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TEA domain transcription factor 1(TEAD1)induces cardiac fibroblasts cells remodeling through BRD4/wnt4 pathway

Signal Transduction and Targeted Therapy 2024年第3期9卷 1209-1220页

作者： Shuai Song Xiaokai Zhang Zihang Huang Yongchao Zhao Shuyang Lu Linqi Zeng Fengze Cai Tongyao Wang Zhiqiang Pei Xinyu Weng Wei Luo Hao Lu Zilun Wei Jian Wu Peng Yu Li Shen Xiaochun Zhang Aijun Sun Junbo Ge Department of Cardiology Zhongshan HospitalFudan UniversityShanghai Institute of Cardiovascular DiseasesShanghaiChina State Key Laboratory of Cardiology Zhongshan HospitalFudan UniversityShanghaiChina Key Laboratory of Viral Heart Diseases National Health CommissionShanghaiChina Key Laboratory of Viral Heart Diseases Chinese Academy of Medical SciencesShanghaiChina National Clinical Research Center for Interventional Medicine ShanghaiChina Department of cardiac surgery Zhongshan HospitalFudan UniversityShanghaiChina Institutes of Biomedical Sciences Fudan UniversityShanghaiChina Shanghai Institute of Hypertension Ruijin HospitalShanghai Jiao Tong University School of MedicineShanghaiChina

Cardiac fibroblasts(CFs)are the primary cells tasked with depositing and remodeling collagen and significantly associated with heart failure(HF).TEAD1 has been shown to be essential for heart development and ***,fibroblast endogenous TEAD1 in cardiac remodeling remains incompletely *** analyses revealed consistently upregulated cardiac TEAD1 expression in mice 4 weeks after transverse aortic constriction(TAC)and Ang-l *** investigation revealed that CFs were the primary cell type expressing elevated TEAD1 levels in response to pressure *** TEAD1 knockout was achieved by crossing TEAD1-floxed mice with CFs-and myofibroblasts-specific Cre *** and histological analyses demonstrated that CFs-and myofibroblasts-specific TEAD1 deficiency and treatment with TEAD1 inhibitor,VT103,ameliorated TAC-induced cardiac ***,RNA-seq and ChiP-seq analysis identified wnt4 as a novel TEAD1 ***1 has been shown to promote the fibroblast-to-myofibroblast transition through the wnt signalling pathway,and genetic wnt4 knockdown inhibited the pro-transformation phenotype in CFs with TEAD1 ***,coimmunoprecipitation combined with mass spectrometry,chromatin immunoprecipitation,and luciferase assays demonstrated interaction between TEAD1 and BET protein BRD4,leading to the binding and activation of the wnt4 *** conclusion,TEAD1 is an essential regulator of the pro-fibrotic CFs phenotype associated with pathological cardiac remodeling via the BRD4/wnt4 signallingpathway.

关键词： TEAD1 expression wnt4

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wnt4重组蛋白对炎症状态下成骨细胞的影响

Wnt4重组蛋白对炎症状态下成骨细胞的影响

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作者：周伯阳大连医科大学

学位级别：硕士

目的通过建立体外炎性环境,分组对比研究wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,观察炎性状态下,成骨细胞在钛片上的黏附、伸展情况,探讨wnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用以及对成骨细胞在钛表面黏附... 详细信息

目的通过建立体外炎性环境,分组对比研究wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,观察炎性状态下,成骨细胞在钛片上的黏附、伸展情况,探讨wnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用以及对成骨细胞在钛表面黏附的影响,为临床上种植体周围炎治疗提供一种理论依据和实验数据。方法1、酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,结合差速贴壁法纯化细胞。通过形态学观察、生物学行为及成骨能力对其进行鉴定。2、通过CCK8法检测不同浓度LPS、wnt4重组蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化的影响,设计浓度梯度,根据检测结果及形态学观察确定所需的最适浓度,为后续实验提供依据。3、体外成骨诱导培养,按是否添加LPS、wnt4重组蛋白分为四组:(1)对照组:成骨诱导液培养,(2)LPS组:成骨诱导液添加LPS(1μg/ml)培养,(3)wnt4组:成骨诱导液添加wnt4重组蛋白(0.05μg/ml)培养,(4)LPS+wnt4组:成骨诱导液添加LPS(1μg/ml)、wnt4重组蛋白(0.05μg/ml)培养。培养3、6、9天后,分别提取m RNA应用RT-PCR法检测BGLAP、Col I及Runx2的相对表达量;培养7天后比较碱性磷酸酶活性。培养21天后应用茜素红染色法比较细胞矿化能力。扫描电镜比较观察钛片表面成骨细胞黏附能力。结果1、通过酶消化法从小鼠颅骨成功提取出成骨细胞。细胞形态呈长梭型、纺锤型或不规则多边形,胞浆丰富,细胞核呈卵圆形,核仁明显。在体外行成骨诱导培养14天、21后,成骨细胞可分泌碱性磷酸酶并生成矿化结节及钙盐沉积。结果证明我们提取的细胞具有成骨分化的能力,为成骨细胞。2、细胞形态学观察及CCK8法检测不同浓度LPS及wnt4重组蛋白对成骨细胞增殖的影响,结果显示在LPS刺激下各实验组CCK8数值均小于对照组,差异显著具有统计学意义(p﹤0.05),且随着LPS浓度增强,抑制作用也随之增强。而在wnt4重组蛋白刺激下,0.05μg/ml wnt4重组蛋白组CCK8数值大于对照组,差异具有统计学意义(p﹤0.05),对成骨细胞增殖呈促进作用。当wnt4重组蛋白浓度大于0.1μg/ml时,CCK8数值小于对照组,对成骨细胞增殖呈抑制作用,并随着浓度增大抑制作用有增高的趋势,在2μg/ml wnt4重组蛋白浓度下,成骨细胞几乎全部死亡。3、经过分组培养7天后,与LPS组相比,LPS+wnt4组碱性磷酸酶活性明显升高(LPS组:166.23±32.52 LPS+wnt4组:436.48±41.73),差异具有统计学意义(p﹤0.05)。第21天的茜素红染色结果表明LPS+wnt4组矿化能力高于LPS组且差异具有统计学意义(LPS组:5.23±2.41 LPS+wnt4组:18.33±8.85,p﹤0.05)。4、分组培养3、6、9天后应用RT-PCR测定成骨相关基因(BGLAP、COL-I、Runx2)m RNA的表达量,其中wnt4组中各基因相对表达量均高于其他组,第3、6天差异具有统计学意义(p﹤0.05)。LPS组各基因相对表达量均小于其他组且具有统计学意义(p﹤0.05)。COL-I目的基因相对表达量,wnt4组均高于其他各组,且数据具有统计学意义(p﹤0.05),在6、9天时LPS+wnt4组基因表达量高于对照组。而LPS+wnt4组、wnt4组Rnux2目的基因三个时间段的表达量均高于其他组且具有统计学意义(p﹤0.05)。5、SEM观察显示,wnt4组钛片上成骨细胞伸展形态好于其他各组,伪足数目及长度优于其他组。LPS组钛片上成骨细胞伸展最差且几乎没有伪足伸展。LPS+wnt4组钛片上成骨细胞黏附形态与对照组相近。结论本实验通过提取小鼠原代成骨细胞,分组对比研究不同浓度的wnt4在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,揭示0.05μg/m Lwnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用,为临床治疗种植体周围炎提供一种新的思路。

关键词：成骨细胞种植体周围炎 wnt4 脂多糖增殖

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wnt4对于口腔黏膜瘢痕中肌成纤维细胞的逆转作用研究

Wnt4对于口腔黏膜瘢痕中肌成纤维细胞的逆转作用研究

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作者：田文丽宁夏医科大学

学位级别：硕士

果蝇无翅基因与小鼠int同源基因四(Wingless Integrated four,wnt4)信号的异常激活已在伤口愈合过程和纤维化疾病的发病机制中得到证实,wnt4被明确确定在肾、肺和肝纤维化的发病机制中具有关键作用。转化生长因子-β1(Transforming grow... 详细信息

果蝇无翅基因与小鼠int同源基因四(Wingless Integrated four,wnt4)信号的异常激活已在伤口愈合过程和纤维化疾病的发病机制中得到证实,wnt4被明确确定在肾、肺和肝纤维化的发病机制中具有关键作用。转化生长因子-β1(Transforming growth factor-beta1,TGF-β1)能直接促进组织中成纤维细胞wnt4的表达。然而,wnt4在TGF-β1诱导的口腔黏膜肌成纤维细胞(Myofibroblasts,MGF)的转化和增生性瘢痕形成中的具体作用仍不清楚。目的:本实验通过体外模拟牙龈瘢痕的形成,探讨wnt4对牙龈肌成纤维细胞分化的抑制作用,可能提供了一种治疗和预防口内黏膜瘢痕的新治疗策略。方法:取正常口内牙龈组织及口内咀嚼黏膜瘢痕组织,提取RNA,q RT-PCR检测正常口内软组织及口内咀嚼黏膜瘢痕组织中wnt4及α-SMA的含量比较;组织块培养法获取人牙龈成纤维细胞(Gingival fibroblast,GF)并采用免疫荧光法及扫描电镜鉴定细胞性质;TGF-β1诱导建立人牙龈肌成纤维细胞过表达模型以模拟瘢痕组织,分3组,即对照组,TGF-β1组,TGF-β1+wnt4抑制剂组,通过RT-PCR及WB方法检测α-SMA表达情况并探索wnt4少量表达对MGF分化的影响;筛选出干扰效率最高的wnt4si-RNA组,通过RT-PCR及WB方法检测α-SMA表达情况并探索wnt4不表达对MGF分化的影响以探索肌成纤维细胞的去分化能力,以上试验数据分析使用Graph Pad8.0软件系统完成处理;结果:正常口内牙龈组织及口内咀嚼黏膜瘢痕组织相比,瘢痕组织胞内wnt4及α-SMA含量较正常组织高;组织块培养5～8 d时,细胞以放射形的方式从组织块中游离出来,15天后,大约90%的细胞覆盖了整个容器的底部,扫描电镜下,细胞胞体大,多为星形或梭形,免疫荧光实验显示细胞抗波形蛋白及α-SMA阳性。wnt4抑制剂及wnt4 si-RNA作用于MGF过表达模型后,RT-PCR及WB示:与对照组相比,经TGF-β1诱导后建立的MGF过分化模型其α-SMA基因的表达水平显著上调(Pwnt4抑制剂及wnt4 si-RNA处理的MGF过分化模型其α-SMA基因的表达水平不同程度被抑制(Pwnt4及α-SMA表达量较正常粘膜组织高,组织块培养法可获得充足的细胞可验证为GF,TGF-β1可诱导MGF分化模型以模拟瘢痕形成,而wnt4可抑制由TGF-β1诱导的MGF的分化,且可降低MGF的收缩活性。

关键词：牙龈成纤维细胞牙龈肌成纤维细胞 wnt4 TGF-β1 α-SMA

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WYC-209下调wnt4基因通过wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞恶性表型的机制研究

WYC-209下调WNT4基因通过Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞恶性表...

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作者：林文发浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的本课题致力于对WYC-209在wnt/β-catenin信号通路中发挥抑制胃癌细胞恶性表型的机制进行研究,为WYC-209在抑制胃癌的作用提供理论基础,并且为合成类维甲酸在临床的应用上提供新思路。方法本研究采用MTT、Transwell和细胞克隆形成... 详细信息

目的本课题致力于对WYC-209在wnt/β-catenin信号通路中发挥抑制胃癌细胞恶性表型的机制进行研究,为WYC-209在抑制胃癌的作用提供理论基础,并且为合成类维甲酸在临床的应用上提供新思路。方法本研究采用MTT、Transwell和细胞克隆形成实验探究WYC-209对胃癌细胞的毒性、对胃癌细胞迁移侵袭和增殖能力等恶性表型的影响。利用qRT-PCR和Western Blotting实验探究WYC-209对胃癌细胞上皮间充质转化和信号通路相关蛋白表达水平的影响。同时使用高通量测序对经WYC-209处理后的HGC-27细胞基因进行相关mRNA表达差异分析,并对差异基因、通路进行进一步分析。提取经WYC-209处理后HGC-27细胞的总蛋白,利用qRT-PCR验证根据文献和数据库挑选的9个差异基因选择最可能相关基因蛋白——wnt4基因,并且进行Western Blotting试验验证上述结果。以HGC-27胃癌细胞株为模型,利用wnt4过表达质粒以及后续Transwell、MTT和细胞克隆形成等实验探究wnt4对胃癌细胞恶性表型的回复作用,进而验证WYC-209通过抑制wnt4的表达影响wnt/β-catenin信号通路的激活,并最终抑制胃恶性肿瘤生物学行为的假说。结果胃癌细胞经WYC-209处理后,胃癌细胞的增殖能力、侵袭转移能力显著减弱。与对照组相比,WYC-209处理组的HGC-27和AGS细胞在qRT-PCR和 Western Blotting 实验结果中提示 E-cadherin 表达上调,N-cadherin、Vimentin、Snail表达下调。后续实验中,通过高通量RNA测序以及qRT-PCR验证测序结果,发现wnt4的测序趋势与PCR验证趋势一致,经Western Blotting实验验证,提示WYC-209能够通过抑制wnt4蛋白表达、影响wnt/β-catenin信号通路的激活从而抑制胃癌细胞的恶性表型。使用wnt4转染质粒联合WYC-209组以及单纯WYC-209组的胃癌细胞进行细胞功能以及机制的挽救实验中表示,过表达wnt4能够消除WYC-209处理后对细胞增殖能力、迁移侵袭能力的抑制作用。结论综上实验表明,WYC-209能够通过抑制wnt4在wnt/β-catenin信号通路中的表达,从而抑制胃癌细胞的恶性表型,延缓胃癌进展。本研究证明,WYC-209对胃癌的抑制作用理论基础进一步被完善,为WYC-209在胃癌的临床应用提供证据。

关键词：胃癌维甲酸药物 WYC-209 wnt/β-catenin信号通路 wnt4

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山羊多羔性状相关基因wnt4可变剪接体鉴定及功能分析

山羊多羔性状相关基因WNT4可变剪接体鉴定及功能分析

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作者：王鹏河北工程大学

学位级别：硕士

wnt家族成员4(wnt family member 4,wnt4)是wnt蛋白家族重要成员之一,参与多种细胞的生长和分化,在胚胎发育和维持细胞稳态过程中起重要作用。研究发现山羊中存在wnt4可变剪接,但wnt4可变剪接在山羊卵巢中的表达及作用机制尚未报道。本... 详细信息

wnt家族成员4(wnt family member 4,wnt4)是wnt蛋白家族重要成员之一,参与多种细胞的生长和分化,在胚胎发育和维持细胞稳态过程中起重要作用。研究发现山羊中存在wnt4可变剪接,但wnt4可变剪接在山羊卵巢中的表达及作用机制尚未报道。本研究从高产组(平均产羔数为3.00±0.38/只)和低产组(平均产羔数为1.32±0.19/只)2个群体中分别挑选5只处于卵泡期和5只处于黄体期的云上黑山羊,共20只。屠宰并收集山羊卵巢等组织用于后续试验。本研究对云上黑山羊群体中的wnt4可变剪接体进行鉴定;通过体外培养山羊颗粒细胞,过表达/干扰wnt4不同可变剪接体,解析wnt4可变剪接体对颗粒细胞增殖的分子机制。主要研究结果如下:1.在云上黑山羊卵巢组织中成功克隆出wnt4的2个可变剪接体wnt4-α和wnt4-β。结果表明,wnt4-α和wnt4-β的CDS区全长分别为1055 bp和986 bp,编码350和317个氨基酸;蛋白质二级结构和三级结构预测表明,wnt4-β与wnt4-α相比蛋白质结构发生了改变,wnt4-α的三级结构更稳定;在高产云上黑山羊卵巢中wnt4-α和wnt4-β的表达水平均显著高于低产云上黑山羊(Pwnt4-α的表达水平显著高于wnt4-β(Pwnt4不同剪接体对山羊颗粒细胞增殖的影响。免疫荧光(IF)结果显示,wnt4蛋白在山羊颗粒细胞中高度表达,且wnt4-α的表达水平显著高于wnt4-β(Pwnt4-α和wnt4-β,结果显示过表达wnt4-α和wnt4-β均能够显著增加细胞增殖标志基因重组人细胞周期蛋白D2和重组人细胞周期蛋白依赖激酶4的表达(Pwnt4-α和wnt4-β均显著促进颗粒细胞增殖(Pwnt4的2个可变剪接体wnt4-α和wnt4-β对山羊颗粒细胞增殖均起促进作用,且wnt4-α产生的作用显著高于wnt4-β(Pwnt4后检测了wnt信号通路标记基因RAC家族小型GTP酶与RAS同系物家族成员A的m RNA表达及关键信号因子β-catenin的蛋白水平。结果表明,过表达wnt4后wnt信号通路相关的RAC1与RHOA基因表达量和关键因子β-连环蛋白水平显著升高(Pwnt4可通过wnt/β-catenin信号通路调控山羊颗粒细胞增殖。3.探究富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子6在wnt4可变剪接产生过程中的作用和对颗粒细胞增殖的影响。本试验发现SRSF6的表达水平显著高于其他剪接因子(Pwnt4野生型载体共转染后荧光素酶活性显著升高(Pwnt4-α可变剪接体的m RNA和蛋白表达水平显著降低(Pwnt4-β可变剪接体的m RNA和蛋白表达水平显著升高(P4基因的表达水平显著下降(Pwnt4可变剪接的产生,并对颗粒细胞增殖起抑制作用。综上,本研究在云上黑山羊群体中鉴定出wnt4有2个可变剪接体,并对wnt4不同可变剪接体对颗粒细胞的影响及可变剪接产生的机制进行了探究。本研究为深入解析wnt4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。

关键词：云上黑山羊颗粒细胞增殖可变剪接 wnt4 SRSF6

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喉癌中STAT1经wnt4促进肿瘤相关成纤维细胞自噬的分子机制研究

喉癌中STAT1经WNT4促进肿瘤相关成纤维细胞自噬的分子机制研究

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作者：克丽颜中国医科大学

学位级别：硕士

前言:喉癌既是头颈部常见的恶性肿瘤,也是呼吸道常见的恶性肿瘤,主要类型为鳞状细胞癌。大多数喉癌患者确诊时已处于癌症晚期,常行全喉切除术,术后伴有喉功能缺陷,严重影响患者的身心健康,且患者生存率较低。尽管喉癌相关研究已取得一... 详细信息

前言:喉癌既是头颈部常见的恶性肿瘤,也是呼吸道常见的恶性肿瘤,主要类型为鳞状细胞癌。大多数喉癌患者确诊时已处于癌症晚期,常行全喉切除术,术后伴有喉功能缺陷,严重影响患者的身心健康,且患者生存率较低。尽管喉癌相关研究已取得一定进展,但致其发病的具体分子机制仍不十分明确。因此,研究喉癌的发生发展分子机制,寻找更为有效的分子靶标,对于喉癌患者的早期诊断和治疗等有重大意义。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)在肿瘤进程中发挥重要作用。TME主要由细胞外基质和基质细胞(包括成纤维细胞、血管内皮细胞、免疫细胞、间充质干细胞、脂肪细胞等)组成。其中,肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是最丰富的肿瘤基质细胞。在TME中,被激活的CAFs在肿瘤发生发展过程中具有重要作用。本课题组前期喉癌组织单细胞测序结果表明,喉癌上皮细胞与CAFs互作最为密切且特异性最强。因此,研究喉癌肿瘤微环境中CAFs与喉癌细胞间的相互作用有助于评价CAFs在喉癌发生发展中的作用。自噬是一种支持营养和代谢循环的多步骤溶酶体降解途径,在调节肿瘤进程中发挥重要作用。研究表明,在头颈部肿瘤(head and neck carcinoma,HNSC)中CAFs与源自相同解剖位置的正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)相比,拥有更高的自噬水平。我们在前期研究中也发现,喉癌组织中CAFs的自噬水平显著上调。因此,我们推测CAFs自噬在喉癌微环境重塑中起重要作用,可能与喉癌的增殖、侵袭和转移等密切相关。信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)作为第一个被发现的STAT蛋白质家族成员,是细胞内重要的信号转导因子,与肿瘤的发生发展密切相关。我们重分析本课题组前期喉癌单细胞测序数据,发现STAT1在喉癌组织上皮细胞中显著高表达,处于表达谱的核心位置,与多种因子关联并发挥不同的功能。通过TCGA数据库分析,我们还发现STAT1在HNSC中的基因表达水平也显著高于正常组织。可见,STAT1是喉癌发生发展中的重要因子,因此,我们围绕STAT1着手开展研究工作。无翅型MMTV整合位点家族(wingless-type MMTV integration site family,wnt)是一类分泌型糖蛋白家族,由19个保守基因组成,通过自分泌或旁分泌发挥作用,与包括喉癌在内的人类肿瘤发生和转移密切相关。本课题组前期喉癌单细胞测序结果表明,喉癌上皮源性细胞与CAFs之间配体-受体对数量最多,其中wnt4/FZD1特异性较强。通过h TFtarget网站分析,我们发现STAT1下游靶基因中包括wnt家族成员,且wnt信号通路与细胞自噬密切相关。通过JASPAR软件预测,我们发现wnt4启动子区可能存在STAT1结合位点。综上,我们推测在喉癌细胞中STAT1转录调控wnt4的表达,wnt4自分泌至喉癌微环境中,与CAFs表面受体FZD1相互作用,通过wnt信号通路引起CAFs自噬的发生,类似的研究未见报道。材料与方法:1、实验材料:人喉癌组织及相应癌旁组织、人喉癌细胞系TU212、人喉癌组织原代细胞CAFs、NFs以及人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B。2、实验方法:(1)细胞培养:培养人喉癌细胞TU212、人喉癌组织原代细胞CAFs、NFs,人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B。(2)基因瞬时转染:转染STAT1过表达质粒、si wnt4至TU212细胞中,用于后续基因功能研究。(3)CRISPR/cas9技术:用于建立STAT1稳转敲除TU212细胞系。(4)实时荧光定量PCR(q-PCR):用于检测TU212和CAFs细胞中STAT1、wnt4、FZD1、EPCAM、FAP、LC3、ATG5的mRNA水平表达。(5)免疫印迹(WB):用于检测TU212、CAFs及NFs细胞中STAT1、wnt4、EPCAM、FAP、LC3、P62、ATG5、ATG7、β-ACTIN、α-TUBULIN的蛋白水平表达。(6)条件培养:用于后续检测喉癌细胞分泌的wnt4对CAFs自噬的影响。(7)免疫组织化学技术(IHC):用于检测人喉癌组织及其癌旁组织中STAT1和wnt4的蛋白表达水平。(8)免疫荧光化学技术(IF):用于检测CAFs中LC3的蛋白定位和表达水平。(9)免疫共沉淀(co-IP):用于检测wnt4与FZD1在CAFs中的相互作用。(10)染色质免疫共沉淀(Ch IP):用于检测STAT1与wnt4启动子区结合情况。(11)酶联免疫吸附试验(ELISA):用于检测wnt4在TU212上清中的分泌情况。

关键词：喉癌肿瘤相关成纤维细胞 STAT1 wnt4 自噬

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CHI3L1通过上调wnt4表达引起大肠癌细胞辐射抵抗的机制研究

CHI3L1通过上调Wnt4表达引起大肠癌细胞辐射抵抗的机制研究

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作者：金铭宁波大学

学位级别：硕士

背景:大肠癌包括结肠癌和直肠癌,是全球范围内常见的消化道恶性肿瘤。我国直肠癌发病率较高,且大部分直肠癌患者在初诊时已是局部晚期和晚期。放射治疗是局晚和晚期直肠癌综合治疗的重要组成部分,但有相当一部分患者对放射治疗不敏感,... 详细信息

背景:大肠癌包括结肠癌和直肠癌,是全球范围内常见的消化道恶性肿瘤。我国直肠癌发病率较高,且大部分直肠癌患者在初诊时已是局部晚期和晚期。放射治疗是局晚和晚期直肠癌综合治疗的重要组成部分,但有相当一部分患者对放射治疗不敏感,治疗疗效不佳。研究发现,CHI3L1与多种恶性肿瘤的不良预后密切相关。本课题拟探讨CHI3L1在大肠癌细胞辐射抵抗中的作用及分子机制。材料和方法:1.通过TCGA数据库及大肠癌组织标本免疫组化分析CHI3L1在大肠癌组织和癌旁组织中的差异表达情况。2.构建慢病毒质粒并转染细胞,获得CHI3L1过表达大肠癌细胞株。3.不同剂量辐射后,克隆形成实验研究CHI3L1过表达对大肠癌细胞克隆形成能力的影响。采用免疫荧光实验、细胞凋亡实验、细胞周期实验检测辐射对不同CHI3L1表达大肠癌细胞增殖及凋亡的影响。4.通过蛋白质印迹实验探索并验证CHI3L1调控大肠癌细胞辐射抵抗的分子机制。结果:***数据库分析显示,CHI3L1在大肠癌组织中表达显著高于癌旁组织。2.不同剂量辐射后,CHI3L1过表达大肠癌细胞组的克隆形成数明显高于野生细胞组。CHI3L1过表达细胞组辐射后细胞核破坏比例较野生细胞组少,辐射后CHI3L1过表达组的细胞坏死比例显著低于野生细胞组。此外,辐射抑制大肠癌细胞的增殖,引起大肠癌细胞G2/M期阻滞,与野生细胞组相比,CHI3L1过表达细胞组增殖期细胞减少的比例显著降低,并且G2/M期细胞占比减少,G0/G1期细胞占比增加。3.蛋白质印迹实验显示,大肠癌细胞中过表达CHI3L1伴随着wnt4表达的显著上调,不同剂量辐射后,CHI3L1和wnt4的表达水平均明显上升,且CHI3L1过表达细胞组增加的幅度较野生细胞组更显著;回复实验表明,与对照组相比,wnt4敲低组细胞经辐射后克隆形成数明显下降,表明CHI3L1通过上调wnt4表达参与大肠癌细胞辐射抵抗。结论:***3L1过表达可以减少辐射引起的大肠癌细胞坏死,减弱辐射导致的增殖抑制和G2/M期阻滞。***3L1通过上调wnt4表达引起大肠癌细胞辐射抵抗。

关键词： CHI3L1 辐射抵抗克隆形成大肠癌 wnt4

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wnt4基因沉默对PAX2诱导肾小管上皮细胞间充质转分化的影响

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吉林大学学报（医学版） 2013年第4期39卷 720-725,I0002,I0003页

作者：李里南晓娟吴玉斌中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科辽宁沈阳110004 辽宁医学院附属第一医院儿科辽宁锦州121000

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对wnt4通路的激活作用及wnt4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。... 详细信息

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对wnt4通路的激活作用及wnt4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组。Western blotting法和实时荧光定量(Real-time)PCR法检测各组细胞wnt4和β-catenin表达。应用靶向wnt4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的wnt4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链。将最佳干扰链wnt4siRNA转染至稳定转染PAX2细胞。在沉默24、48、72和96h应用Westernblotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点。应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达。结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组wnt4和β-catenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P4h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46%±4.48%。3条wnt4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,wnt4mRNA表达抑制率为66.9%±3.8%(Pwnt4蛋白表达抑制率为63.7%±2.5%(P4、48、72和96h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72h组下调明显(Pwnt4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能是通过wnt4/β-catenin通路完成。

关键词： wnt4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞转分化 RNA干扰

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厚壳贻贝wnt4基因时空表达

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水产学报 2016年第10期40卷 1567-1575页

作者：徐跃峰李一峰梁箫陈芋如杨金龙上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海海洋大学海洋科学研究院

为探究wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段和组织生长过程中的作用,通过RACE技术克隆了厚壳贻贝wnt4基因c DNA全长序列,该序列全长3342 bp,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。该序列与人、小鼠、海胆、栉孔扇贝和长牡蛎等物种的同源性... 详细信息

为探究wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段和组织生长过程中的作用,通过RACE技术克隆了厚壳贻贝wnt4基因c DNA全长序列,该序列全长3342 bp,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。该序列与人、小鼠、海胆、栉孔扇贝和长牡蛎等物种的同源性分别为61%、61%、60%、71%和76%。通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析wnt4基因在厚壳贻贝成体多个组织中(外套膜、闭壳肌、鳃、雌雄性腺、足和消化腺)均有表达,其中在外套膜中表达量最高,推测可能与贝壳形成有关;wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段高表达主要集中在壳顶期,并推测wnt4基因可能参与了贝壳形态结构发生转变的过程以及某些器官的形成与发育。本研究为进一步开展双壳贝类wnt基因家族的功能研究提供了理论依据。

关键词：厚壳贻贝 wnt4 基因克隆表达分析

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自主跑轮运动上调成年小鼠海马齿状回区细胞增殖及BDNF、IGF1和wnt4的表达水平

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生理学报 2014年第5期66卷 559-568页

作者：俞嘉玲马黎马兰陶冶铮复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室药理研究中心脑科学研究院上海200032

成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用。外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程。自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚。本研究采用跑轮实验这种... 详细信息

成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用。外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程。自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚。本研究采用跑轮实验这种啮齿动物自主运动模型,使两月龄的C57BL/6成年小鼠跑轮15天后,用BrdU掺入实验观察海马齿状回区的细胞增殖情况。采用逆转录实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马齿状回区、阿蒙角区和皮层区成年神经发生相关因子的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,自主跑轮运动15天后的成年小鼠海马齿状回区增殖细胞数目显著上调;齿状回区Bdnf、Igf1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,wnt4的mRNA表达水平显著升高,提示15天自主运动可能通过特异地增加海马齿状回区BDNF、IGF1和wnt4的表达产生上调成年海马神经发生的作用。

关键词：自主运动成年海马神经发生 BDNF IGF1 wnt4

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