tubule formation were 47.71±10.58,18.86±8.40,8.43±*** cell migration and tubule formation were significantly suppressed by alphastatin in a dose-dependent *** alphastatin group,the phosphorylation of EphA2 protein (P=0.037,F=4.629) and activation of MMP2 protein (P=0.005,F=9.331) were significantly suppressed but there was no change in VEGF-α ***:Ⅱ-Ⅲ human glioma cell is able to form vasculogenic mimicry induced by hypoxia and alphastatin peptide can suppress the hypoxia-induced vasculogenic ***-α induced EphA2 phospharilation and MMP2 activation maybe the key pathway to form vasculogenic mimicry.

关键词： Hypoxia Ⅱ-Ⅲ grade glioma Vasculogenic mimicry alphastatin Mechanism

肿瘤血管抑制肽alphastatin基因克隆及序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华神经外科疾病研究杂志 2007年第5期6卷 432-435页

作者：郭世文杨广笑李涛王东峰廉民学鲍刚西安交通大学医学院第一附属医院神经外科陕西西安710061 西安华广生物工程有限公司陕西西安710025

目的克隆获得编码具有生物学活性的肿瘤血管抑制肽alphastatin基因。方法采用非对称引物/模板法,依据基因库提供的alphastatin基因序列,设计合成alphastatin基因的引物/模板链,利用聚合酶链反应(PCR)法,从DNA中扩增出人肿瘤血管抑制肽al... 详细信息

目的克隆获得编码具有生物学活性的肿瘤血管抑制肽alphastatin基因。方法采用非对称引物/模板法,依据基因库提供的alphastatin基因序列,设计合成alphastatin基因的引物/模板链,利用聚合酶链反应(PCR)法,从DNA中扩增出人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因片段;将获得的基因片段插入质粒载体pGEM-TEasy中,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒。结果经质粒DNA酶切分析及序列测定,获得了人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因片段序列。结论首次体外克隆获得了人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因,为肿瘤血管抑制肽alphastatin的基因治疗奠定了基础。

关键词： alphastatin 血管抑制肽基因克隆聚合酶链反应

肿瘤血管抑制肽alphastatin重组腺伴随病毒的制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华神经外科疾病研究杂志 2006年第6期5卷 518-521页

作者：郭世文杨宇王全颖廉民学李涛王东峰西安交通大学医学院第一附属医院神经外科陕西西安710061 吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 西安华广生物工程有限公司陕西西安710025

目的构建并产生肿瘤血管抑制肽alphastatin(Al)重组腺伴随病毒(rAAV)载体。方法将目的基因alphastatin插入载体质粒pSSHG-巨细胞病毒(CMV)的EcoRI和BamHI位点,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-Al。用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,... 详细信息

目的构建并产生肿瘤血管抑制肽alphastatin(Al)重组腺伴随病毒(rAAV)载体。方法将目的基因alphastatin插入载体质粒pSSHG-巨细胞病毒(CMV)的EcoRI和BamHI位点,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-Al。用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组腺伴随病毒载体质粒,使用三质粒共转染法转染293细胞,包装得到腺伴随病毒(AAV)-Al。采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀回收纯化,斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果重组病毒rAAV-Al滴度约为2×1012颗粒/ml。结论成功制备了重组病毒rAAV-Al,提供了一种生产足量安全的rAAV-Al简单易行的方法,为肿瘤的基因治疗实验奠定了基础。

关键词： alphastatin 腺伴随病毒斑点杂交

基于脂肪源性干细胞的alphastatin靶向载体的构建及其对胶质瘤干细胞血管拟态形成的抑制作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于脂肪源性干细胞的Alphastatin靶向载体的构建及其对胶质瘤干...