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Relationship between the Expression of RASSF1A Protein and Promoter Hypermethylation of RASSF1A Gene in Bladder Tumor

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2008年第2期28卷 182-184页

作者：胡建庭李宏召史涛坪马鑫王保军徐华艾星居正华王超张国玺张旭 Department of Urology Tongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Wuhan 430030 China

To investigate the relationship between the expression of RASSF1A protein and promoter hypermethylation of RASSF1A gene, RASSF1A protein expression was measured by western blotting in 10 specimens of normal bladder tissues and 23 specimens of bladder transitional cell carcinoma （BTCC）. The promoter methylation in BTCC and normal bladder tissues was detected by methylation-specific PCR （MSP）. The results showed that the expression level of RASSF1A protein was significantly lower in BTCC tissues than that in normal bladder tissues. However, it was not correlated with its clinical stages and pathological grades. The frequency of promoter methylation of RASSF1A gene was higher in BTCC tissues than that in normal bladder tissues. In 14 patients with the aberrant promoter methylation, 13 showed loss or low expression of RASSF 1A protein. It is concluded that RASSF1A gene promoter methylation may contribute to the low level or loss of RASSF1A protein expression, the inactivation of RASSF1A gene and the genesis of BTCC. But, it may bear no correlation with its clinical stages and pathological grades.

关键词： bladder transitional cell carcinoma DNA methylation western-blotting RASSF1A gene

大黄鱼β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达

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台湾海峡 2009年第1期28卷 13-18页

作者：余素红王玉桥陈新华厦门大学生命科学学院福建厦门361005 国家海洋局第三海洋研究所福建厦门361005 福建省农业科学院福建福州350002

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是一类高度多态的基因群,它广泛分布于各种脊椎动物体内,在启动特异性免疫应答中起关键作用.MHC根据结构分为I型和II型两种.β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)是MHCI型... 详细信息

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是一类高度多态的基因群,它广泛分布于各种脊椎动物体内,在启动特异性免疫应答中起关键作用.MHC根据结构分为I型和II型两种.β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)是MHCI型分子的轻链.本文根据大黄鱼β2m的表达序列标签(expressed sequence tags,EST)序列设计合成了特异性引物,利用RT-PCR技术从大黄鱼脾脏组织中克隆了β2m基因(Pscr-β2m);构建了含β2m基因的原核表达载体(pGEX4T-2-β2m),在0.1mmol/dm3IPTG诱导下重组β2m得到了表达;采用Sepharose 4B亲合层析纯化目的蛋白并制备了抗体;western-blotting分析证实了该抗体具有与天然大黄鱼脾脏组织中β2m蛋白反应的特性.这些结果为进一步研究鱼类β2m结构与功能的关系,以及制备MHCI类分子四聚体奠定基础.

关键词：大黄鱼 β2-微球蛋白克隆重组表达 western-blotting

不同生态型芦苇Rubisco免疫学特性差异

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西北植物学报 2006年第9期26卷 1764-1769页

作者：李卫霞王海波浦铜良兰州大学生命科学学院

以河西走廊荒漠地区不同生态型芦苇为研究材料,提取并纯化得Rubisco蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳将Rubisco大、小亚基分离,用Rubisco全酶蛋白及其大、小亚基分别注射昆明系雄性小白鼠制备抗体,经western-blotting鉴定结果表明:(1)水芦Rubisc... 详细信息

以河西走廊荒漠地区不同生态型芦苇为研究材料,提取并纯化得Rubisco蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳将Rubisco大、小亚基分离,用Rubisco全酶蛋白及其大、小亚基分别注射昆明系雄性小白鼠制备抗体,经western-blotting鉴定结果表明:(1)水芦Rubisco全酶抗体可与水芦、沙芦及菠菜Rubisco大亚基发生反应,而与小亚基均未见显色反应,且水芦显色最深,沙芦略浅,菠菜最浅;(2)水芦、沙芦Rubisco大亚基抗体可与水芦、沙芦、菠菜大亚基发生抗原交叉反应,且均不与小亚基发生反应,并且其与菠菜Rubisco大亚基的反应程度明显低于水芦和沙芦;(3)用与Rubisco大亚基抗体同样的制备方法,均未检测到水芦、沙芦Rubisco小亚基抗体的产生;(4)菠菜Rubisco全酶抗体可与菠菜、水芦、沙芦、水稻Rubisco大亚基均发生抗原交叉反应,但仅与其自身小亚基反应,且与菠菜Rubisco大亚基显色反应最深,水稻略浅,沙芦、水芦稍有反应.由此说明,水芦、沙芦Rubisco全酶蛋白及其大亚基免疫学特性差异较小,而与双子叶植物菠菜相比差异较大;水芦、沙芦Rubisco蛋白免疫化学决定簇的差异主要决定于小亚基上,且其小亚基不具有抗原活性或抗原活性较弱.

关键词： Rubisco western-blotting 生态型抗原活性

Prokaryotic Expression of Infectious Bronchitis Virus S1 Gene and Analysis of Biological Activity of Recombinant Protein

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Animal Husbandry and Feed Science 2010年第4期2卷 46-48页

作者： WANG Chun-li WANG Hong-jun ZHAO Quan College of Animal Science and Technology Jilin Agricultural University Changchun 130118 China Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences Beijing 100097 China

[Objective] To study the prokaryotic expression and antigenicity identification of S1 gene from avian infectious bronchitis virus （IBV）. [Method] The S1 gene was cloned into a pMD18-T vector to yield a recombinant plasmids pMD18-T-IBV-S1. Then S1 gene was inserted into the multiple cloning site of a prokaryotic expression vector pET-32a （＋）. The recombinant plasmid was transformed into E. coil BL21. The recombinant protein was induced by IPTG and measured by SDS-PAGE and western-blotting. [Result] The S1 gene was successfully expressed in E. coil BL21, the fusion proteins were about 66.0 kDa in a form of inclusion body. western-blotting test showed that the recombinant proteins could be identified by IBV polyclonal antibody. [ Conclusion] The recombinant proteins of S1 gene have the antigenicity, which lays a good foundation for further research on new generation vaccine of IBV.

关键词： Avian infectious bronchitis virus S1 gene Prokaryotic expression western-blotting

转染小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子稳定表达细胞株的筛选与鉴定

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生物医学工程学杂志 2004年第6期21卷 897-900页

作者：傅春华田聆魏于全阚兵李炯文艳君四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室与肿瘤中心

用脂质体包裹纯化的小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)重组表达质粒 ,体外转染小鼠结肠癌细胞系CT2 6 ,通过Zeosin抗性筛选获得抗性的单克隆肿瘤细胞株。提取细胞总RNA做半定量RT PCR ,鉴定出高表达msBlyS的稳定细胞克隆 ,进一步做W... 详细信息

用脂质体包裹纯化的小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)重组表达质粒 ,体外转染小鼠结肠癌细胞系CT2 6 ,通过Zeosin抗性筛选获得抗性的单克隆肿瘤细胞株。提取细胞总RNA做半定量RT PCR ,鉴定出高表达msBlyS的稳定细胞克隆 ,进一步做western blotting鉴定和生物活性测定。转染后得到 8个单克隆抗性肿瘤细胞株 ,其中有 5个经RT PCR扩增出msBlyS目的条带。western blotting显示该克隆株细胞裂解物可与抗msBlyS的抗体结合 ,在杂交膜上形成一条与预期蛋白分子量一致的条带。生物活性测定显示细胞分泌上清可共刺激(Costimulate)体外培养的B淋巴细胞增殖 ,这表明已成功转染并筛选出msBlyS稳定表达小鼠结肠癌细胞株 ,可以进一步用于msBlyS抗肿瘤作用的观察和研究。

关键词：小鼠体外转染 B淋巴细胞刺激因子稳定表达肿瘤细胞株 western-blotting 单克隆蛋白分子细胞裂解重组表达质粒

牙鲆生长激素基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

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高技术通讯 2005年第3期15卷 99-104页

作者：臧晓南刘滨张学成茅云翔隋正红中国海洋大学海洋生命学院青岛266003

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳... 详细信息

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18.3%.该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性.

关键词：融合表达载体融合蛋白大肠杆菌 IVIG western-blotting 成熟肽基因逆转录聚合酶链式反应牙鲆生长激素基因 GH基因

日本囊对虾原肌球蛋白的原核表达、抗体制备以及组织表达分析

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水产学报 2012年第6期36卷 879-883页

作者：韩芳王志勇王晓清湖南农业大学动物科技学院集美大学水产学院

食物过敏是人类常见的一种过敏性疾病,主要由食物中的蛋白质引起。原肌球蛋白(tropomyosin,TPM)是食用虾蟹等甲壳动物引起过敏反应的主要致敏物质。研究从日本囊对虾肌肉组织中克隆了TPM基因,进行了原核表达和蛋白质纯化,并进一步制备... 详细信息

食物过敏是人类常见的一种过敏性疾病,主要由食物中的蛋白质引起。原肌球蛋白(tropomyosin,TPM)是食用虾蟹等甲壳动物引起过敏反应的主要致敏物质。研究从日本囊对虾肌肉组织中克隆了TPM基因,进行了原核表达和蛋白质纯化,并进一步制备了相应的抗体。western-blotting分析表明原肌球蛋白在日本囊对虾组织中普遍表达,并且肌肉组织中表达量最高而鳃和皮肤组织中表达量最低。研究结果为对虾过敏性疾病的诊断和治疗以及脱敏食品开发等奠定了理论基础。

关键词：日本囊对虾原肌球蛋白表达抗体制备 western-blotting

猪2型圆环病毒广东株ORF2基因在大肠埃希氏菌中的表达

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中国兽医科技 2004年第12期34卷 3-6页

作者：祝卫国宋长绪王贵平杨增岐黄忠李春玲王旭荣西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 广东省农业科学院兽医研究所广东广州510640

应用PCR扩增猪 2型圆环病毒广东株ORF2后部一段基因 ,将PCR产物用KpnⅠ和HindⅢ酶切后与同样处理过的 pBAD/gⅢB载体连接 ,转化TOP1 0细胞后挑取阳性克隆 ,酶切鉴定和测序后 ,用L 阿拉伯糖诱导 ,经SDS PAGE和western blotting分析 ,表明... 详细信息

应用PCR扩增猪 2型圆环病毒广东株ORF2后部一段基因 ,将PCR产物用KpnⅠ和HindⅢ酶切后与同样处理过的 pBAD/gⅢB载体连接 ,转化TOP1 0细胞后挑取阳性克隆 ,酶切鉴定和测序后 ,用L 阿拉伯糖诱导 ,经SDS PAGE和western blotting分析 ,表明ORF2基因在大肠埃希氏菌中得到了表达 ,表达的多肽为 2 8ku。

关键词： ORF2 广东株圆环病毒酶切 SDS-PAGE 大肠埃希氏菌 PCR扩增表达基因 western-blotting

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白果过敏蛋白及其过敏原性研究

食品科学 2011年第7期32卷 16-20页

作者：李莹莹吴彩娥杨剑婷范龚健南京林业大学森林资源与环境学院江苏南京210037 安徽科技学院食品药品学院安徽凤阳233100

对白果的主要过敏蛋白进行鉴定,并对其过敏原性进行分析。以SDS-PAGE和western-blotting分析鉴定白果蛋白提取液中的蛋白质组分和过敏蛋白,通过间接ELISA法检测过敏小鼠血清中sIgE的效价。白果的蛋白质条带主要有13条,其中以21kD和32kD... 详细信息

对白果的主要过敏蛋白进行鉴定,并对其过敏原性进行分析。以SDS-PAGE和western-blotting分析鉴定白果蛋白提取液中的蛋白质组分和过敏蛋白,通过间接ELISA法检测过敏小鼠血清中sIgE的效价。白果的蛋白质条带主要有13条,其中以21kD和32kD含量最多。western-blotting分析结果表明,白果蛋白中存在3条过敏原蛋白,分子质量分别为21、32、36kD。当酶标二抗稀释度为1:1000,白果蛋白包被质量浓度为50μg/mL,间接ELISA测得过敏小鼠血清中sIgE的效价为1:6400。对白果蛋白进行分析鉴定,明确了白果中存在的过敏原蛋白。

关键词：白果过敏蛋白 SDS-PAGE western-blotting 间接ELISA