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wnt4 increases the thickness of the epidermis in burn wounds by activating canonical wnt signalling and decreasing the cell junctions between epidermal cells

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Burns & Trauma 2023年第1期11卷 46-61页

作者： Fei Xiang Pei Wang Hao Gong Jia Luo Xin Zhou Chenglin Zhan Tianxing Hu Mengru Wang Yizhan Xing Haiying Guo Gaoxing Luo Yuhong Li Institute of Burn Research State Key Laboratory of TraumaBurns and Combined InjurySouthwest HospitalArmy Medical UniversityChongqing 400038PR China Department of Cell Biology Army Medical UniversityChongqing 400038PR China

Background:Burn wound healing is a complex process and the role of wnt ligands varies in this *** and how wnt4 functions in burn wound healing is not well *** this study,we aim to reveal the effects and potential mechanisms of wnt4 in burn wound ***:First,the expression of wnt4 during burn wound healing was determined by immunoflu-orescence,Western blotting and ***,wnt4 was overexpressed in burn *** healing rate and healing quality were analysed by gross photography and haematoxyline and eosin *** secretion was observed by Masson *** formation and fibroblast distribution were observed by ***,wnt4 was knocked down in HaCaT *** migration of HaCaT cells was analysed by scratch healing and transwell ***,the expression ofβ-catenin was detected by Western blotting and *** binding of Frizzled2 and wnt4 was detected by coimmunoprecipitation and ***,the molecular changes induced by wnt4 were analysed by RNA sequencing,immunofluorescence,Western blotting and qPCR in HaCaT cells and burn wound healing ***:The expression of wnt4 was enhanced in burn wound *** of wnt4 in burn wound skin increased the thickness of *** secretion,vessel formation and fibroblast distribution were not significantly impacted by wnt4 *** wnt4 was knocked down in HaCaT cells,the ratio of proliferating cells decreased,the ratio of apoptotic cells increased and the ratio of the healing area in the scratch healing assay to the number of migrated cells in the transwell assay *** nuclear translocation ofβ-catenin decreased in shRNA of wnt4 mediated by lentivirus-treated HaCaT cells and increased in wnt4-overexpressing epidermal ***-sequencing analysis revealed that cell junction-related signalling pathways were significantly impacted by wnt4 *** expression of the cell junction prote

关键词： wnt4 wnt signalling pathway Burn wound healing Cell junction Cell migration

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TEA domain transcription factor 1(TEAD1)induces cardiac fibroblasts cells remodeling through BRD4/wnt4 pathway

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Signal Transduction and Targeted Therapy 2024年第3期9卷 1209-1220页

作者： Shuai Song Xiaokai Zhang Zihang Huang Yongchao Zhao Shuyang Lu Linqi Zeng Fengze Cai Tongyao Wang Zhiqiang Pei Xinyu Weng Wei Luo Hao Lu Zilun Wei Jian Wu Peng Yu Li Shen Xiaochun Zhang Aijun Sun Junbo Ge Department of Cardiology Zhongshan HospitalFudan UniversityShanghai Institute of Cardiovascular DiseasesShanghaiChina State Key Laboratory of Cardiology Zhongshan HospitalFudan UniversityShanghaiChina Key Laboratory of Viral Heart Diseases National Health CommissionShanghaiChina Key Laboratory of Viral Heart Diseases Chinese Academy of Medical SciencesShanghaiChina National Clinical Research Center for Interventional Medicine ShanghaiChina Department of cardiac surgery Zhongshan HospitalFudan UniversityShanghaiChina Institutes of Biomedical Sciences Fudan UniversityShanghaiChina Shanghai Institute of Hypertension Ruijin HospitalShanghai Jiao Tong University School of MedicineShanghaiChina

Cardiac fibroblasts(CFs)are the primary cells tasked with depositing and remodeling collagen and significantly associated with heart failure(HF).TEAD1 has been shown to be essential for heart development and ***,fibroblast endogenous TEAD1 in cardiac remodeling remains incompletely *** analyses revealed consistently upregulated cardiac TEAD1 expression in mice 4 weeks after transverse aortic constriction(TAC)and Ang-l *** investigation revealed that CFs were the primary cell type expressing elevated TEAD1 levels in response to pressure *** TEAD1 knockout was achieved by crossing TEAD1-floxed mice with CFs-and myofibroblasts-specific Cre *** and histological analyses demonstrated that CFs-and myofibroblasts-specific TEAD1 deficiency and treatment with TEAD1 inhibitor,VT103,ameliorated TAC-induced cardiac ***,RNA-seq and ChiP-seq analysis identified wnt4 as a novel TEAD1 ***1 has been shown to promote the fibroblast-to-myofibroblast transition through the wnt signalling pathway,and genetic wnt4 knockdown inhibited the pro-transformation phenotype in CFs with TEAD1 ***,coimmunoprecipitation combined with mass spectrometry,chromatin immunoprecipitation,and luciferase assays demonstrated interaction between TEAD1 and BET protein BRD4,leading to the binding and activation of the wnt4 *** conclusion,TEAD1 is an essential regulator of the pro-fibrotic CFs phenotype associated with pathological cardiac remodeling via the BRD4/wnt4 signallingpathway.

关键词： TEAD1 expression wnt4

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wnt4基因沉默对PAX2诱导肾小管上皮细胞间充质转分化的影响

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吉林大学学报（医学版） 2013年第4期39卷 720-725,I0002,I0003页

作者：李里南晓娟吴玉斌中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科辽宁沈阳110004 辽宁医学院附属第一医院儿科辽宁锦州121000

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对wnt4通路的激活作用及wnt4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。... 详细信息

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对wnt4通路的激活作用及wnt4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组。Western blotting法和实时荧光定量(Real-time)PCR法检测各组细胞wnt4和β-catenin表达。应用靶向wnt4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的wnt4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链。将最佳干扰链wnt4siRNA转染至稳定转染PAX2细胞。在沉默24、48、72和96h应用Westernblotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点。应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达。结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组wnt4和β-catenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P4h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46%±4.48%。3条wnt4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,wnt4mRNA表达抑制率为66.9%±3.8%(Pwnt4蛋白表达抑制率为63.7%±2.5%(P4、48、72和96h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72h组下调明显(Pwnt4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能是通过wnt4/β-catenin通路完成。

关键词： wnt4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞转分化 RNA干扰

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厚壳贻贝wnt4基因时空表达

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水产学报 2016年第10期40卷 1567-1575页

作者：徐跃峰李一峰梁箫陈芋如杨金龙上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海海洋大学海洋科学研究院

为探究wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段和组织生长过程中的作用,通过RACE技术克隆了厚壳贻贝wnt4基因c DNA全长序列,该序列全长3342 bp,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。该序列与人、小鼠、海胆、栉孔扇贝和长牡蛎等物种的同源性... 详细信息

为探究wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段和组织生长过程中的作用,通过RACE技术克隆了厚壳贻贝wnt4基因c DNA全长序列,该序列全长3342 bp,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。该序列与人、小鼠、海胆、栉孔扇贝和长牡蛎等物种的同源性分别为61%、61%、60%、71%和76%。通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析wnt4基因在厚壳贻贝成体多个组织中(外套膜、闭壳肌、鳃、雌雄性腺、足和消化腺)均有表达,其中在外套膜中表达量最高,推测可能与贝壳形成有关;wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段高表达主要集中在壳顶期,并推测wnt4基因可能参与了贝壳形态结构发生转变的过程以及某些器官的形成与发育。本研究为进一步开展双壳贝类wnt基因家族的功能研究提供了理论依据。

关键词：厚壳贻贝 wnt4 基因克隆表达分析

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自主跑轮运动上调成年小鼠海马齿状回区细胞增殖及BDNF、IGF1和wnt4的表达水平

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生理学报 2014年第5期66卷 559-568页

作者：俞嘉玲马黎马兰陶冶铮复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室药理研究中心脑科学研究院上海200032

成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用。外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程。自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚。本研究采用跑轮实验这种... 详细信息

成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用。外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程。自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚。本研究采用跑轮实验这种啮齿动物自主运动模型,使两月龄的C57BL/6成年小鼠跑轮15天后,用BrdU掺入实验观察海马齿状回区的细胞增殖情况。采用逆转录实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马齿状回区、阿蒙角区和皮层区成年神经发生相关因子的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,自主跑轮运动15天后的成年小鼠海马齿状回区增殖细胞数目显著上调;齿状回区Bdnf、Igf1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,wnt4的mRNA表达水平显著升高,提示15天自主运动可能通过特异地增加海马齿状回区BDNF、IGF1和wnt4的表达产生上调成年海马神经发生的作用。

关键词：自主运动成年海马神经发生 BDNF IGF1 wnt4

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中华鳖wnt4基因克隆及表达分析

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海洋渔业 2020年第6期42卷 711-721页

作者：张英萍凌晨王利华沙航邹桂伟胥焘罗相忠梁宏伟上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 中国水产科学研究院长江水产研究所武汉430223 上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 三峡大学生物与制药学院湖北宜昌443002

通过RACE技术成功获得中华鳖(Pelodiscus sinensis)wnt4基因的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR分析了该基因在不同组织、胚胎不同发育时期的表达特征以及wnt激动剂(wnt agonist 1)对其表达的影响。结果表明:中华鳖wnt4基因cDNA全长2... 详细信息

通过RACE技术成功获得中华鳖(Pelodiscus sinensis)wnt4基因的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR分析了该基因在不同组织、胚胎不同发育时期的表达特征以及wnt激动剂(wnt agonist 1)对其表达的影响。结果表明:中华鳖wnt4基因cDNA全长2432 bp,开放阅读框为1095 bp,编码364个氨基酸。中华鳖wnt4基因与海龟(Chelonia mydas)和三趾箱龟(Terrapene carolina triunguis)具有高度同源性。wnt4基因在雌雄个体性腺中表达量最高,且雌性卵巢中表达水平显著高于雄性精巢(P4~21期)雌雄性之间有明显的表达差异(Pwnt激动剂能上调wnt4基因的表达水平,此结果为中华鳖性别分化机制的研究提供了参考。

关键词：中华鳖 wnt4 基因克隆 wnt激动剂表达特征

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三角帆蚌中wnt4基因克隆及表达分析

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上海海洋大学学报 2020年第6期29卷 801-810页

作者：刘斐斐崔晓羽董赛赛段胜华汪桂玲李家乐上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学上海市水产养殖工程技术研究中心上海201306 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306

为进一步了解wnt4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌wnt4基因的全长cDNA,共1560 bp,其中5′-UTR 396 bp、3′-UTR 24 bp,开放阅读框(ORF)为1140 bp,可以编码379个氨基... 详细信息

为进一步了解wnt4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌wnt4基因的全长cDNA,共1560 bp,其中5′-UTR 396 bp、3′-UTR 24 bp,开放阅读框(ORF)为1140 bp,可以编码379个氨基酸,且该序列含有wnt家族特有结构域。对wnt4的氨基酸序列进行同源性分析后,发现该基因在物种间的进化关系和结构功能具保守性。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现wnt4基因在三角帆蚌雌雄多个组织(外套膜、闭壳肌、鳃、性腺、斧足和肝)中均有表达,表明其参与了多样的生物学过程,在鳃、斧足和肝中表达量较高,在性腺、闭壳肌和斧足中雌雄间有显著性差异,且雌性三角帆蚌的性腺、闭壳肌表达量显著高于雄性。原位杂交结果显示,wnt4在雌性三角帆蚌的卵母细胞上有明显的杂交信号,推测wnt4基因与性别决定相关。

关键词：三角帆蚌性别决定 wnt4 qRT-PCR 原位杂交

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栉江珧wnt4基因cDNA的克隆表达及调控

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中国水产科学 2016年第5期23卷 1041-1051页

作者：王昌勃李琪于瑞海孔令锋于红中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

本研究运用同源克隆技术和RACE技术克隆了栉江珧(Atrina pectinata)wnt4基因cDNA全长序列。该基因序列全长为1493 bp,其中开放阅读框1074 bp,编码由357个氨基酸组成的蛋白。氨基酸序列分析表明,栉江珧wnt4基因具有wnt家族保守结构域,与... 详细信息

本研究运用同源克隆技术和RACE技术克隆了栉江珧(Atrina pectinata)wnt4基因cDNA全长序列。该基因序列全长为1493 bp,其中开放阅读框1074 bp,编码由357个氨基酸组成的蛋白。氨基酸序列分析表明,栉江珧wnt4基因具有wnt家族保守结构域,与栉孔扇贝(Chlamys farreri)、海胆(Paracentrotus lividus)等物种具有高度的同源性。荧光定量PCR分析表明,wnt4基因表达具有广泛性和组织差异性,且与性别和性腺繁殖周期相关。wnt4基因表达量与性腺成熟度相关,并且整个繁殖周期卵巢表达量均显著高于精巢,说明wnt4基因参与了栉江珧两性性腺的发育,并在卵巢中发挥更重要的作用。不同发育阶段胚胎荧光定量分析表明,wnt4基因主要参与了栉江珧的早期胚胎发育。在胚胎发育早期(囊胚期和原肠期)wnt4基因的表达水平最高,是成体表达量的500倍;在担轮幼虫和D形幼虫期迅速下降,暗示wnt4基因可能在栉江珧早期发育阶段参与了某些器官的形成。17β-雌二醇诱导实验显示,17β-雌二醇可能通过反馈调节抑制卵巢wnt4基因表达(Pwnt4基因显著表达(P<0.05)。

关键词：栉江珧 wnt4 基因克隆 qRT-PCR 个体发育繁殖周期 17β-雌二醇

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麒麟鸡miRNA-1623与靶基因wnt4的靶标验证分析

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基因组学与应用生物学 2017年第3期36卷 847-853页

作者：李珊珊孙红梅张伟董振李春义杜炳旺广东海洋大学动物科学系湛江524088 中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室长春130000

麒麟鸡(frizzle chicken)是我国亚热带地区特有的一种具有卷羽特性的优质肉鸡品种。本课题组前期研究发现在麒麟鸡皮肤中高度表达miRNA-1623(miR-1623),因此推测其参与麒麟鸡毛囊发育及卷羽的形成过程。为研究其独特的毛囊发育及卷羽散... 详细信息

麒麟鸡(frizzle chicken)是我国亚热带地区特有的一种具有卷羽特性的优质肉鸡品种。本课题组前期研究发现在麒麟鸡皮肤中高度表达miRNA-1623(miR-1623),因此推测其参与麒麟鸡毛囊发育及卷羽的形成过程。为研究其独特的毛囊发育及卷羽散热机制,本研究利用生物信息学手段根据其靶标结合位点寻找到其潜在靶标wnt4基因,并利用qRT-PCR对卷羽麒麟鸡和片羽怀乡鸡中的miR-1623与wnt4的表达水平进行了检测。进一步通过构建双荧光素酶报告基因pmirGlo载体在细胞水平对miR-1623与wnt4的靶标关系进行了验证。结果表明:wnt4 mRNA的3'UTR存在miR-1623靶标结合位点(TGCCTG);相对于怀乡鸡,麒麟鸡皮肤中miR-1623表达水平显著升高(pwnt4 mRNA表达水平显著降低(pwnt4-3'UTR。本实验可为进一步揭示miRNA-1623在禽类毛囊生长发育过程中的作用提供参考。

关键词：麒麟鸡卷羽 miRNA-1623 wnt4 双荧光素酶

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wnt4、FoxN1在胸腺瘤中的表达及其与胸腺瘤恶性程度相关性研究

Wnt4、FoxN1在胸腺瘤中的表达及其与胸腺瘤恶性程度相关性研究

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作者：王海天津医科大学

学位级别：硕士

目的检测不同组织类型胸腺瘤中wnt4、FoxN1蛋白及mRNA的表达水平,分析wnt4、FoxN1在胸腺瘤发病中作用机制的相关性,并探讨二者与胸腺瘤的病理类型、Masaoka分期以及是否合并MG的关系,通过与Ki-67细胞增殖指数比较,了解二者的表达量与胸... 详细信息

目的检测不同组织类型胸腺瘤中wnt4、FoxN1蛋白及mRNA的表达水平,分析wnt4、FoxN1在胸腺瘤发病中作用机制的相关性,并探讨二者与胸腺瘤的病理类型、Masaoka分期以及是否合并MG的关系,通过与Ki-67细胞增殖指数比较,了解二者的表达量与胸腺瘤恶性程度的相关性。方法选取术前均未行化放疗治疗的56例胸腺瘤以及6例胸腺增生患者胸腺瘤或增生胸腺组织。应用免疫组织化学(SP法)检测wnt4、FoxN1与Ki-67在不同组织类型胸腺瘤及胸腺增生组织中蛋白的表达情况;应用实时定量PCR(RT-PCR)技术检测wnt4、FoxN1在不同组织类型胸腺瘤组织及胸腺增生组织中mRNA的表达情况。其相关结果应用SPSS17.0软件进行t检验和χ2检验显著性差异分析,相关性进行Spearman秩相关分析,P=0.05为检验水准。结果1、wnt4蛋白在胸腺增生中阳性表达率为16.7%(1/6),在胸腺瘤中的阳性表达率为64.3%(36/56),差别具有统计学意义(Pwnt4的阳性表达随着胸腺瘤的病理分型和Masaoka分期的进展而增高,差异有统计学意义(Pwnt4 mRNA随着胸腺瘤的病理分型和Masaoka分期的进展其相对表达量呈递增趋势,差别具有统计学意义(P48.2%(27/56),差别具有统计学意义(P4、wnt4、FoxN1与Ki-67的表达与胸腺瘤是否合并重症肌无力无相关性,无统计学差异(P>0.05)。5、wnt4、FoxN1与Ki-67三者的蛋白及mRNA在胸腺瘤中表达均呈正相关关系(Pwnt4、FoxN1在各型胸腺瘤组织中蛋白及mRNA水平的表达都高于胸腺增生组织,且与胸腺瘤的WHO病理分型、Masaoka分期密切相关,随着胸腺瘤的病理分型越高、临床分期越晚而逐渐增高,提示wnt4、FoxN1在胸腺瘤中的异常高表达可能是参与胸腺瘤的发生、发展的机制之一。二者在胸腺瘤中的表达呈正相关性,表明wnt4、FoxN1二者共同参与胸腺瘤的发生发展,wnt4基因在胸腺瘤中可能是通过FoxN1发挥作用;联合检测二者的表达有助于对胸腺瘤的发病机制、临床诊断、治疗及预后评估的进一步研究。2、Ki-67增值指数在胸腺瘤组织中的表达高于在胸腺增生组织中,且其在胸腺瘤的表达量随着胸腺瘤WHO病理分型及Masaoka临床分期进展而升高,提示Ki-67与胸腺瘤的恶性程度及预后相关。检测Ki-67增值指数的表达可协助于对胸腺瘤的恶性程度及预后的评估。3、Ki-67、wnt4、Fox N1的表达与胸腺瘤是否合并MG无统计学差异,提示Ki-67、wnt4、Fox N1的表达可能在胸腺瘤合并重症肌无力的发病机制及预后没有重要意义,有可能与研究样本量不足,或者是患者的就诊因素所影响,如某些合并胸腺瘤的重症肌无力患者在手术前已经服用抗肌无力药物控制病情等,还有待进一步研究。

关键词：胸腺瘤胸腺癌重症肌无力 wnt4 FoxN1 Ki-67

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